新西兰兔Keap1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

根据GenBank中穴兔Keap1基因序列设计了特异性引物,经PCR扩增,从新西兰兔肝脏中扩增出Keap1基因的C端并连接至T载体上,获得重组质粒pMD-19T-Keap1C。以重组质粒作为质控标准品,通过标准曲线构建、敏感性、特异性和重复性检验,建立了检测兔Keap1基因的实时荧光定量PCR方法,并分析了Keap1基因mRNA在兔各组织中的表达差异。结果显示,Keap1基因检测的Ct值与标准品呈良好的线性关系,扩增效率为103%,R2>0.99。利用建立的实时荧光定量PCR方法对新西兰兔各组织中Keap1基因mRNA表达水平进行检测,结果显示,Keap1基因在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中均有表达,且肝脏中表达量最高,脾脏中表达量最低。本试验建立了兔Keap1基因的荧光定量PCR方法并检测了其mRNA在兔各组织中的表达情况,为后续开展兔Keap1-Nrf2-ARE信号通路的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂和工具酶
•   1.2 试验动物及样品采集
•   1.3 引物设计
•   1.4 RNA的提取及cDNA的合成
•   1.5 标准阳性质粒的制备
•   1.6 荧光定量PCR检测方法的建立
•     1.6.1 标准曲线的建立
•     1.6.2 敏感性和重复性检测
•   1.7 Keap1在兔组织中的含量检测
• 2 结果
•   2.1 Keap1基因扩增及阳性质粒的制备
•   2.2 标准曲线的绘制
•   2.3 敏感性检验
•   2.4 重复性检验
•   2.5 Keap1基因在兔不同组织中的表达差异分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡波,范志宇,魏后军,仇汝龙,陈萌萌,宋艳华,朱伟峰,徐为中,王芳

关键词: 基因,荧光定量,表达,新西兰兔

来源: 中国兽医杂志 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31600130),现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-43-C-1)

分类号: S829.1

页码: 38-42

总页数: 5

文件大小: 1020K

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