牦牛SIRT3基因的克隆及其在各组织和睾丸不同发育阶段的表达

论文摘要

旨在克隆牦牛沉默蛋白调节因子3（sirtuin 3,SIRT3）基因,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达水平,从而为研究SIRT3在牦牛睾丸发育过程中的作用机制提供试验依据。本研究选取胎牛期（5～6个月）、幼年期（1～2岁）、性成熟期（3～5岁）及老年期（7～9岁）健康雄性牦牛共12头（每组各3头）,其中来源于同一年龄阶段的3个组织样本视为生物学重复。采集性成熟期牦牛肝、心、肺、脾、脑、肾、肌肉、小肠、睾丸和大肠以及4个时期的睾丸组织。分别提取各组织的总RNA,并利用反转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）技术克隆获得牦牛SIRT3基因序列,使用相关生物信息学软件预测其编码蛋白质的结构和功能;通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测SIRT3 mRNA在牦牛各组织及睾丸4个发育阶段的表达水平。结果表明,SIRT3基因的ORF（open reading frame,开放阅读框）为1 002 bp,编码333个氨基酸,与黄牛和绵羊的同源性分别达到99.9%和96.7%,该基因的mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达,在脾、睾丸、肺和肌肉中的表达量较高。随年龄增长SIRT3 mRNA在牦牛睾丸中表达呈现先上升后下降的趋势,其中在性成熟期的表达量最高。本研究为揭示SIRT3在牦牛生长发育,尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 组织样本的采集
•   1.2 主要试剂和仪器
•   1.3 牦牛各组织总RNA的提取和反转录
•   1.4 牦牛SIRT3基因的克隆测序
•   1.5 牦牛SIRT3基因生物信息学分析
•   1.6 牦牛SIRT3基因组织表达谱分析
•   1.7 qRT-PCR检测SIRT3基因在牦牛睾丸不同发育阶段的表达
•   1.8 统计学分析
• 2 结 果
•   2.1 牦牛SIRT3基因的克隆
•   2.2 牦牛SIRT3蛋白结构和功能预测
•   2.3 牦牛SIRT3基因的组织表达谱
•   2.4 牦牛不同发育时期睾丸中SIRT3基因的表达
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王斌,佟连鑫,秦文昌,李键,殷实

关键词: 组蛋白去乙酰化,牦牛,组织表达谱,睾丸

来源: 畜牧兽医学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 西南民族大学生命科学与技术学院,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室,西南民族大学现代生物技术国家民委重点实验室

基金: 中央高校基本科研业务费专项基金项目(2018NQN33),四川省科技支撑计划(2017NZ0076),牦牛遗传资源与保护创新团队(13CXTD01),青藏高原动物遗传资源保护与利用重点实验室资助

分类号: S823.85

页码: 2431-2439

总页数: 9

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