沉默结缔组织生长因子基因对肝星状细胞生长和细胞周期的影响

论文摘要

目的·探讨沉默结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,Ctgf）基因对大鼠肝星状细胞HSCT6的生长、细胞周期及其转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad3和Smad7表达的影响。方法·采用RNA干扰技术构建Ctgf基因的pCDH/Ctgf-shRNA重组慢病毒载体。该重组载体经病毒包装后获得高感染力的pCDH/Ctgf-shRNA病毒颗粒用于感染HSCT6细胞。荧光显微镜观测被感染HSCT6细胞的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表达情况;CCK-8试剂盒检测被感染HSCT6细胞的生长变化;流式细胞术检测被感染HSCT6细胞的周期变化。Real-time PCR和Western blotting分别检测pCDH/CtgfshRNA病毒对HSCT6细胞的Ctgf基因的沉默效应及对TGF-β1、Smad3和Smad7表达的影响。结果·成功构建Ctgf基因的重组病毒载体pCDH/Ctgf-shRNA。荧光显微镜观测表明,被感染重组病毒的HSCT6细胞显著表达GFP。CCK-8检测结果证实,与对照细胞相比,沉默Ctgf基因的HSCT6细胞生长明显受抑,72 h开始两者差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测表明,沉默Ctgf基因的HSCT6细胞可被阻滞于S期。Real-time PCR和Western blotting检测表明,pCDH/Ctgf-shRNA病毒能有效沉默HSCT6细胞的Ctgf基因,下调TGF-β1、Smad3基因及其蛋白的表达,上调Smad7基因及其蛋白的表达;与对照比较,差异皆有统计学意义（均P<0.05）。结论·沉默Ctgf基因能抑制HSCT6细胞生长,使其TGF-β1、Smad3的表达下调,同时上调其Smad7的表达;这种生长受抑可能与其TGF-β1/Smads（Smad3/Smad7）信号通路受阻紧密相关。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料和主要试剂
•   1.2 细胞培养
•   1.3 慢病毒载体pCDH/Ctgf-shRNA的构建、鉴定、包装、滴度测定和细胞感染
•     1.3.1 慢病毒载体p CDH/Ctgf-sh RNA的构建和鉴定
•     1.3.2 重组病毒pCDH/Ctgf-shRNA的包装和滴度测定
•     1.3.3 HSCT6细胞的pCDH/Ctgf-shRNA病毒感染
•   1.4 沉默Ctgf基因对HSCT6细胞生长的影响
•   1.5 沉默Ctgf基因对HSCT6细胞周期的影响
•   1.6 沉默Ctgf基因对HSCT6细胞的Tgf-β1、Smad3和Smad7基因及其编码蛋白表达的影响
•     1.7统计学方法
• 2结果
•   2.1 Ctgf基因最佳干扰靶点序列的筛选
•   2.2 慢病毒载体p CDH/Ctgf-shRNA的测序鉴定
•   2.3 病毒pCDH/Ctgf-shRNA的包装与其滴度测定
•   2.4 HSCT6细胞的pCDH/Ctgf-shRNA病毒感染率检测
•   2.5 沉默Ctgf基因对HSCT6细胞生长的影响
•   2.6 沉默Ctgf对HSCT6细胞周期的影响
•   2.7 沉默Ctgf对HSCT6细胞Tgf-β1、Smad3和Smad7mRNA及其蛋白表达的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张荣华,董岸莺,柏干苹,万萍,蒋毅,吴红

关键词: 结缔组织生长因子,肝星状细胞,转化生长因子

来源: 上海交通大学学报(医学版) 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 消化系统疾病

单位: 陆军军医大学西南医院中医与风湿免疫科,库尔勒解放军951医院心肾呼吸科

基金: 国家自然科学基金(81273918),基础研究军民融合项目(SWH2017JCZD-5),军队中医药科研专项课题(2010ZYZ231),重庆市中医药科技项目(2012-2-63)~~

分类号: R575.2

页码: 1375-1381

总页数: 7

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