逐步添加法制备单链环状DNA的影响因素探究

论文摘要

单链环状DNA在纳米技术、分子生物学和医药学等领域具有广泛的应用前景,但难以大量制备一直是制约其研究和应用的难题之一。本文针对一种高效大量制备单链环状DNA的方法-逐步添加法,系统地探究了逐步添加法中各主要条件对制备单链环状DNA的影响,确定了逐步添加法中的主要关键条件为:T4DNA连接酶Buffer浓度、单链DNA浓度、添加间隔时间、温度和Splint GC含量。以72nt的核酸链为例,使用逐步添加法将单链环状DNA的制备得率提高至99%,产量与常用的一步法相比提高至4.9倍。本研究为高效、大量制备单链环状DNA提供了指导,为以单链环状DNA为基础的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 实验材料与仪器
•   1.2 一步法连接成环反应
•   1.3 逐步添加法连接成环反应
•   1.4 产物分析
• 2 结果
•   2.1 T4DNA连接酶Buffer的浓度对成环的影响
•   2.2 单链DNA的浓度对成环的影响
•   2.3 添加间隔时间对成环效率的影响
•   2.4 反应温度对成环效率的影响
•   2.5 Splint加入量和Splint的GC含量对成环效率的影响
•   2.6 常规一步法与逐步添加法对比
• 3 讨论
• 4 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 樊一乔,安然,李琦,李敬,梁兴国

关键词: 逐步添加法,单链环状,纳米技术,关键因素,高效制备

来源: 中国海洋大学学报(自然科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛海洋科学与技术国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31571937,31301420),中央高校基本科研业务费专项(201713050)资助~~

分类号: Q523

DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20180041

页码: 36-43

总页数: 8

文件大小: 2278K

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