导读:本文包含了感受态转化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:大肠杆菌,感受态细胞,质粒,转化
感受态转化论文文献综述
黄学娟,张金迪,张壮,李裕静,曹雪松[1]（2017）在《一种优化的大肠杆菌感受态细胞制备及转化方法》一文中研究指出Silwet L-77是一种非离子型的表面活性剂,常用于植物的转化。本研究发现,Silwet L-77的加入也可以显着地提高大肠杆菌的转化效率。同时,我们比较了不同培养温度、不同培养浓度(OD_(600)值)及不同冷冻保护剂对感受态细胞转化效率的影响。我们发现,28℃培养E.coli至OD_(600)值为0.55~0.6之间时制备感受态细胞,利用9%的DMSO做为冷冻保护剂冷冻保存感受态细胞,转化时加入0.001 5%~0.002%的Silwet L-77,可以获得最高的转化效率。总之,该研究进一步优化了大肠杆菌感受态细胞的制备及转化方法。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2017年12期）
覃鸿妮,张兰兰[2]（2016）在《载体浓度和感受态对大分子载体转化效率的影响》一文中研究指出[目的]研究载体量和感受态对阳性克隆率的影响。[方法]利用引物拼接PCR技术,自行设计26条引物合成一个835 bp的目的基因,将该基因与约20 kb的大分子载体连接构成重组质粒。在1 500 ng目的基因底物量的基础上,设置50、100、150、200、250、300 ng 6个梯度载体量,得到的重组反应产物再转化入Top10F'、DH5α、Stbl3、Epi400、JM108、SCSI 6种不同的感受态中,组成36个试验组合。[结果]不同载体量阳性克隆率由大到小依次为200、250、300、150、100、50 ng,200 ng的阳性克隆率最高可达75%,平均达28.5%。不同感受态细胞阳性克隆率由大到小依次为Stbl3、Top10F'、DH5α、JM108、Epi400、SCSI,Stbl3在任何载体浓度下均高于其他感受态,平均阳性克隆率为42.4%。[结论]载体量和感受态均明显影响阳性克隆率,最佳组合为200 ng的载体分子量配合Stbl3感受态,阳性克隆率可达75%。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2016年17期）
孙尚琛[3]（2016）在《超声波介导质粒pUC19转化大肠杆菌DH5α感受态细胞转化方法及机制的研究》一文中研究指出微生物生物转化(Biological Transformation)是指受体菌接受来自供体菌的DNA片段,通过交换整合到自己的基因组中,从而获得部分新的遗传性状的现象。目前,对于转化方法的研究已基于成熟,已应用于科研的转化方法有化学转化法、电转化法、基因枪转化法、声孔转化法等。但对于转化发生机制的研究还无系统的概述,这不仅涉及外源DNA分子的性质,更与受体菌的性质息息相关。本实验利用超声波介导质粒p UC19转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α。通过对超声波介导外源DNA转化宿主细胞模型的建立、E.coli DH5α细胞壁成分肽聚糖与金属离子间的吸附关系、超声波处理前后E.coli DH5α细胞膜通透性的变化、生物大分子物质含量的变化以及E.coli DH5α细胞外膜蛋白mrd B基因突变株的构建方面进行研究,以期揭示转化发生的机制。研究结果表明,在二价金属离子环境中,适宜条件的超声波可介导外源DNA转化进入宿主细胞。在本实验中当E.coli DH5α菌液OD600=0.4~0.6,超声功率为40 W时,在35℃下处理E.coli DH5α和质粒p UC19的混合液25 s,质粒p UC19转化E.coli DH5α细胞的转化效率最大可以达到1.006×107 CFU/μg DNA。对超声波处理前后E.coli DH5α细胞膜通透性的变化研究结果显示,在最佳转化条件下细胞膜通透性的变化是未经超声波处理的细胞膜通透性的10倍,然而不同超声波条件下的转化效率的变化与细胞膜通透性的变化不成正比,也与E.coli DH5α细胞存活率的变化不成正比,这是因为在最佳转化条件菌液OD600值为0.4~0.6、超声波功率为40 W、在温度为35℃下处理25 s,超声波作用对质粒DNA的完整性没有损伤,对宿主细胞的破坏也很小,但超出此范围后,质粒DNA的完整性受到破坏,同时宿主细胞由于其自身的调控与修复导致转化率的不一致。E.coli DH5α细胞壁成分肽聚糖与金属离子、DNA互作结果显示肽聚糖对金属离子的吸附没有专一性,无论是一价(Na+)金属离子还是二价(Mg~(2+)、Ca~(2+))金属离子,肽聚糖均可与其发生吸附作用,但与DNA不能发生反应,证明在转化发生时必不可少的二价金属离子(Ca~(2+))有一部分与细胞壁成分肽聚糖发生了反应,为外源DNA进入宿主细胞提供了离子通道,但尚不能证明肽聚糖的存在决定转化的发生。对超声波处理前后宿主细胞E.coli DH5α中的生物大分子物质检测以及扫描电子显微镜与原子力显微镜观察结果显示,超声波产生的气穴与声穴效应改变了宿主细胞的膜通透性、胞内结构等,导致胞内大分子物质透过细胞膜向胞外溢出,致使超声波处理后的细胞出现褶皱、形态不均等现象。这一现象为外源DNA的进胞提供了外源动力。本研究通过Red重组系统构建了E.coli DH5α外膜蛋白mrd B基因的突变株,但关于mrd B基因在E.coli DH5α生存与转化过程中发挥的功能还需进一步研究。综合以上所有结果可得出结论:宿主细胞内外膜通透性的改变是外源DNA进入宿主细胞的基础条件;二价金属离子与细胞壁成分肽聚糖的相互作用为外源DNA进入宿主细胞内提供了离子通道;同一条件的超声波处理下的转化效率与宿主细胞生存率无直接关系;超声波处理造成宿主细胞胞内大分子物质的外溢,这也为外源DNA的进入提供了通道与基础。本研究通过对E.coli DH5α细胞生理特性的研究已逐步摸索清楚决定转化发生的相关基础条件,同时构建了E.coli DH5α外膜蛋白mrd B基因的突变株。相信随着对分子生物学的不断研究,转化发生的机理将逐步被发掘,以此更好地为科研、生产服务。(本文来源于《兰州理工大学》期刊2016-04-18）
王永刚,孙尚琛,马雪青,秦健宇,冷非凡[4]（2016）在《Ca~(2+)和Sr~(2+)诱导大肠埃希菌感受态细胞的形成及转化的影响》一文中研究指出为研究金属离子诱导下感受态细胞形成的机理及揭示转化发生的机制,分别用Ca~(2+)和Sr~(2+)(0~140mmol/L)制备大肠埃希菌感受态细胞并转化。研究结果表明,不同浓度的Ca~(2+)和Sr~(2+)诱导的感受态细胞的效价不同,两种金属离子对大肠埃希菌细胞内外膜的通透性均有较大影响,但细胞内外膜的改变程度与转化率无直接关系;电镜结果显示,未处理的细胞呈簇聚集发生粘连现象,感受态细胞整体呈分散状态,局部发生聚集,而转化后的细胞独立存在,边缘异常清晰。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2016年02期）
代军[5]（2015）在《大肠杆菌感受态细胞制备及转化条件优化》一文中研究指出针对大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,以p GM-T、p MD-18T为载体,在传统Ca Cl2方法的基础上,对制备及转化条件进行了改进和优化,结果表明,42℃热激的最佳时间为100 s,最适冷却时间为6~8 min。本研究将常规的50 m L离心管改成了1.5 m L EP管,有效降低了分装过程中可能产生的污染风险,简化了试验程序,提高了转化效率。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2015年04期）
王洋,由田,潘超,果马,葛菁萍[6]（2014）在《不同感受态细胞制备方法对副干酪乳杆菌转化效率的影响》一文中研究指出目的:研究不同感受态细胞制备方法对副干酪乳杆菌转化效率的影响。方法:优化并比较未处理、青霉素处理法、溶菌酶处理法及NaCl处理法制备的感受态细胞的转化效果。结果:优化各处理法获得的条件分别为:未处理法OD600为0.8,甘氨酸质量浓度为3 g/mL,青霉素终质量浓度为12.5μg/mL,溶菌酶质量浓度为10 mg/mL,NaCl浓度为0.7 mol/L。不同处理方法获得的感受态细胞转化效率差异显着(P<0.05),转化效率由高到低依次为青霉素处理法【(1.64±0.05)×103cfu/μg质粒】、甘氨酸处理法【(1.51±0.03)×103 cfu/μg质粒】、NaCl处理法【(1.20±0.04)×103cfu/μg质粒】、溶酶菌处理法【(0.56±0.02)×103 cfu/μg质粒】、未处理法【(0.43±0.01)×103 cfu/μg质粒】。结论:青霉素、甘氨酸及NaCl处理法制备的感受态细胞能够有效提高副干酪乳杆菌转化效率,为副干酪乳杆菌遗传转化体系的建立奠定基础。(本文来源于《中国食品学报》期刊2014年09期）
杜艳芬[7]（2014）在《鲍曼不动杆菌医院感染流行病学调查及自然转化感受态相关基因研究》一文中研究指出目的：了解某院近年来鲍曼不动杆菌的感染分布特点及耐药性变迁，为临床合理用药提供科学依据；研究鲍曼不动杆菌自然转化感受态相关基因的表达情况，有助于了解鲍曼不动杆菌获得外源DNA元件的机制，为控制多重耐药菌感染提供新的治疗思路。方法：回顾性分析某院2009年1月-2012年12月住院患者送检标本检出的鲍曼不动杆菌的科室分布、标本来源及对常用抗菌药物的耐药性。利用鲍曼不动杆菌ATCC17978与自然转化研究的模式菌不动杆菌属菌BD413及嗜热栖热菌HB27的全基因组序列进行比较基因组学研究，获取鲍曼不动杆菌可能的感受态相关基因。采用逆转录PCR方法和Real-timePCR方法，检测鲍曼不动杆菌感受态相关基因comB随生长期变化的表达特征，以及研究在不同刺激条件（如外源DNA、抗菌药物以及铁离子限制）下，鲍曼不动杆菌感受态相关代表基因comB、comP、pilC、pilU、comM和comEA的表达情况。结果：共收集的1140株鲍曼不动杆菌，主要感染科室为神经科、ICU、老年科及呼吸内科，检出率分别为28.2%、23.6%、16.8%及9.8%；在痰液中检出率最高，占94.9%；鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率相对稳定且仍然较低，为14.1%；对包括碳青霉烯类在内的其余临床常用抗菌药物耐药率2009-2011年明显上升，2012年虽较2011年有所下降，但仍然较高。获得了18个鲍曼不动杆菌可能的感受态相关基因，包括菌毛合成相关基因A1S_3166（comE）、A1S_3167（comC）、A1S_3165（comF）、A1S_3168（comB）和A1S_3177（comP）；Ⅳ型前菌毛蛋白多肽酶编码基因A1S_0327（pilD）、A1S_0328（pilC）和A1S_0329（pilB）；运动功能蛋白编码基因：A1S_0896（pilU）和A1S_0897（pilT）；外源DNA受体蛋白编码基因A1S_0582（comEA）；膜通道蛋白编码基因A1S_2610（comEC）以及内膜相关转运蛋白编码基因A1S_3195（comM）、A1S_3004（pilN）和A1S_3193（pilO）等。鲍曼不动杆菌感受态相关基因comB表达是一种生长阶段依耐型表达。外源DNA不能诱导感受态相关基因表达。在MMC刺激下，感受态相关基因表达明显上调；而在氯已定刺激下，鲍曼不动杆菌感受态相关基因的表达情况，并没有出现明显差异。铁离子限制条件下各种感受态相关基因都有上调表达，但表达程度不如MMC刺激。结论：医院分离的鲍曼不动杆菌耐药情况严重，呈逐年上升趋势；感染科室分布以神经科和ICU为主；痰液中的分离率最高。应重视对鲍曼不动杆菌医院感染及耐药性的动态监测，根据药敏结果合理选用抗菌药物，以有效控制多重耐药菌的爆发流行。鲍曼不动杆菌中存在可能的感受态相关基因集合，而且这些基因呈生长曲线依赖型表达。自然转化由细菌自身的调控通路调控，与外源DNA的存在与否无关。DNA毒性抗菌药物的刺激会诱导鲍曼不动杆菌感受态相关基因的明显表达增加，而其他物理杀菌剂，并不能诱导感受态相关基因表达。生长环境营养限制也会诱导鲍曼不动杆菌自然转化感受态相关基因的表达。(本文来源于《泸州医学院》期刊2014-04-01）
荀安营,李娜,邹兵,王成文,李迎雪[8]（2013）在《双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究》一文中研究指出介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法,并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究,菌体在A600为0.3~0.5时收集以制备感受态细胞,制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103CFU/μg DNA。(本文来源于《中国微生态学杂志》期刊2013年10期）
赵峰,张颖,李慧,史荣久,韩斯琴[9]（2013）在《3种假单胞菌CaCl_2法感受态细胞制备及转化条件》一文中研究指出假单胞菌因其生境和代谢类型的多样性,在污染环境修复、生物转化、生物防治等领域具有广阔的应用潜力;外源基因的导入是假单胞菌遗传改造的重要环节,而感受态细胞的制备和转化方法的建立是导入外源基因的重要方法学基础.本研究以从石油污染土壤中分离筛选的假单胞菌属的3个菌株Pseudomonas putida TS11、P.stutzeri DNB、P.mendocina JJ12为对象,通过3因素4水平正交实验设计,研究了不同CaCl2浓度、热激时间及复苏时间对不同假单胞菌感受态细胞制备及转化效率的影响.结果表明:CaCl2浓度是影响假单胞菌转化效率的最主要因素(P<0.05),且在制备感受态细胞之前用无菌蒸馏水多次洗涤菌体细胞,转化率明显提高.3种假单胞菌的CaCl2转化优化条件分别为:100mmol·L-1CaCl2,热激3min,复苏1.5h;50mmol·L-1CaCl2,热激6min,复苏1.5h;75mmol·L-1CaCl2,热激4.5min,复苏0.5h.在上述转化条件下,3种假单胞菌的外源质粒转化效率均达到105个转化子·μg-1DNA水平.(本文来源于《应用生态学报》期刊2013年03期）
许彤,刘钦松,张丛丛,刘孟刚[10]（2012）在《高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化》一文中研究指出采用不同的转化液制备大肠杆菌(Escherichia coli)JM109感受态细胞,并进行pUC18质粒的转化,考察细菌生长状态、转化液、转化的热激时间和转化后所用培养基对转化率的影响。结果表明,菌液A600 nm为0.705时采用TB转化液制备感受态细胞,在42℃热激45 s,转化后采用SOC培养基振荡培养,转化效率最高,可达8.59×108CFU/μg质粒。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2012年21期）
感受态转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]研究载体量和感受态对阳性克隆率的影响。[方法]利用引物拼接PCR技术,自行设计26条引物合成一个835 bp的目的基因,将该基因与约20 kb的大分子载体连接构成重组质粒。在1 500 ng目的基因底物量的基础上,设置50、100、150、200、250、300 ng 6个梯度载体量,得到的重组反应产物再转化入Top10F'、DH5α、Stbl3、Epi400、JM108、SCSI 6种不同的感受态中,组成36个试验组合。[结果]不同载体量阳性克隆率由大到小依次为200、250、300、150、100、50 ng,200 ng的阳性克隆率最高可达75%,平均达28.5%。不同感受态细胞阳性克隆率由大到小依次为Stbl3、Top10F'、DH5α、JM108、Epi400、SCSI,Stbl3在任何载体浓度下均高于其他感受态,平均阳性克隆率为42.4%。[结论]载体量和感受态均明显影响阳性克隆率,最佳组合为200 ng的载体分子量配合Stbl3感受态,阳性克隆率可达75%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
感受态转化论文参考文献
[1].黄学娟,张金迪,张壮,李裕静,曹雪松.一种优化的大肠杆菌感受态细胞制备及转化方法[J].基因组学与应用生物学.2017
[2].覃鸿妮,张兰兰.载体浓度和感受态对大分子载体转化效率的影响[J].安徽农业科学.2016
[3].孙尚琛.超声波介导质粒pUC19转化大肠杆菌DH5α感受态细胞转化方法及机制的研究[D].兰州理工大学.2016
[4].王永刚,孙尚琛,马雪青,秦健宇,冷非凡.Ca~(2+)和Sr~(2+)诱导大肠埃希菌感受态细胞的形成及转化的影响[J].微生物学杂志.2016
[5].代军.大肠杆菌感受态细胞制备及转化条件优化[J].江苏农业科学.2015
[6].王洋,由田,潘超,果马,葛菁萍.不同感受态细胞制备方法对副干酪乳杆菌转化效率的影响[J].中国食品学报.2014
[7].杜艳芬.鲍曼不动杆菌医院感染流行病学调查及自然转化感受态相关基因研究[D].泸州医学院.2014
[8].荀安营,李娜,邹兵,王成文,李迎雪.双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究[J].中国微生态学杂志.2013
[9].赵峰,张颖,李慧,史荣久,韩斯琴.3种假单胞菌CaCl_2法感受态细胞制备及转化条件[J].应用生态学报.2013
[10].许彤,刘钦松,张丛丛,刘孟刚.高效JM109感受态细胞制备及转化条件的优化[J].湖北农业科学.2012