大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子（Kunitz trypsin inhibitor,KTI）单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度（IC50）为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到11 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试剂溶液
•   1.2 主要仪器
•   1.3 试验动物及骨髓瘤细胞
•   1.4 小鼠免疫及多抗血清鉴定
•   1.5 细胞融合与筛选
•   1.6 KTI mAb的大量制备及免疫学特性鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 小鼠多抗血清的鉴定
•   2.2 KTI mAb的制备
•   2.3 KTI mAb效价的测定
•   2.4 KTI mAb亚型的鉴定
•   2.5 KTI mAb亲和常数的测定
•   2.6 KTI mAb敏感性的鉴定
•   2.7 KTI mAb特异性的鉴定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王耀,李燕虹,曹金博,孙亚宁,邢云瑞,陈秀金,邓瑞广,胡骁飞

关键词: 胰蛋白酶抑制因子,单克隆抗体,免疫学特性

来源: 食品与机械 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 河南科技大学食品与生物工程学院,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

基金: 国家自然科学基金(编号:31702218),河南省自然科学基金(编号:182300410038),河南省科技攻关项目(编号:182102110445,182102310230),河南省高等学校重点科研项目(编号:18B550001),河南省动物免疫学重点实验室开放课题(编号:PKLAI20170603),河南科技大学大学生研究训练计划项目(编号:2018155)

分类号: TS201.2

DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.08.011

页码: 59-63

总页数: 5

文件大小: 585K

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