可诱导表达hFGFR1α稳定细胞系的建立与表达优化

论文摘要

目的:构建hFGFR1α（human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα）稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达。方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2×Flag表达载体,连同pOG44重组酶质粒共转染人宿主细胞Flp-InTM-T-RexTM-293细胞系（HEK293H）,潮霉素B筛选获得阳性克隆细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ。用不同浓度强力霉素（doxycline, Dox）或者不同作用时间对HEK293H/hFGFR1ɑ细胞系进行诱导表达,Western Blot鉴定hFGFR1ɑ蛋白的表达情况。结果:构建了pcDNA5-FRT/TO/2×Flag/hFGFR1ɑ重组表达载体,获得了可被Dox诱导表达的HEK293H/hFGFR1ɑ稳定细胞系;0.001μg/mL Dox即可诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,0.01μg/mL Dox即可诱导表达量达峰值;Dox对该细胞系作用2 h即诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,对其作用24 h后该细胞系的表达明显增强。结论:成功构建了可诱导的、高效的稳定表达细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ;Dox诱导该细胞系表达具有剂量差异性和时间依赖性。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 细胞培养
•     1.2.2 pcDNA5-FRT/TO/2×Flag/hFGFR1α重组质粒的构建
•     1.2.3 稳定细胞系的建立
•     1.2.4 稳定细胞系的表达和Western Blot鉴定
•     1.2.5 稳定细胞系表达条件的分析
•     1.2.6 数据分析
• 2 实验结果
•   2.1 pcDNA5-FRT/TO/2×Flag/hFGFR1α重组质粒的构建
•   2.2 可诱导稳定表达的HEK293H/hFGFR1ɑ细胞系的建立、表达和鉴定
•   2.3 稳定细胞系表达条件的分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱先玉,王历,杨茂,吴婷,何涛,杨文理

关键词: 稳定细胞系,蛋白质表达,诱导

来源: 西南医科大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西南医科大学基础医学院肿瘤医学研究所

基金: 四川省科技厅国际科技合作与交流计划项目(2014HH0010),泸州市-四川医科大学联合项目(2015LZCYD-S02(6,11)),四川省教育厅重点项目(17ZA0449)

分类号: Q78

页码: 215-218

总页数: 4

文件大小: 1881K

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