导读:本文包含了徒手克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:徒手克隆,5-Aza-CdR,基因,表达模式
徒手克隆论文文献综述
陆杏蓉,李志鹏,孙俊铭,吕玲燕,许钟峯[1]（2016）在《DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响》一文中研究指出本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet3的表达在2细胞时期达到顶峰,Dnmt1和Tet2基因的表达随HMC胚胎发育而下降,而Tet1基因随HMC胚胎发育表达上升。使用5-Aza-CdR处理重构胚没有改变Oct4、Tet1和Tet3基因的表达模式,使Nanog基因在胚胎发育初期表达增加,Dnmt1和Tet2基因在胚胎发育初期表达降低。研究初步确立了Oct4、Nanog、Dnmt1和Tets基因在HMC胚胎的表达模式,5-Aza-CdR对重构胚的处理可对HMC胚胎的甲基化模式产生影响。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2016年09期）
熊强,董宜春,牛英杰,潘登科,刘红林[2]（2014）在《徒手克隆过程中的技术环节对体细胞克隆效率的影响》一文中研究指出随着体细胞核移植技术的发展,如何快速高效的获取克隆后代已然成为科研工作者们关注的重点。本文针对受体母猪受胎率和单胎产仔数较低的问题,以本实验室徒手克隆技术平台为出发点结合多年的实验经验及实验结果,从卵巢采集、徒手克隆过程、受体母猪准备、胚胎移植和受体母猪饲养管理等方面归纳总结克隆猪各个技术环节的要点。系统的介绍了影响猪体细胞核移植效率的因素及改善和优化措施,从而在胚胎移植过程中可稳定、高效的获得克隆小猪。为克隆技术的推广和应用提供技术支持。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2014年11期）
熊强[3]（2013）在《猪徒手克隆技术的优化及Tet1在早期胚胎发育中的变化》一文中研究指出随着生物技术的不断发展,体细胞克隆作为一种技术手段已经被广泛应用于转基因动物、物种保护、家畜繁育、异种器官移植以及疾病模型的研究,但是克隆效率低下一直阻碍这一技术发展。一般认为克隆效率低下与重构胚不正确或者不完全的重组而导致的错误表观修饰相关,其中最主要的就是DNA甲基化异常和组蛋白修饰错误。因此如何提高克隆效率对推动这一技术发展有着重要的意义。1.徒手克隆技术的优化为提高徒手克隆效率,我们在徒手克隆过程中对克隆胚重构以及胚胎移植都进行了优化。结果发现优化后的囊胚率能达到40%左右,并将235枚桑椹胚及囊胚移植到3头自然发情后4到5天的受体母猪子宫角内,并使两头受体母猪成功怀孕,虽然1头母猪中途不幸流产,但另1头母猪在妊娠后第114天自然分娩产下8只小猪,相对与其他实验室的克隆产子率明显提高。2.卵母细胞成熟过程及孤雌激活后胚胎发育中Tet1的免疫荧光染色实验选取成熟0h(GV)、12h、24h、36h和MⅡ时期脱完卵丘的卵母细胞以及孤雌激活(物理+化学)后7.5h、12h、15h、24h和2-cell(36h)胚胎用PFA固定后进行免疫荧光染色。结果发现在卵母细胞成熟过程中及PA后胚胎早期发育过程中,Tet1在不同阶段出现不同的表达。结果表明Tet1可能在卵母细胞成熟过程及孤雌激活后胚胎发育中起着调控作用,但有待进一步研究。3.5-aza-CdR对卵母细胞成熟过程中和胎儿成纤维细胞甲基化相关基因表达的影响实验对成熟培养的卵母细胞进行不同浓度5-aza-CdR处理32-34h和传代培养24h的梅山猪胎儿成纤维细胞进行不同浓度5-aza-CdR处理48h后收样提RNA反转录并进行定量PCR。结果发现无论是卵母细胞还是胎儿成纤维细胞经不同浓度5-aza-CdR后不仅Dnmts (?)的表达水平有显着变化,Tet蛋白家族的表达水平也发生显着变化,结果表明Dnmts与Tet蛋白家族可能存在互作。(本文来源于《南京农业大学》期刊2013-06-01）
杨春艳,庞春英,郑海英,黄芬香,王建[4]（2012）在《水牛徒手克隆胚胎培养及冷冻条件的优化》一文中研究指出本试验利用微滴、微穴和平板培养系统对徒手克隆(hand-made clone,HMC)重组胚进行体外培养;采用了40%EG(ethylene glycol,EG)、25%EG+25%DMSO(dimethylsulphoxide,DMSO)和20%EG+20%DMSO+0.5mol/L蔗糖作为玻璃化冷冻液对HMC囊胚进行了超低温冷冻;并且比较了HMC与传统核移植的胚胎生产效率及囊胚冷冻存活率。结果表明,微穴系统的卵裂率要显着高于平板系统(P<0.05),极显着高于微滴系统(P<0.01);且微穴系统的囊胚率(40.0%)极显着高于平板(19.8%)和微滴系统(8.3%)(P<0.01)。采用20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻保护剂时HMC囊胚存活率极显着高于40%EG(P<0.01);HMC重组胚的融合率和囊胚率均高于传统核移植法(P<0.05;P<0.01),而HMC囊胚的冷冻存活率与传统核移植生产的囊胚没有显着差异。以上结果说明水牛HMC可以替代传统核移植法生产克隆胚胎,微穴体系最适合水牛HMC胚胎的体外培养,且采用20%EG+20%DMSO+0.5mol/L蔗糖对HMC囊胚进行玻璃化冷冻可以取得良好的冷冻效果。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2012年11期）
[5]（2012）在《江苏省诞生8只首例徒手克隆猪仔》一文中研究指出近日,一胎8头体细胞克隆小猪在南京农业大学诞生,这是江苏省首例利用徒手克隆核移植技术生产的克隆猪。徒手克隆技术指利用一般的显微镜,手工把卵切成两半、去核,然后再将不带核的卵重新组合。与一般的克隆技术比,徒手克隆简便易学,成本低,效率高,正逐渐成为生产转基因克隆猪、牛、羊等动物的主流技术。利用该技术受孕的母猪日前自然分娩产下8只小猪,其中5只成活。(本文来源于《北方牧业》期刊2012年20期）
赵烨烨,谈洁[6]（2012）在《江苏首例徒手克隆猪诞生》一文中研究指出本报讯（通讯员 赵烨烨 谈洁） 9月15日晚上10时45分，一胎8头体细胞克隆小猪诞生，这是江苏首例利用徒手克隆核移植技术生产的克隆猪，这标志着南京农业大学利用徒手克隆技术生产克隆猪取得重大突破。 据负责此次研究的南京农业大学动物科技学(本文来源于《南京日报》期刊2012-09-30）
杨春艳,庞春英,郑海英,黄芬香,王建[7]（2012）在《水牛徒手克隆胚胎培养及冷冻条件的优化》一文中研究指出引言徒手克隆对仪器和技术人员水平要求低,而且有工厂化生产的巨大潜力,该技术已成功应用于多种动物的体细胞克隆。本实验室之前已经也已建立了水牛徒手克隆技术平台,而本研究旨在优化HMC胚胎的培养和冷冻系统,并比较HMC与传统核移植方法的胚胎生产效率和胚胎冷冻存活率。以期探讨HMC在实际操作中大批量生产克隆胚胎的可行性,提高HMC囊胚的冷冻存活率,进而推进HMC在核移植和转基因领域的应用。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集》期刊2012-08-01）
黄章虎,任艳萍,谭世俭[8]（2011）在《徒手克隆工具自制及改进》一文中研究指出徒手克隆技术(handmade somatic cell cloning,HMC)解决了由于昂贵设备对核移植技术应用的制约问题。通过徒手克隆刀的自制,不但进一步节省了成本,且更能符合使用者的习惯,提高总的切割效率。试验结果表明,利用自制克隆刀进行半卵法去核,可以达到每小时切割496枚卵母细胞的切割速度和88.14%的存活率;自制聚集针具有制作简单,可以打磨、效果好等特点,可以进一步简化和降低徒手克隆技术的成本,提高克隆效率。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2011年05期）
杨春艳,庞春英,李日聪,郑海英,黄芬香[9]（2011）在《水牛徒手克隆的初步研究》一文中研究指出徒手克隆是近年发展起来的一种手工化的核移植技术。本试验探讨了不同的去核方法、融合方法和供体细胞类型对水牛HMC效率的影响。试验结果表明,CB处理法去核与荧光染色法去核相比,去核效率及之后的重组胚发育能力均无显着差异(P>0.05);一步法的融合率极显着高于两步法(P<0.01),而两种方法构建的重组胚发育能力则无显着差异(P>0.05);利用卵丘细胞所构建的HMC胚胎的融合率极显着高于耳皮肤成纤维细胞(P<0.01),但重组胚的发育效果差异不显着(P>0.05)。说明利用卵丘细胞作为HMC的供体细胞,采用CB处理法去核和一步融合的方法进行徒手克隆,其生产核移植胚胎效果较好。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2011年04期）
黄章虎,任艳萍,谭世俭,孙洪亮[10]（2010）在《徒手克隆工具的自制及改进》一文中研究指出徒手克隆技术(HMC)解决了由于昂贵设备对核移植技术应用的制约问题。通过徒手切割去核刀的自制,不但进一步节省了成本,而且更能符合使用者的习惯,提高了总的切割效率。实验结果表明,利用自制切割刀半卵法去核,可以达到每小时切割496枚卵母细胞的切割速度和有88.14%的半卵细胞存活率;自作聚集针具有制作简单,可以打磨、效果好等特点,可以进一步简化和降低徒手克隆技术的成本,提高克隆效率。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）》期刊2010-08-01）
徒手克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
随着体细胞核移植技术的发展,如何快速高效的获取克隆后代已然成为科研工作者们关注的重点。本文针对受体母猪受胎率和单胎产仔数较低的问题,以本实验室徒手克隆技术平台为出发点结合多年的实验经验及实验结果,从卵巢采集、徒手克隆过程、受体母猪准备、胚胎移植和受体母猪饲养管理等方面归纳总结克隆猪各个技术环节的要点。系统的介绍了影响猪体细胞核移植效率的因素及改善和优化措施,从而在胚胎移植过程中可稳定、高效的获得克隆小猪。为克隆技术的推广和应用提供技术支持。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
徒手克隆论文参考文献
[1].陆杏蓉,李志鹏,孙俊铭,吕玲燕,许钟峯.DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响[J].中国畜牧兽医.2016
[2].熊强,董宜春,牛英杰,潘登科,刘红林.徒手克隆过程中的技术环节对体细胞克隆效率的影响[J].畜牧与兽医.2014
[3].熊强.猪徒手克隆技术的优化及Tet1在早期胚胎发育中的变化[D].南京农业大学.2013
[4].杨春艳,庞春英,郑海英,黄芬香,王建.水牛徒手克隆胚胎培养及冷冻条件的优化[J].中国畜牧兽医.2012
[5]..江苏省诞生8只首例徒手克隆猪仔[J].北方牧业.2012
[6].赵烨烨,谈洁.江苏首例徒手克隆猪诞生[N].南京日报.2012
[7].杨春艳,庞春英,郑海英,黄芬香,王建.水牛徒手克隆胚胎培养及冷冻条件的优化[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集.2012
[8].黄章虎,任艳萍,谭世俭.徒手克隆工具自制及改进[J].中国畜牧兽医.2011
[9].杨春艳,庞春英,李日聪,郑海英,黄芬香.水牛徒手克隆的初步研究[J].中国畜牧兽医.2011
[10].黄章虎,任艳萍,谭世俭,孙洪亮.徒手克隆工具的自制及改进[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）.2010