启动子对枯草芽孢杆菌表达环糊精葡萄糖基转移酶的影响

论文摘要

以质粒pHY300PLK为骨架构建Bacillus stearothermophilus来源的α/β-环糊精葡萄糖基转移酶（α/β-CGTase）在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）表达系统的表达质粒。为了提高α/β-CGTase的表达量,考察了9个单启动子(PamyQ, PamyQ’, Papr E, Pgsi B, Phpa Ⅱ, Pnpr E, Psrf, Pxyl, Pxyl’)对α/β-CGTase表达量的影响,摇瓶发酵表明最优单启动子为PamyQ’,α/β-CGTase表达量为6.52 U/mL,其次为Phpa Ⅱ和Pnpr E,分别对应酶活5.80 U/mL和5.73 U/mL。用PamyQ’与PamyQ’、Phpa Ⅱ、Pnpr E两两组合,构建双启动子PamyQ’-PamyQ’、Phpa Ⅱ-PamyQ’、Pnpr E-PamyQ’,摇瓶发酵表明最优双启动子为Phpa Ⅱ-PamyQ’,α/β-CGTase表达量为11.15 U/mL,是用单启动子PamyQ’表达时的1.7倍。测定Phpa Ⅱ-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’、Pgsi B、Phpa Ⅱ为启动子时,α/β-CGTase m RNA转录水平,结果表明α/β-CGTase表达量随m RNA转录水平的提高而提高。使用含有启动子Phpa Ⅱ-PamyQ’的表达质粒进行3 L罐发酵,培养96 h时,α/β-CGTase酶活达到最高110.4 U/mL。

论文目录

• 1结果与分析
•   1.1重组菌的构建与表达
•   1.2双启动子表达载体的构建与表达
•   1.3不同启动子对α/β-CGTase mRNA相对表达量的影响
• 2讨论
• 3材料与方法
•   3.1菌株与质粒
•   3.2主要试剂
•   3.3培养基
•   3.4仪器与设备
•   3.5表达质粒的构建与转化
•   3.6培养方法
•   3.7 CGTase酶活测定方法
•   3.8实时荧光定量PCR测定α/β-CGTase mRNA相对表达量

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李云菲,宿玲恰,吴敬

关键词: 环糊精葡萄糖基转移酶,枯草芽孢杆菌,启动子

来源: 基因组学与应用生物学 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,一般化学工业,轻工业手工业

单位: 江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家自然科学基金(31501419),国家杰出青年基金(34125020)共同资助

分类号: TQ920.1;TS201.3

DOI: 10.13417/j.gab.038.003540

页码: 3540-3547

总页数: 8

文件大小: 1330K

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