产角蛋白酶毕赤酵母工程菌的构建及酶学性质

论文摘要

将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn2+、Ba2+对角蛋白酶活性有促进作用。此外,重组角蛋白酶易降解干酪素和β角蛋白（羽毛粉）,酶促反应最大速度vmax=0.019 g/（L·min）,Km=4.64 g/L,比活力=440 U/mg。研究获得的产角蛋白酶重组毕赤酵母具有较好的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒、培养基与试剂
•   1.2 kerUS的密码子优化及扩增
•   1.3 重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达
•   1.4 角蛋白酶活力测定
•   1.5 最适温度、pH及温度、pH的稳定性
•   1.6 金属离子对角蛋白酶活力的影响
•   1.7 表面活性剂和有机溶剂对角蛋白酶活力的影响
•   1.8 底物特异性和动力学常数的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 kerUS重组毕赤酵母菌的构建及表达
•   2.2 角蛋白酶的最适温度、pH及温度、pH的稳定性
•   2.3 金属离子和EDTA对角蛋白酶的影响
•   2.4 表面活性剂与有机试剂对角蛋白酶的影响
•   2.5 底物特异性
•   2.6 动力学常数的测定
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 许佳惠,尹雅洁,李欣悦,柳凯,梁运祥,赵述淼,胡远亮

关键词: 角蛋白酶,毕赤酵母,密码子优化,重组,表达

来源: 华中农业大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北师范大学生命科学学院/食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室

基金: 湖北省自然科学基金项目(2015CFC797),湖北省教育厅中青年人才项目(Q20162501)

分类号: Q93;Q78

DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2019.03.012

页码: 71-76

总页数: 6

文件大小: 283K

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