Txnip基因siRNA慢病毒表达质粒构建及促进猪前体脂肪细胞分化

论文摘要

硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin interacting protein, Txnip）是一种氧化还原调节蛋白质,与硫氧还蛋白结合并抑制其活性,调节细胞氧化还原状态,影响细胞多种生理过程,然而其在猪脂肪细胞分化中的作用尚不明确。本文设计合成3对靶向猪Txnip基因的shRNA寡核苷酸,分别连接于重组慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+Puro构建siRNA表达质粒。测序验证后,与包装质粒共转染293T细胞,获得滴度1×108 pfu/mL的慢病毒干扰质粒。以MOI值100转染原代培养猪前体脂肪细胞,转染率均达80%以上,其中Txnip-shRNA-2转染细胞Txnip基因沉默率达75%。转染Txnip-shRNA-2的猪前体脂肪细胞用成脂分化培养液诱导后,每隔1 d检测细胞成脂分化及相关基因表达。结果发现,其分化比阴性对照质粒转染或未转染细胞显著增强（P<0.05）,PPARγ和FAS mRNA表达水平显著提高（P<0.05）。本文构建siRNA慢病毒表达质粒能有效干扰猪Txnip基因表达,Txnip表达沉默可通过上调PPARγ表达促进猪前体脂肪细胞分化。本研究提示,Txnip可能是猪脂肪细胞分化的抑制因子。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 Txnip-shRNA慢病毒载体构建及鉴定
•   1.3 慢病毒包装及滴度检测
•   1.4 猪前体脂肪细胞的分离培养
•   1.5 Txnip-shRNA慢病毒感染猪前体脂肪细胞MOI值筛选及稳定转染株
•   1.6 实时荧光PCR检测mRNA表达
•   1.7 红O染色法检测猪前体脂肪细胞分化
•   1.8 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 重组慢病毒干扰载体的构建及鉴定
•   2.2 Txnip重组慢病毒干扰质粒的包装及滴度测定
•   2.3 猪前体脂肪细胞最佳感染复数MOI值筛选及稳定转染细胞株的建立
•   2.4 shRNA-Txnip重组慢病毒有效感染猪前体脂肪细胞, 降低细胞内Txnip表达
•   2.5 Txnip表达沉默促进猪前体脂肪细胞分化及分化标志基因表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 岳小婧,于淇,张晶,窦晓宁,谢晶宇,郭鹏辉,卢建雄,张国华

关键词: 硫氧还蛋白互作蛋白,干扰小,前体脂肪细胞,分化

来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 西北民族大学生命科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(No.31560639,No.31460589),国家民委中青年英才计划([2018]98),西北民族大学“一优三特”生物工程特色学科中央高校基本科研业务费项目(No.31920180125),西北民族大学研究生科研创新项目(No.Yxm2016137)资助~~

分类号: Q78

DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.04.15

页码: 457-464

总页数: 8

文件大小: 424K

下载量: 184