沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

论文摘要

目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测。方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并对临床样本中的沙门菌进行检测。结果:该检测方法可扩增不同型别沙门菌的基因组DNA,对其他10种不含沙门菌的肠道病原菌基因组DNA均不扩增,具有很好的特异性;对构建的阳性质粒模板检测灵敏度可达0.1 ng/L,对菌株样本基因组DNA检测灵敏度为10 CFU/mL,可快速准确地检出临床样本中分离的沙门菌阳性菌株,且与商业化沙门菌检测试剂盒的阳性检出率相同;该方法的重复性也很高,5次重复实验Ct值的变异系数低于0.8%。结论:建立的沙门菌TaqMan实时荧光定量PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可应用于临床沙门菌核酸检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物与TaqMan探针的设计与合成
•   1.3 模板的制备
•   1.4 质粒标准品的制备
•   1.5 荧光定量PCR反应体系的建立
•   1.6 荧光定量PCR检测方法的特异性
•   1.7 荧光定量PCR检测方法的敏感性
•   1.8 荧光定量PCR检测方法的重复性
•   1.9 荧光定量PCR检测方法的临床应用
• 2 结果
•   2.1 反应特异性
•   2.2 反应敏感性
•   2.3 反应重复性
•   2.4 实际样本的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田赛,郭卫光,包仁龙,向莹,张浩然,杨超杰,谢靖,刘鸿博,宋宏彬,邱少富,杜昕颖

关键词: 沙门菌,荧光定量,探针

来源: 生物技术通讯 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 临床医学

单位: 中国人民解放军疾病预防控制中心

基金: 国家重点研发计划（2018YFC1603801）

分类号: R446.5

页码: 805-809+816

总页数: 6

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