呼图壁县公共检验检测中心新疆呼图壁县
摘要：本文提供一种食品中多种添加剂含量的快速测定方法，通过对HPLC的色谱条件的优化，建立了一种快速检测食品中的山梨酸、苯甲酸和糖精钠的HPLC方法，并用于实际样品的检测。采用本文的方法，快速、准确，提高了检测效率，降低了检测成本。
关键词：HPLC；食品；食品添加剂
1、概述
食品添加剂是指为改善食品色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入到食品中的化学合成物质或天然物质。目前，随着食品添加剂的种类和使用不断增加，其安全性受到广泛关注。经常食用添加剂超标的食品，会对人体消化道造成刺激，严重者还会损伤肝脏，造成食物中毒，所以要严格控制其使用量。苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用的食品添加剂，国家卫生标准严格规定了它们的使用限量。目前，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的常用测定方法有气相色谱法(GC)、薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)；糖精钠的测定有GC法、TLC法和离子选择电极法(ISE)。TLC法操作复杂，仅可半定量分析；ISE法需特殊设备；HPLC法应用广泛，可同时对3种添加剂进行测定。国标GB/T23495-2009就是采用高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。但是，国标方法在实际工作中检测时间较长。
2、色谱条件优化
根据国家标准，当甲醇与乙酸铵比例为5∶95时，苯甲酸的保留时间为10.315min，山梨酸的保留时间为14.282min，糖精钠的保留时间为18.382min，为了缩短检测时间，提高检测效率，选择调整2种溶剂的比例。当流动相甲醇与乙酸铵的比例(V/V)从5∶95改变至55∶45时，发现流动相中甲醇的体积直接影响分析物的出峰时间，甲醇体积增加，所有分析物的保留时间都缩短，其中以糖精钠尤为明显。当调整流动相甲醇与乙酸铵的比例(V/V)为40∶60时，在5min内可以完成检测，各组分均得到较好的分离，色谱峰分离度达到3.0以上，拖尾因子小，色谱峰型尖锐。出峰顺序为糖精钠、苯甲酸、山梨酸，出峰保留时间分别为3.587、4.176和4.788min。
3、检测波长的选择
糖精的最大紫外吸收波长为202nm、苯甲酸为230nm、山梨酸为253nm。糖精的最大吸收波长与甲醇的截止波长靠近，如果采用202nm作为检测波长，则流动相本身吸光度太大。如果用253nm作为检测波长，糖精的吸收太弱。综合以上采用230nm作为检测波长。
4、标准曲线
分别移取糖精钠和苯甲酸、山梨酸标准储备液各0.00，0.25，0.50，1.00，2.00，4.00mL于10mL容量瓶，用蒸馏水定容至刻度，得到苯甲酸、山梨酸浓度为0，0.00625，0.0125，0.025，0.05，0.1g/L和糖精钠浓度为0，0.0125，0.025，0.05，0.1，0.2g/L标准系列。按优化的色谱条件测定峰面积，3种添加剂的工作曲线及相关性见表1。
表13种添加剂的工作曲线
由表1可见，苯甲酸、山梨酸、糖精钠校正曲线的线性关系良好(相关系数均大于0.99900)。
5、精密度、准确度试验
在优化色谱条件下，连续吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准混和液(浓度分别为0.025，0.025，0.05g/L)10μL注入色谱仪，分别测定各组分保留时间、峰高和峰面积，计算标准样品的相对标准偏差(RSD)。苯甲酸、山梨酸和糖精钠保留时间的RSD范围为0.092%-0.122%；峰面积的RSD范围为0.889%-0.979%。中国药典HPLC规定，杂质含量低于0.5%的样品，色谱峰面积的RSD应小于10%；杂质含量在0.5%-2%的样品，色谱峰面积的RSD应小于5%；杂质含量大于2%的样品，峰面积的RSD应小于2%。因此，表明该方法具有很好的准确度和精密度。
6、举例分析
6.1汽水类和茶饮料
汽水类和茶饮料直接称取饮料5.000g，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(体积比为1∶1)调pH值约7。加水定容至25mL，经滤膜过滤，超声脱气。将HPLC甲醇和0.02mol/L乙酸铵分别经溶剂过滤装置将流动相过滤，超声脱气。取样品处理液各10μL，ODSC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，紫外检测波长230nm，进样量10μL。流动相:V(甲醇)∶V(乙酸铵溶液)(0.02mol/L)=40∶60，流速1.0mL/min，柱温35℃。在某品牌碳酸饮料中检测到苯甲酸，含量为0.01.g/L；茶饮料中未检出3种添加剂。
6.2果汁类
果汁类类样品全部样品充分离心沉淀，取上清液。分别称取果汁5.000g，分别用氨水(体积比为1∶1)调pH值约7，加水定容至25mL，经滤膜过滤，超声脱气。将HPLC甲醇和0.02mol/L乙酸铵分别经溶剂过滤装置将流动相过滤，超声脱气。取样品处理液各10μL，ODSC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，紫外检测波长230nm，进样量10μL。流动相:V(甲醇)∶V(乙酸铵溶液)(0.02mol/L)=40∶60，流速1.0mL/min，柱温35℃。在某品牌果汁中检测到山梨酸，含量为0.002g/L。
6.3调料类
调料类样品称取酱油10.0290g，直接加水定容至10mL，经滤膜过滤，超声脱气。将HPLC甲醇和0.02mol/L乙酸铵分别经溶剂过滤装置将流动相过滤，超声脱气。取样品处理液各10μL，ODSC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，紫外检测波长230nm，进样量10μL。流动相:V(甲醇)∶V(乙酸铵溶液)(0.02mol/L)=40∶60，流速1.0mL/min，柱温35℃。在某品牌酱油中检测到苯甲酸，含量为0.02g/L。
7、结语
通过本文描述的方法实现了对几种食品添加剂山梨酸、苯甲酸和糖精钠的快速检测，使这几种添加剂的检测时间由国标中的20min缩短到5min内完成，且各组分均得到较好的分离，对实际样品的检测结果表明该色谱条件的HPLC法快速、准确，重现性好，可以在各类食品检测中得到的应用。
参考文献
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作者简介
雷学梅，女，1973年12月，单位：呼图壁县公共检验检测中心，高级工程师，研究方向:食品、农副产品检验的研究。