人源CBX7功能结构域的重组表达与纯化

论文摘要

CBX7（chromobox 7）在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用。然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难。实验阐述了CBX7功能结构域CBX7（aa 145～227）重组表达载体构建的详细过程。同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目的蛋白进行了纯化,并利用SDS-PAGE及Western-blot进行了鉴定分析。纯化后的融合蛋白样品通过离子交换和分子筛层析进一步分离剩余杂质。本实验得到的高浓度CBX7蛋白可用于结晶,为后续CBX7的结构和功能研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、表达载体和基因信息
•     1.1.2 试剂与仪器
•   1.2 方法与步骤
•     1.2.1 SUMO-CBX7融合基因的构建
•     1.2.2 SUMO-CBX7重组基因的表达鉴定
•     1.2.3 SUMO-CBX7融合蛋白的亲和纯化
•     1.2.4 离子交换层析
•     1.2.5分子筛层析
• 2 结果
•   2.1 SUMO-CBX7重组质粒的构建和表达
•   2.2 SUMO-CBX7融合蛋白的亲和纯化
•   2.3 SUMO-CBX7的性质及结构鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡温温,ALTAF Simair,吕缜一,陈婷,张云龙,陆昌瑞

关键词: 人源,功能结构域,蛋白质表达,蛋白质纯化,肿瘤抑制

来源: 生命科学研究 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 东华大学化学化工与生物工程学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(31300603),中央高校基本科研基金资助项目(15D110508,15D110527,13D110522,17D210502,17D310512,2232014D3-39),国家大学生创新项目(14T10501),上海高校特聘教授(东方学者)计划(2012-28),东华大学励志计划(18D210501),中国博士后科研基金特别资助项目(2015M571455)

分类号: Q75

DOI: 10.16605/j.cnki.1007-7847.2019.02.002

页码: 92-99

总页数: 8

文件大小: 1853K

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