特利波契巴尔通体基因敲除体系的建立

论文摘要

本研究旨在建立基于同源重组技术的特利波契巴尔通体基因敲除方法。研究通过扩增并融合Ⅳ型分泌系统VirB4基因的上下游同源片段,将同源片段与pJM05质粒进行体外拼接,并将pJM05-ΔVirB4质粒转化进入S17-1大肠杆菌中;通过双亲接合转移将大肠杆菌S17-1中的pJM05-ΔVirB4质粒转移到特利波契巴尔通体中进行同源臂交换,产生单交换菌株;随后利用质粒中sacB基因表达产物分解蔗糖对自身产生毒性作用,在蔗糖平板中筛选出22个双交换菌株,通过菌落PCR及测序验证,共确定出6个VirB4基因框内缺失菌株;并且测序结果表明这6个菌株在VirB4基因框内缺失了2 136 bp。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 菌株与质粒
•   1.2 试剂
•   1.3 培养基和抗生素
•   1.4 引物
• 2 特利波契巴尔通体VirB4基因敲除与鉴定
•   2.1 特利波契巴尔通体的培养
•   2.2 pJM05-ΔVirB4质粒的构建
•   2.3 pJM05-ΔVirB4质粒转化进入S17-1菌
•   2.4 单交换菌株的制备
•   2.5 单交换菌株的筛选和验证
•   2.6 双交换菌株的筛选和验证
• 3 结果
•   3.1 同源臂的PCR扩增
•   3.2 pJM05-ΔVirB4质粒的构建及鉴定
•   3.3 单交换菌株的鉴定
•   3.4 双交换菌株的鉴定
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杜玉明,蔡雨豪,王蒙,袁聪俐

关键词: 特利波契巴尔通体,基因,质粒,蔗糖筛选

来源: 上海交通大学学报(农业科学版) 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学农业与生物学院

基金: 闵行区产学研基金(2016MH237,17Z128010007),四川省省院省校重大项目(2017JZ0010),苏州科技局创新计划(17Z1170010018)

分类号: Q78

页码: 61-66

总页数: 6

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