酿酒酵母全基因组SNARE蛋白的亚细胞定位研究

论文摘要

在真核细胞中,内质网、高尔基体、质膜等膜结构间的蛋白质运输主要通过囊泡出芽和融合实现。SNARE蛋白家族在介导囊泡与目的膜结构融合过程中发挥关键作用。在模式生物酿酒酵母中,对全基因组SNARE蛋白的系统研究仍有不足。此研究构建了一套用于标记酿酒酵母基因组全部24种SNARE的工具质粒。该系列质粒既能呈现出良好的定位特征,又避免了过度表达造成的定位异常。通过与细胞器标记共定位验证了SNARE蛋白的亚细胞定位。结果发现3种SNARE的定位与之前报道不符:Bos1定位于早高尔基体,Snc1和Bet1定位于晚高尔基体/早内体。另外,Sec9定位于芽尖和芽颈,这是首次观察到Sec9在活酵母细胞中的定位。这项工作首次全面的检验了酵母SNARE家族蛋白的亚细胞定位,为后续SNARE蛋白功能研究提供了新线索,并为相关研究提供了一套工具质粒。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料和菌株
•   1.2 表达质粒与菌株的构建
•   1.3 活细胞成像及图像处理
• 2 结果
•   2.1 GFP-SNARE融合蛋白表达质粒的构建
•   2.2 呈现胞内点状分布的SNARE
•   2.3 定位于较大细胞器的SNARE
•   2.4 定位在质膜的SNARE
•   2.5 内质网、细胞核SNARE共定位验证
•   2.6 高尔基体/内体SNARE共定位验证
•   2.7 液泡、晚内体SNARE共定位验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张正坦,朱婧,谢志平

关键词: 亚细胞定位,酿酒酵母,共定位

来源: 中国生物工程杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室

基金: 上海市自然科学基金探索类项目(18ZR1420400),上海市教育委员会科研创新计划(2017-01-07-00-02-E00035)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191006

页码: 44-57

总页数: 14

文件大小: 1815K

下载量: 107