熊平源1胡艺兰1陈慧1白惠卿2
（1武汉科技大学医学院湖北武汉430065；2北京大学医学部100083）
【摘要】目的了解银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法采用微量浊度法测定小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性；采用小鼠胸腺细胞检测法测定小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素-1β的分泌活性；采用姬姆萨染色法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒作用及泌白细胞介素-1β的分泌活性明显增强P﹤0.01；各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能明显增强P﹤0.01。结论银杏叶提取物在有效剂量范围内能促进小鼠腹腔巨噬细胞功能。
【关键词】银杏叶腹腔巨噬细胞吞噬功能细胞毒白细胞介素-1β
【中图分类号】R961.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）23-0020-02
银杏叶被用作药用已有500余年的历史，早在宋朝我国民间就已开始使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。自20世纪60年代起，国内外学者对银杏叶的化学成分、药理作用等进行了大量研究，发现银杏叶可贵的药用价值。其性味甘、苦、涩、平。大量的药理实验结果显示，银杏叶中有重要药理活性作用的成分主要有两大类：银杏黄酮甙和银杏苦内酯。临床上银杏叶片用于活血、化瘀、通络、降低人体血液中胆固醇水平、防止动脉硬化等。也有关于银杏叶提取物能提高老年大鼠淋巴细胞免疫功能的报道[1]。本文就银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响进行了研究。
1材料
银杏叶（GinkgobilobaL）中药店购买。3H-TdR为中国科学院原子能研究院产品。小鼠S180肉瘤细胞：北京大学医学部免疫学系提供。动物Ba1b/c品系小鼠，8-12周龄，体重18-22g，雌雄各半，由武汉科技大学医学实验动物中心提供。CO2培养箱：美国NaPCo产品。倒置生物显微镜：重庆光学仪器厂产品。DG3022A型酶联免疫测定：华东电子管厂产品。LPS：Sigma公司产品。
2方法与结果
将小鼠随机分成四组，每组15只。正常对照组：每只每日用0.25mL无菌生理盐水，连续腹腔注射7d。银杏叶水提物用生理盐水配成4mg/ml（相当于生药120mg）。药物I组给予银杏叶水提物2mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物II组给予银杏叶水提物4mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d。药物III组给予银杏叶水提物6mg/（鼠.d），连续腹腔注射7d[2.3]。
2.1银杏叶对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响：
实验前三天，腹腔注射6%淀粉肉汤1mL作为巨噬细胞诱导剂。测时脱颈椎处死小鼠，用PH6.5-PH6.7的无钙镁Hank′s液2mL洗出全部腹腔巨噬细胞，取1mL腹腔洗液置于5mL离心管中，加入10%鸡红细胞0.2mL，插入5×20mm2盖玻片条，经37℃30min后取出玻片条，洗涤，固定，姬姆萨染色，油镜下计数巨噬细胞吞噬百分率，并计算其吞噬指数[6]。结果见图1-1，图1-2。
图1-1银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
（吞噬百分率，X±SD）
图1-1结果显示，与对照组比较各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率明显增强，其中药物I组与对照组比较P＜0.05；药物II组与对照组比较P＜0.01；药物III组与对照组比较P＜0.01。本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能（吞噬百分率）与银杏叶提取物剂量有关。但在一定的有效剂量范围内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率并不随药物剂量的增加而增强。
图1-2银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
（吞噬指数，X±SD）
图1-2结果显示，与对照组比较各药物实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数明显增强，其中药物I组与对照组比较P＜0.05；药物II组与对照组比较P＜0.05；药物III组与对照组比较P＜0.01。本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能（吞噬指数）与银杏叶提取物剂量有关，其吞噬指数因药物剂量的增加而增加。
2.2银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性的影响：
用3H-TdR标记小鼠S180肉瘤细胞（靶细胞）。将制备好的腹腔Mφ悬液加入96孔培养板中，100uL/孔（浓度为1×106mL-1），培养4h，洗去悬浮细胞，加入10uLLps继续培养8h，加入3H-TdR标记的小鼠S180肉瘤细胞100uL（效靶比为5：1），同时设靶细胞对照孔，培养20h，吸取上清100uL，检测其放射活性，计算细胞杀伤率[4]。结果见图2。
图2银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒活性的影响
（细胞杀伤率X±SD）
图2结果显示，药物I组与对照组比较，无明显差异；药物II组与对照组比较，P<0.01；药物III组与对照组比较，P<0.01。本实验结果表明，银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性的影响与剂量有一定关系，但小鼠腹腔巨噬细胞的细胞毒活性并不随药物剂量的增加而增强。
2.3银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素-1β的影响：
白细胞介素-1β的测定：采取小鼠胸腺细胞检测法[5]。一式三份，包括阴性对照组，β-闪烁液计数仪测定3H-TdR掺入值。结果见图3。
图3银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素-1β的影响（X±SD）
图3结果显示，药物I组与对照组比较，P<0.05；药物II组与对照组比较，P<0.01。药物III组与对照组比较，P<0.001。本实验结果表明，银杏叶提取物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素-1β活性的影响与剂量有关。在有效剂量范围内药物剂量与腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素-1β的活性成正比。
3讨论
巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成细胞，是执行固有免疫的效应细胞，同时在特异性免疫应答的各个阶段也起重要作用。巨噬细胞质内富含溶酶体及线粒体，具有强大的吞噬、杀菌、清除凋亡细胞及其它异物的能力。巨噬细胞不仅执行固有免疫的效应功能，也在适应性免疫应答的各个阶段也发挥重要作用。如清除和杀伤病原体、参与和促进炎症反应、杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞、加工和提呈抗原。此外，活化巨噬细胞还可通过分泌多种细胞因子，参与免疫调节[7]。因此，作为一种多功能的固有免疫细胞，巨噬细胞的功能状况将从一个侧面直接反映机体的免疫状况。
本文研究结果表明，银杏叶提取物能增强小鼠腹腔巨噬细胞介导的细胞毒活性、促进腹腔巨噬细胞分泌IL-1β的活性、并能增强腹腔巨噬细胞吞噬功能。关于银杏叶提取物影响小鼠腹腔巨噬细胞功能的作用机制有待进一步探讨。
参考文献
[1]覃红斌，杨艺.银杏叶提取物提高老年大鼠淋巴细胞免疫功能的初步观察[J].湖北民族学院学报(医学版),2005;22（4）:49-50.
[2]刘小雨，沈自尹，王琦等.淫羊藿总黄酮(EF)对老龄大鼠Th1、Th2、Th3细胞的调节作用[J].中国免疫学杂志,2005；21（11）：842-845.
[3]熊平源，王强，郭凯文等.何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响[J].数理医药学杂志2007；20（2）242-243.
[4]张桂梅，冯作化，郝天玲等.大蒜素对巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响[J].中国中药杂志,1996；21（1）：45-47.
[5]杨贵珍.免疫生物工程纲要与技术[M].吉林科学技术出版社,1991：16-18.
[6]熊平源,王强.医学免疫学实验教程[M].武汉大学出版社,2011；8-9.
[7]金伯泉.医学免疫学.第五版[M].人民卫生出版社，2008；137-139.