肽四聚体复合物论文_杨新星,郝友华,丁红晖,宋娜,刘贽

导读:本文包含了肽四聚体复合物论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:复合物,抗原,生物,淋巴细胞,复性,折迭,可溶性。

肽四聚体复合物论文文献综述

杨新星,郝友华,丁红晖,宋娜,刘贽^[1]（2008）在《叁种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体的构建及初步检测应用》一文中研究指出目的体外构建叁种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体,并初步用该叁种四聚体对抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)进行了初步检测。方法原核高效表达的HLA-A*0201-BSP和β2m蛋白,分别和叁种HBV抗原肽(HBVCore18-27,Env335-343,Pol575-583)体外复性折迭成可溶性的HLA-A*0201抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成相应的叁种抗原肽四聚体。最后进行流式细胞仪检测。结果Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了叁种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体。构建的叁种四聚体均可以检测到相应特异性的CTL,在自限性感染患者体内针对乙肝核心抗原(core18-27)的CTL细胞频数(0.18%)高于针对聚合酶抗原(pol575-583)(0.08%)和包膜抗原(env335-343)(0.06%)。结论成功构建了叁种具有完整构象的生物素化HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体,所构建的叁种四聚体都可以检测到抗原特异性的CTL。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2008年02期）

杨新星,郝友华,宋娜,陈玲,刘贽^[2]（2007）在《HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体的构建及初步检测应用》一文中研究指出目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)。方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Pol756-764和Core117-125在体外复性折迭成可溶性的HLA-A*2402抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成2种HBV抗原肽四聚体。最后进行流式细胞术检测。结果:Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了2种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物单体。结论:构建的2种四聚体可以检测乙型肝炎感染者体内特异性的CTL。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2007年10期）

郝友华,杨新星,丁红晖,宋娜,朱帆^[3]（2007）在《HBc-HLA-A~* 1101-β_2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定》一文中研究指出目的制备HBc-HLA-A~* 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A~* 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽(乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96)的存在下,体外复性折迭成可溶性的HLA-A~* 1101抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体;然后将此复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体;最后用流式细胞仪检测分析该四聚体结合特异性CTL的能力。结果Western blot和Dot-ELISA检测显示所制备的HLA-A~* 1101抗原肽复合物单体具有天然构象,且可被生物素化;流式细胞仪分析显示所制备的四聚体可与HLA-A11+供者的抗原特异性CTL结合。结论成功制备了具有完整构象的生物素化HLA-A~* 1101抗原肽复合物单体;此四聚体可以特异检测抗原特异性的细胞毒性T细胞。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2007年04期）

卢小玲,吴雄文,翁秀芳,李青,梁智辉^[4]（2006）在《可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折迭与四聚体化》一文中研究指出目的研究可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折迭与四聚体化。方法将原核高效表达的可溶性HLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2微球蛋白(β2m)与HLA-A*2402限制性抗原肽Epstein-Barr病毒(EBV)即刻早期BRLF1蛋白中的九肽NH2-DYNFVKQLF-COOH进行稀释复性折迭,形成HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体,并在BirA酶的作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-pBRLF1复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体。利用特异单抗(W6/32和兔抗人β2m抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot,检测稀释复性和生物素化的折迭产物。然后用此生物素化的单体分子进一步构建成HLA-A*2402-pBRLF1四聚体来检测人工抗原提呈细胞(aAPCs)诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。结果折迭复合物中,主要含有HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体及β2m两种成分,其中HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体可生物素化和四聚体化。应用HLA-A*2402-pBRLF1四聚体对特异性CTL检测结果说明体外成功地构建了HLA-A*2402-pBRLF1四聚体。结论HLA-A*2402-pBRLF1四聚体构建成功,为特异性CTL的检测提供了有力的工具。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2006年02期）

宋娜^[5]（2006）在《sH-2K～d-HBc复合物四聚体的构建与其初步的检测应用》一文中研究指出目的基于sH-2Kd-HBc复合物与H-2Kd限制性HBc特异性CTL之间的特异性识别,构建可生物素化sH-2Kd-HBc复合物,进一步制备H-2Kd-HBc四聚体(Tetramer),为深入研究HBV感染过程中特异性CTL应答和效应机制,探索打破慢性HBV感染者免疫耐受状态的方法奠定实验基础。方法以H-2Kd胞外区的克隆质粒为摸板,通过引物接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BirA dependent substrate peptide,BSP),将扩增产物装入pET-28(a+)高效表达载体。重组质粒pET-sH-2Kd-BSP和pET-β2M(本室构建)分别转化高效表达菌BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,高效表达目的蛋白,并纯化包涵体中的目的蛋白。将上述过程制备的sH-2Kd-BSP作为重链、β2m作为轻链,与人工合成的H-2Kd限制性九肽(HBc131-139aa)在体外体外采用稀释法进行共折迭复性,然后在BirA酶作用下,对折迭产物进行生物素化,形成了生物素化的H-2Kd-HBc复合物。在这里,利用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的亲和素对折迭复性及生物素化后的复合物进行检测,接着,通过凝胶过滤层析法进一步纯化生物素化的复合物单体。最后,将纯化的生物素化单体与藻红蛋白(phycoerythrin, PE)共孵育形成四聚体,并通过免疫Balb/c小鼠获得HBV特异性CTL,利用构建的四聚体进行检测。结果1、重组载体pET-sH-2Kd-BSP的测序结果经Align软件分析,与GeneBank所公布的序列完全一致。SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,目的蛋白位于细菌的包涵体内,纯化500ml饱和菌液共得到186mg sH-2Kd-BSP和165mgβ2m,纯度都达到70%。2、利用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的亲和素对折迭复性及生物素化后的复合物单体进行检测,证明成功获得了生物素化的sH-2Kd-HBc复合物。3、用HBc真核表达质粒通过不同的途径免疫Balb/c小鼠获得抗原特异性CTL,利用构建的四聚体进行检测,显示我们构建的四聚体能与CTL特异性结合,从功能上证实我结论1、成功地构建了原核表达质粒pET-sH-2Kd-BSP,并在原核表达系统内高效表达,纯化,最后得到的蛋白的浓度和纯度能够满足后续折迭体系的需要。2、重链、轻链及其多肽配体能以适当的比例在体外稀释复性折迭为正确构象sH-2Kd-HBs复合物,在BirA酶作用下进行有效生物素化后,再通过凝胶过滤层析法除去折迭产物中的重链多聚体以及小分子杂质,从而进一步纯化了生物素化的复合物单体。3、通过基因免疫能在小鼠体内诱导较强的特异性T细胞应答,构建的四聚体能与CTL特异性结合,具备检测功能,为进一步探讨细胞免疫应答过程中T细胞识别机制奠定了基础。本研究的意义1、sH-2Kd-HBc复合物作为特异性CTL识别的配体,可用于进一步制备人工抗原提呈细胞(artificial APC)。人工抗原提呈细胞可增强或抑制特异性T细胞克隆的功能状态,为抗原特异性T细胞的过继疗法提供新途径;相应的四聚体可定量检测和分离特异性的T淋巴细胞,为探讨T细胞免疫识别机制奠定了基础。2、本研究所摸索出的技术路线和实验方法还能用于制备其他型别的MHC-多肽复合物及其相应的四聚体。因此,本研究为认识病毒感染、肿瘤发生、移植排斥和自身免疫性疾病的发生机制,以及研究相应的免疫学防治手段奠定了相关实验基础。(本文来源于《华中科技大学》期刊2006-04-01）

王晓花^[6]（2005）在《可溶性MHC-肽四聚复合物法及其进展》一文中研究指出抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)主要是CD8+ T细胞 ,少数为CD4 + T细胞 ,CTL对抗原的识别及自身的活化受MHC分子的限制。抗原特异性CTL在抗感染免疫、移植物免疫和肿瘤免疫中发挥重要作用 ,定量分析抗原特异性CTL可为阐明免疫应答的(本文来源于《中华微生物学和免疫学杂志》期刊2005年01期）

王晓花,孙成刚^[7]（2004）在《抗原特异性CTL检测新技术——可溶性MHC-肽四聚复合物法的功能和应用》一文中研究指出可溶性MHC 肽四聚复合物法是近年来发展起来的一种定量检测抗原特异性CTL的新方法。该法将特异性抗原肽段、可溶性MHC分子及 β2 微球蛋白在体外正确折迭构建四聚体 ,并结合流式细胞仪定量检测外周血及组织中抗原特异性CTL的比率 ,广泛用于感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病的研究 ,是一种很有前景的科研工具。(本文来源于《生命的化学》期刊2004年06期）

张静波,吴玉章^[8]（2004）在《MHC/肽四聚体复合物技术及其在T细胞研究中的应用》一文中研究指出科学的进步促进技术的革命 ,而新技术的诞生则又进一步推动科学的飞跃发展。自 1996年Alt man[1] 建立了新型的细胞毒性T细胞 (CytotoxicTLymphocyte ,CTL)检测技术 MHCI类分子 肽四聚体复合物标记CTL的流式细胞(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2004年09期）

郭薇^[9]（2004）在《HLA四聚体复合物检测系统的构建及初步鉴定》一文中研究指出抗原特异性细胞毒性T 淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)的鉴定是研究CTL疫苗的基础。定量分析抗原特异性T细胞能为免疫应答的发生过程提供重要的信息。传统的鉴定方法费时费力,敏感性低,近年来出现了一种新的检测方法,即可溶性HLA肽四聚体方法。实验表明,该方法克服已有检测手段的缺点和局限性,这种四价的重组分子在体外可有效标记T细胞抗原识别受体(TCR),并适用于流式细胞仪检测CTLs,由于该技术应用原核表达重组蛋白,其来源容易,仅需不同的抗原肽就可制备重组分子,因此近期得到了广泛应用。本实验旨在国内率先建立可溶性HLA-A2-CEA四聚体检测系统,为肿瘤的细胞免疫机制研究提供一个方便、准确的研究平台。研究内容如下:一、PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因成功建立相对简单经济的检测HLA-A*0201等位基因的方法,利用位点特异性引物进行2-3次PCR扩增,结合PCR产物测序即可快速筛选HLA-A*0201阳性的个体,满足我们所构建的HLA-A2表位肽四聚复合物检测系统进一步实验的需要。本研究不仅创建了筛选特定等位基因——HLA-A*0201的方法,同时也为快速检测其它特定HLA等位基因提供了经济实用的模式,具有较高的实际应用和参考价值。二、可溶性HLA-A2-CEA四聚体复合物的构建在成功地扩增了HLA-A*0201两个亚单位(重链、轻链)后,将可生物素化的序列连接到HLA-A2重链胞外区末端,分别构建成可溶性重组分子,进行原核表达。再利用6×Histiding tag进行蛋白纯化,在对HLA-A2分子高亲和力的CEA694-702(癌胚抗原优势T细胞表位多肽GVLVGVALI)存在下,叁者体外折迭成具有完整构象的HLA-A2-CEA分子复合物。以BirA酶作用于复合物中的融合于HLA重链蛋白C端BSP中的赖氨酸残基,生物酰化该复合物。生物酰化的HLA肽复合物与藻红蛋白(PE)标记的亲和素以4:1结合,形成均一的四聚体结构。利用Streptavidin-shift assay检测到生物素化效率达到90%以上,同时间接ELISA实验证实了可溶性HLA-A2-CEA四聚体中各单体复合体的活性,初步完成了可溶性HLA-A2-CEA四聚体的结构及功能的鉴定工作,为进一步研究肿瘤细胞免疫功能奠定了良好的基础。(本文来源于《东南大学》期刊2004-05-10）

周最明^[10]（2001）在《HLA-表位肽四聚复合物检测系统在研究HBV/HCV抗原特异性CTL中的应用》一文中研究指出HLA I-表位肽四聚复合物检测系统(简称:四聚复合物检测系统)是以生物素-亲和素、人工制备的HLAI类分子、β2-M和特异性抗原表位多肽构建的四聚复合物,模拟靶细胞膜表面的HLAI类分子-表位复合物检测系统。它通过T细胞受体识别并结合相应表位的特异性CTL,以生物素-荧光标记的亲和素为标记物并利用流式细胞仪进行定量检测和分拣;它能在体外直接定性、定量检测T细胞群中的特异性CTL,因而对微生物感染、肿瘤、移植排斥等疾病的细胞免疫学研究将产生重大的影响。本文着重介绍了该技术在HBV/HCV感染研究中的应用进展。(本文来源于《国外医学(流行病学传染病学分册)》期刊2001年03期）

肽四聚体复合物论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)。方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Pol756-764和Core117-125在体外复性折迭成可溶性的HLA-A*2402抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成2种HBV抗原肽四聚体。最后进行流式细胞术检测。结果:Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了2种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物单体。结论:构建的2种四聚体可以检测乙型肝炎感染者体内特异性的CTL。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

肽四聚体复合物论文参考文献

[1].杨新星,郝友华,丁红晖,宋娜,刘贽.叁种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体的构建及初步检测应用[J].免疫学杂志.2008

[2].杨新星,郝友华,宋娜,陈玲,刘贽.HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体的构建及初步检测应用[J].细胞与分子免疫学杂志.2007

[3].郝友华,杨新星,丁红晖,宋娜,朱帆.HBc-HLA-A~*1101-β_2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定[J].中国免疫学杂志.2007

[4].卢小玲,吴雄文,翁秀芳,李青,梁智辉.可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折迭与四聚体化[J].华中科技大学学报(医学版).2006

[5].宋娜.sH-2K～d-HBc复合物四聚体的构建与其初步的检测应用[D].华中科技大学.2006

[6].王晓花.可溶性MHC-肽四聚复合物法及其进展[J].中华微生物学和免疫学杂志.2005

[7].王晓花,孙成刚.抗原特异性CTL检测新技术——可溶性MHC-肽四聚复合物法的功能和应用[J].生命的化学.2004

[8].张静波,吴玉章.MHC/肽四聚体复合物技术及其在T细胞研究中的应用[J].中国免疫学杂志.2004

[9].郭薇.HLA四聚体复合物检测系统的构建及初步鉴定[D].东南大学.2004

[10].周最明.HLA-表位肽四聚复合物检测系统在研究HBV/HCV抗原特异性CTL中的应用[J].国外医学(流行病学传染病学分册).2001

论文知识图

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