导读:本文包含了可溶性因子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脐带间充质干细胞,混合淋巴细胞反应,T淋巴细胞,免疫抑制作用
可溶性因子论文文献综述
何海萍[1]（2018）在《脐带华氏胶来源间充质干细胞及其分泌的可溶性因子IDO的免疫抑制作用》一文中研究指出探讨人脐带华氏胶来源的间充质干细胞(WJ-MSCs)及其分泌的可溶性因子IDO发挥的免疫调节作用.本研究利用人脐带华氏胶分离培养间充质干细胞,从健康人脐带血、外周血分离获取单个核细胞,通过流式分析来检测细胞表型,通过与T淋巴细胞直接接触培养及Transwell间接培养观察混合淋巴细胞反应(MLR)中WJ-MSCs的免疫调节作用,并利用IDO抑制剂1甲基色氨酸(1MT)来检测其所发挥的干预作用.研究表明:WJ-MSCs阳性表达CD73、CD90、CD105、HLA-ABC;阴性表达CD45、CD34、HLA-DR.在混合淋巴细胞反应中,反应性T淋巴细胞的增殖可以被来自不同供者或是来自第叁方的间充质干细胞有效的抑制. WJ-MSCs的免疫抑制作用是通过与淋巴细胞直接接触及释放的可溶性细胞因子共同实现的,与Transwell间接培养相比较,与T淋巴细胞直接接触培养的WJ-MSCs表达了更强的免疫抑制效果,同时WJMSCs的抑制作用可被IDO抑制剂部分逆转,这表明IDO是WJ-MSCs分泌的可溶性免疫抑制因子之一.(本文来源于《昆明理工大学学报(自然科学版)》期刊2018年06期）
李鹏,陈凡帆,谢伟,张昊,钟文军[2]（2016）在《海马可溶性因子体外诱导分化大鼠内源性神经干细胞为胶质样细胞》一文中研究指出目的探索内源性神经干细胞在大鼠海马可溶性因子中的体外发育归宿及分化鉴定。方法显微镜下分离Wistar大鼠海马组织放置于低温DMEM/12培养基,低温振荡2小时后高速离心(15000 g),获取实验所用海马组织可溶性因子。取材出生1天的Wistar乳鼠海马中的内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,ENSCs),将ENSCs分别于含海马可溶性因子终浓度为0(对照组)、50、100、200、400μl/m L的无血清DMEM/F12培养基中培养6天并每日观察,使用免疫细胞化学、Western Blot印记技术比较各组ENSCs中Nestin、CD133的表达量;同时计量并比较各组ENSCs成球个数,以探索在模拟颅内微环境情况下,ENSCs发育、归宿及分化。进一步于最适宜的海马可溶性因子终浓度中分化神经球,对分化的细胞行神经元特异性蛋白入(如:β-tubullin III、MAP2)及胶质细胞特异性蛋白(如:GFAP、S100及p75 NGFR)免疫细胞化学检测。结果大鼠ENSCs在培养基中呈单细胞漂浮生长,球形;ENSCs于海马可溶性因子各实验分组中培养第2天呈细胞球状态,对照组中无细胞球形成(与100μl/m L组比较,P1=0.00),100μl/m L组与对照组比较有统计学意义(P1=0.00<0.05);至第6天,在100μl/m L组中的细胞球数量明显多于其余各组(P1’=P2’=P3’=P4’=0.00)。在免疫细胞化学检测中,100μl/m L组中细胞球表达干细胞高亲和蛋白Nestin、CD133阳性,Western Blot免疫印迹检测其中Nestin、CD133蛋白高于对照组。进一步分化试验中,细胞球呈贴壁生长的单细胞状态、有突起伸出、长梭形,免疫细胞化学检测分化的细胞表达胶质细胞特异性蛋白GFAP、S100、p75NGFR阳性,但不表达神经元特异性蛋白β-tubullin III与MAP2。结论大鼠ENSCs在终浓度为100μl/m L的HSF作用下,可促进ENSCs的增殖分裂;ENSCs在同样浓度下的HSF中可进一步分化为表达GFAP、S100、p75NGFR阳性的胶质样细胞;100μl/m L的HSFS是ENSCs的一种生理性诱导剂或参与促进ENSCs增殖、分化及通过细胞替代或因子分泌等机制修复神经损伤。(本文来源于《广州医药》期刊2016年01期）
王艳[3]（2015）在《过表达Hsp75削弱小胶质细胞可溶性因子对神经干细胞毒性作用与机制的研究》一文中研究指出阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的神经退行性疾病。其临床表现为记忆力、抽象思维能力和语言功能的减退,情感和行为异常,丧失工作能力和独立生活能力。目前临床用于治疗AD的药物主要有作用于胆碱能神经系统的药物,其中多数为胆碱酯酶抑制剂。此外,还有N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体阻断剂等。但是,这些药物只能用来预防及缓解AD的发生及发展,并不能起到根治的作用。因此,寻求新的治疗AD的方法成为了目前关注的焦点。近年来,干细胞技术不断地完善与提高,给AD的治疗带来了曙光。但是,自从人们提出用神经干细胞技术治疗AD的构想以来,无论是通过促进AD患者内源性神经细胞生成还是通过外源性移植神经干细胞治疗AD都未取得明显的进展,提示AD患者颅内“微环境”的改变可能影响着脑内神经干细胞的生存和功能的发挥。我们的前期研究已经证实：AD患者颅内“微环境”的改变与β-淀粉样蛋白(Aβ)密切相关,其能刺激小胶质细胞释放炎性因子及趋化因子导致神经干细胞的失能。因此,寻求一种方法来削弱Aβ通过小胶质细胞对神经干细胞造成的损害成为了本课题研究的主要目的。近年来,线粒体在AD的研究已经成为了一个热点；线粒体不仅为细胞提供能量,也参与了细胞凋亡和坏死的调控。我们的前期研究已经证实,线粒体病变与AD存在着密切的关系,特别是AD颅内环境中的炎性因子加剧了线粒体的损伤。大量研究证明：线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, mPTP)在维持线粒体功能、调控细胞的凋亡和坏死中起着重要的作用。mPTP是一个横跨于线粒体内外膜由多种蛋白质组成的非选择性通道,在正常的生理情况下呈关闭的状态或者低通透性的状态,仅分子量不超过1.5kDa的小分子物质才能通过这一孔道；但是在异常的病理情况下,mPTP呈高通透状性态,会引起线粒体的肿胀和外膜的破裂,细胞色素C (cytochrome c, Cytc)等促凋亡物质释放入细胞浆中,激活caspase酶,最终导致细胞的凋亡和坏死,这一过程也称线粒体依赖性凋亡途径。目前,关于mPTP的确切成分存在着许多争议,但是越来越多的研究认为线粒体基质内亲环素D(Clophilin D, CypD)是mPTP的主要成分,也是mPTP形成的启动子；在外界相关刺激因素下,CypD介导了mPTP的形成与开放。热休克蛋白75 (heat shock protein 75, Hsp75)也称为肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor necrosis factor receptor associated protein 1),其主要定位于线粒体,是一种线粒体蛋白,属于Hsp90家族的成员之一。既往研究已经证实：Hsp75的合成受外界多种环境刺激的影响,包括低糖、缺血缺氧、紫外照射等。此外,Hsp75在维持线粒体功能和调控细胞的死亡也起着至关重要的作用,越来越多的研究表明：Hsp75是一个抗凋亡的蛋白,特别是在心肌细胞及肿瘤细胞中都已证实了其抗凋亡的作用；但是关于Hsp75在阿尔茨海默病中的作用及其机制,在国内外的研究中还尚未报道。基于上述研究,本课题建立了一个Transwell共培养系统,将神经干细胞和小胶质细胞分别接种于共培养系统的下室和上室以观察两种细胞间非接触性的相互作用。通过构建携带Hsp75基因的腺病毒去感染神经干细胞,使神经干细胞过表达Hsp75蛋白,研究Hsp75蛋白在Aβ刺激小胶质细胞释放可溶性介质对神经干细胞影响中的作用,并进一步从分子水平上去探讨Hsp75蛋白是否通过CypD依赖的mPTP这一通路去调控细胞的功能。本研究成果丰富了AD发病机制的理论基础,也为今后AD的临床治疗提供了技术支持。方法1.重组腺病毒Ad-Hsp75-GFP的构建利用PCR的方法扩增Hsp75基因,凝胶电泳鉴定；pHBAd-MCMV-GFP载体质粒和目的基因Hsp75经酶切、片段回收、连接后,获得重组质粒pHBAd-MCMV-Hsp75-GFP。通过酶切、测序鉴定后,将该重组质粒和骨架质粒共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad-Hsp75-GFP,行PCR鉴定和TCID50法进行病毒滴度的测定。2.神经干细胞C17.2和小胶质细胞BV-2的培养C17.2神经干细胞培养于10%胎牛血清、5%马血清的DMEM高糖培养基中,于37℃的5%C02培养箱中培养,每2天换液1次,并于显微镜下观察细胞的生长情况。待细胞生长至占培养瓶底面积约80-90%时,弃去培养基,用PBS缓冲液洗两次,加入1ml的胰酶消化细胞；当细胞在镜下呈收缩渐渐变圆时弃去胰酶,加入含10%FBS的DMEM培养基吹打终止消化。吹打均匀后,用细胞计数板进行计数接种于新的培养瓶,于37℃、5%C02培养箱中继续培养,取第3-7代的细胞用于后续实验。BV-2细胞的培养方法与C17.2细胞的培养方法类似,只需将培养基换为含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基即可。3.重组腺病毒感染C17.2神经干细胞及相关检测将C17.2细胞接种于6孔板(或96孔板),接种密度为2x105个/孔(或lx104个/孔),培养基为含10%胎牛血清、5%马血清的DMEM高糖培养基。置于37℃、5%CO2的孵箱中培养,12h后去除培养基,用PBS漂洗2次,添加感染复数为100的腺病毒液和1ml无血清DMEM高糖培养基,感染2h后弃去含病毒的培养基,用PBS漂洗2次,换2ml含10%胎牛血清、5%马血清的DMEM高糖培养基,于孵箱中继续培养36h后,进行如下相关检测：(1)在荧光显微镜下观察GFP荧光的表达情况。(2)弃去培养基,用PBS漂洗2次,胰酶消化收集细胞,PBS重悬制细胞悬液,用流式细胞仪检测腺病毒在C17.2细胞中的感染率。(3)于倒置相差显微镜下,观察细胞感染前和感染后的形态。(4)对感染前后的神经干细胞进行免疫细胞化学检测,采用神经干细胞特异性抗体nestin进行标记,DAPI对细胞核进行复染,并于荧光显微镜下观察。(5)对感染前后的神经干细胞进行MTT的活性检测,步骤如下：腺病毒感染36h后,弃去培养基,PBS漂洗3次,于每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl,37℃培养箱中避光孵育4 h,弃去上清液,加入150μl的二甲基亚砜(DMSO),震荡混匀使结晶充分溶解,以酶标仪490nm波长检测OD值。(6)对感染前后的神经干细胞行Western blot检测：用细胞裂解液处理细胞,离心后取上清,BCA法测蛋白质含量,10%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,将蛋白半干转至PVDF膜上,封闭液封闭后,加入Hsp75多克隆抗体和β-actin小鼠单克隆抗体,之后用辣根过氧化物酶结合的二抗结合,ECL法显色后扫描。4.Aβ1-42多肽的准备将Aβ1-42溶解于35%的乙腈中,使用PBS稀释到储存浓度10mM。将稀释后的药物放置于37℃的培养箱中老化48h,促进Aβ1-42的聚集和纤维化,置于-20℃的冰箱中保存；使用时用培养基稀释到工作浓度10μM即可。5. Transwell共培养体系的构建及分组(1)空白对照组(Control):C17.2细胞培养于下室,上室不接种BV-2细胞,用正常培养基培养。(2)Aβ1-42直接作用组(NSCs+Aβ1-42):C17.2细胞培养于下室并加入终浓度10μMAβ1-42的培养基。(3)共培养对照组(NSCs-MG):C17.2与BV-2以1：1的密度分别接种于共培养体系的下室和上室,用正常的培养基培养。(4)Aβ1-42作用的共培养组(NSCs-MG+Aβ1-42):C17.2与BV-2以1：1密度分别接种于共培养体系的下室和上室,培养体系为终浓度10 μM Aβ1-42的培养基(5)腺病毒阴性感染组(Ad-GFP+Aβ1-42):感染了阴性腺病毒的C17.2神经干细胞与正常BV-2小胶质细胞以1：1的密度分别接种于共培养体系的下室和上室,培养体系为终浓度10μM Aβ1-42的培养基(6)腺病毒阳性感染组(Ad-Hsp75+Aβ1-42):感染了携带目的基因腺病毒的C17.2神经干细胞与正常BV-2小胶质细胞以1：1的密度分别接种于共培养体系的下室和上室,培养体系为终浓度10μMAβ1-42的培养基。6.流式细胞仪分析神经干细胞的凋亡率按照各实验分组的情况分别对各组施加处理因素后,收集细胞,用预冷的PBS洗2次,然后用试剂盒专用的Binding buffer重悬细胞,加入5μl的Annexin V-APC,室温避光孵育15min后再加入5μl的7-AAD试剂,上流式机检测神经干细胞的凋亡率。7. TMRE染色法分析神经干细胞线粒体的膜电位按照分组处理后,弃去培养基,用预冷的PBS漂洗2次,加入终浓度为100nM的TMRE染液,37℃下避光孵育15min, PBS漂洗3次后,于荧光显微镜下拍照。8. Western blot检测神经干细胞中Hsp75、Cytc、CypD、Caspase-3蛋白的表达按照分组处理后,弃去培养基,收集各组细胞提取总蛋白,BCA进行蛋白定量,用Western blot方法检测各组的Hsp75、CypD、Caspase-3、Cytc蛋白的表达水平。9. q-PCR检测神经干细胞中CypD、Caspase-3的mRNA表达按照分组处理后,弃去培养基,收集各组细胞提取总RNA,用q-PCR方法检测各组CypD和Caspase-3的mRNA表达水平。10.统计学处理文章数据采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析,结果均使用均数±标准误(X±SEM)表示,多组间的比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)。方差齐时采用最小显着性差异法(LSD法)；方差不齐时则采用Dunnett's T3法。p<0.05为差异有统计学意义。结果1.重组腺病毒Ad-Hsp75-GFP的成功构建PCR扩增Hsp75基因后,产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示：在约2100bp处可见特异性片段。所获的重组质粒pHBAd-MCMV-Hsp75-GFP经酶切鉴定显示有2100bp和5300bp两条带,与预期结果一致；经测序结果比对后,与目的序列完全匹配。然后,将该重组质粒和骨架质粒共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad-Hsp75-GFP,行PCR鉴定可获得与预期大小一致2100bp的片段。采用TCID50方法进行病毒滴度的测定,病毒的滴度可达1×1010 PFU/ml。2.重组腺病毒成功感染C17.2神经干细胞重组腺病毒感染C17.2细胞,36h后,置于荧光显微镜下观察,大部分细胞有绿色荧光蛋白的表达；经流式细胞仪检测,腺病毒感染C17.2细胞的感染率约为85%；在倒置相差显微镜下和荧光显微镜下观察到,细胞感染前后其形态无明显的改变,nestin表达也无明显的改变；经MTT检测感染前后细胞的活性,表明感染前后细胞的活性无明显的变化；此外,Western blot检测结果表明：Ad-Hsp75-GFP组与正常组(Control)和腺病毒阴性感染组Ad-GFP相比,Hsp75蛋白表达量明显增加(p<0.05)。3.Hsp75蛋白表达随着小胶质细胞可溶性因子处理时间的延长而增加实验中我们使用Ap1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子处理神经干细胞,探讨小胶质细胞释放的可溶性因子对神经干细胞Hsp75蛋白表达水平的影响,Aβ1-42处理时间分别为6h、12h、24h、36h、48h。我们发现：与空白对照组相比,Aβ1-42直接作用组的神经干细胞Hsp75蛋白明显增加(P<0.05),然而共培养对照组并无显着性的差异(P>0.05)；Aβ1-42作用的共培养组与空白对照组相比,随着Aβ1-42处理时间的增加Hsp75表达也逐渐增加,均具有显着性意义(P<0.05),但在48h时开始有所下降。基于上述的实验结果选取36h作为后续实验Aβ1-42处理的时间。4.Hsp75蛋白降低神经干细胞的凋亡率实验中我们使用Aβ1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子处理神经干细胞,探讨Hsp75蛋白在小胶质细胞释放可溶性因子对神经干细胞凋亡率的影响,Aβ1-42处理时间为36h。我们发现：与空白对照组相比较,Aβ1-42直接作用组的神经干细胞凋亡率显着增加(P<0.05),然而共培养对照组的凋亡率无明显的变化(P>0.05)；与空白对照组相比较,Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组的凋亡率显着增加,具有统计学意义(P<0.05),然而后两组相比较并无显着性意义(P>0.05)；与Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组相比较,腺病毒阳性感染组的干细胞凋亡率明显下降,具有统计学意义(P<0.05)。提示神经干细胞过表达Hsp75蛋白能够减弱Aβ1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子对其的神经毒性。5.Hsp75蛋白保护神经干细胞线粒体的膜电位实验中我们使用Aβ1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子处理神经干细胞,探讨Hsp75蛋白在小胶质细胞释放可溶性因子对神经干细胞线粒体膜电位的影响,Aβ1-42处理时间为36h。我们发现：与空白对照组相比较,Aβ1-42直接作用组的神经干细胞线粒体膜电位显着下降(P<0.05),然而共培养对照组的线粒体膜电位无明显的变化(P>0.05)；与空白对照组相比较,Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组的线粒体膜电位显着下降,具有统计学意义(P<0.05),然而后两组相比较并无显着性意义(P>0.05)；与Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组相比较,腺病毒阳性感染组的干细胞线粒体膜电位明显逆转,膜电位显着增高,具有统计学意义(P<0.05)。提示神经干细胞过表达Hsp75蛋白能够减轻Aβ1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子导致的线粒体膜电位丢失。6.Hsp75蛋白减弱神经干细胞Cytc释放和降低神经干细胞CypD、Caspase-3的表达实验中我们使用Aβ1-42刺激小胶质细胞释放可溶性因子处理神经干细胞,探讨Hsp75蛋白能否削弱小胶质细胞释放可溶性因子导致神经干细胞mPTP的开放及是否通过调节线粒体依赖的凋亡途径发挥对神经干细胞的保护作用,Aβ1-42处理时间为36h。从结果中我们可知：与空白对照组相比较,Aβ1-42直接作用组的Cytc蛋白释放显着增加(P<0.05),然而共培养对照组的Cytc蛋白释放无明显的变化(P>0.05)；与空白对照组相比较,Ap1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组的Cytc蛋白释放量显着增加,具有统计学意义(P<0.05),然而后两组相比较并无显着性意义(P>0.05)；与Aβl-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组相比较,腺病毒阳性感染组的干细胞Cytc蛋白释放量明显下降,具有统计学意义(P<0.05)。同样地,我们通过Western blot的检测和q-PCR的定量分析获得caspase-3蛋白和mRNA的表达结果均与上述Cytc释放的结果一致。这提示我们：Hsp75蛋白过表达减弱神经干细胞Cytc释放,从而降低caspase-3酶的活化,阻断了线粒体依赖的凋亡途径。为了进一步明确Hsp75蛋白在小胶质细胞释放可溶性因子对神经干细胞CypD表达中所起的作用,我们采用Western blot和q-PCR来检测神经干细胞CypD蛋白的表达和mRNA的表达。我们发现：与空白对照组相比较,Aβ1-42直接作用组的CypD含量显着增加(P<0.05),然而共培养对照组的CypD含量无明显的变化(P>0.05)；与空白对照组相比较,Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组的CypD含量显着增加,具有统计学意义(P<0.05),然而后两组相比较并无显着性意义(P>0.05)；与Aβ1-42作用的共培养组和腺病毒阴性感染组相比较,腺病毒阳性感染组的干细胞CypD含量明显下降,具有统计学意义(P<0.05)。类似地,我们采用q-PCR方法对神经干细胞CypD mRNA表达进行定量分析,所获得的结果与上述CypD蛋白定量结果一致。这提示着：Hsp75蛋白的过表达降低了mPTP形成的启动子即CypD的表达。结论1.成功克隆了人的Hsp75基因,并构建了人Hsp75复制缺陷型腺病毒载体(Ad-Hsp75-GFP),为下一步感染神经干细胞做了准备。2.重组腺病毒成功感染C17.2神经干细胞,感染效率高且无毒性,证实了腺病毒感染C17.2神经干细胞是一种可行且安全的方法。3.小胶质细胞可溶性因子诱导神经干细胞Hsp75表达的增多,并且随着处理时间的延长,Hsp75蛋白增加越明显,是神经干细胞的一种内源性保护反应。4.在小胶质细胞可溶性因子处理神经干细胞的情况下,神经干细胞过表达Hsp75蛋白能够减轻可溶性因子诱导的神经毒性即凋亡率下降、膜电位丢失减少。5.Hsp75蛋白能够通过减少CypD依赖型mPTP的开放,从而阻断小胶质细胞可溶性因子诱导的线粒体依赖凋亡途径的激活,起到保护神经干细胞的作用。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-05-01）
李敏敏,邹亚伟,彭淑梅,唐远平,林英[4]（2014）在《白血病患儿骨髓间质细胞通过可溶性因子介导耐药的研究》一文中研究指出背景靶向肿瘤微环境的辅助化疗逐渐成为肿瘤领域研究的热点,间充质干细胞(MSC)作为肿瘤微环境中的重要成员,因其调节免疫的能力备受关注,更被应用到骨髓移植中用于移植物抗宿主病的治疗,但间充质干细胞在多种肿瘤体系中被证明能通过多种粘附和非粘附机制及其多重信号通路引起肿瘤耐药。目的探讨儿童间充质干细胞培养上清的可溶性因子对白血病细胞株K562、Jurkat、K562/A02在细胞毒性药物处理下的保护作用。方法从儿童急性白血病患儿骨髓中分离单个核细胞,体外培养间充质干细胞,制备间充质干细胞条件培养基,作用于白血病细胞株K562、Jurkat、K562/A02,流式细胞仪检测白血病细胞株在多柔比星诱导的凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;荧光定量PCR检测Bcl-2、Mcl-1、COX-2基因表达量的变化。结果K562、Jurkat、K562/A02细胞株的MSC条件培养基组加多柔比星诱导凋亡后,细胞存活率高于只加多柔比星的对照组(P<0.05);加MSC条件培养基后,K562、Jurkat、K562/A02细胞株的细胞周期出现阻滞,G0-G1期细胞比例增加(P<0.05);MSC条件培养基上调Jurkat、K562及K562/A02白血病细胞株Bc卜2基因的表达(P<0.05),上调K562/A02的COX-2基因表达(P<0.05)。结论MSC分泌的可溶性因子抑制多柔比星诱导的细胞凋亡,使白血病细胞周期停滞在G0/G1期,上调白血病细胞株Bcl-2基因的表达,上调K562/A02的COX-2基因表达。(本文来源于《广东省遗传学会第九届代表大会暨学术研讨会论文及摘要汇编》期刊2014-12-19）
李敏敏,邹亚伟,彭淑梅,唐远平,林英[5]（2014）在《可溶性因子在白血病患儿骨髓间质细胞耐药中的作用》一文中研究指出目的探讨儿童间充质干细胞(MSCs)培养上清的可溶性因子对白血病细胞株K562、Jurkat、K562/AO2在细胞毒性药物处理下的保护作用。方法从儿童急性白血病患儿骨髓中分离单个核细胞,体外培养间充质干细胞,制备MSCs条件培养基,作用于白血病细胞株K562、Jurkat、K562/AO2,根据培养基及所加药物分为对照组、共培养组、单独加COX-2抑制剂组和共培养加COX-2抑制剂组。流式细胞仪检测白血病细胞株在多柔比星诱导的凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;荧光定量PCR检测Bcl-2、Mcl-1、COX-2基因表达量的变化。结果 K562、Jurkat、K562/AO2细胞株的共培养组加多柔比星诱导凋亡后,细胞存活率高于只加多柔比星的对照组(P<0.05);加MSCs条件培养基处理后,K562、Jurkat、K562/AO2细胞株的细胞周期出现阻滞,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);MSCs条件培养基处理后Jurkat、K562及K562/AO2白血病细胞株Bcl-2基因的表达上调(P<0.05),K562/AO2的COX-2基因表达上调(P<0.05)。结论 MSCs分泌的可溶性因子抑制多柔比星诱导的细胞凋亡,使白血病细胞周期停滞在G0/G1期,上调白血病细胞株Bcl-2基因的表达,上调K562/AO2的COX-2基因表达。(本文来源于《广东医学》期刊2014年21期）
王绮如,阎琦[6]（2013）在《骨髓内皮细胞来源的可溶性因子调节造血系、内皮系及胚胎干细胞的分化和增殖(英文)》一文中研究指出本研究室建立了一支骨髓内皮细胞(bone marrow endothelial cell,BMEC)株。本文综述了这一内皮细胞株细胞的条件培养液(bone marrow endothelial cell-conditioned medium,BMEC-CM)对造血系、内皮系及胚胎干细胞的分化增殖的作用。(1)BMEC-CM促进造血系细胞的分化和增殖;(2)BMEC-CM促进内皮系细胞的分化和增殖;(3)BMEC-CM诱导造血干/祖细胞向内皮系细胞分化;(4)BMEC-CM诱导胚胎干细胞分化为造血细胞和内皮细胞。以上研究成果提示,骨髓内皮细胞分泌可溶性因子支持造血系及内皮系细胞的分化与增殖,促进造血系细胞向内皮系细胞的横向分化,诱导胚胎干细胞分化为造血细胞和内皮细胞。本文进一步阐述了造血系与内皮系之间的密切关系,对缺血性疾病及肿瘤疾病提供有效治疗策略。(本文来源于《生理学报》期刊2013年04期）
李翔[7]（2007）在《重症肌无力患者外周血调节性T细胞及相关可溶性因子在其发病机制中的研究》一文中研究指出重症肌无力(myasthenia gravis，MG)是乙酰胆碱受体抗体(acetylcholinereceptor antibodies，AChR-ab)介导的、细胞免疫依赖及补体参与的神经肌肉突触传递障碍的自身免疫性疾病。目前认为，致病性自身抗体的产生主要依赖于T辅助(Th)细胞产生的细胞因子，并且疾病进程中同时会伴有补体水平下降，存在大量的补体消耗。总之，MG是一种多种免疫相关因素参与的自身免疫性疾病，免疫平衡的破坏在其发病机制起到重要作用。近来外周免疫机制重要组成成分，调节性T细胞尤其是CD4~+CD25~+Treg细胞在各类自身免疫性疾病中的作用越来越受到重视。很多研究证实MG患者外周血中存在异常比例的CD4~+CD25~+Treg细胞并RMG患者胸腺CD4~+CD25~+Treg细胞功能异常，这些都可能参与疾病的发生与发展。我们着眼于外周血CD4~+CD25~+Treg细胞，特别是高表达CD25的Treg细胞，采用四色流式细胞仪分析这群细胞在MG患者外周血中的水平及其重要标志，特别是与Treg细胞生成和功能密切相关的重要的分子(如Foxp3)的表达情况；此外，我们还分析了MG患者其他各类调节性T细胞的表达以及B细胞的激活情况，及其与CD4~+CD25~(high)Treg细胞之间的关系；采用磁珠分选及氚标胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入法检测MG患者外周血CD4~+CD25~+Treg细胞的功能情况。鉴于体液免疫MG在其发病机制中所起的重要作用，而调节性T细胞的生成与功能的发挥也离不开细胞因子的作用，我们还采用了酶联免疫吸附(ELISA)法检测了MG患者及正常对照体内的各类细胞因子及粘附分子的分泌，分析其与调节性T细胞之间的联系。A：重症肌无力患者外周血CD_4~+CD_(25)~(high)调节性T细胞及其动态观察目的研究重症肌无力(myasthenia gravis，MG)患者外周血CD4~+CD25~(high)T细胞的水平，以及各种治疗方法对其的影响。方法应用四色流式细胞仪检测55例MG患者与33名健康对照外周血CD4~+CD25~(high)T细胞百分率，对其中26例MG患者进行了治疗前后的动态检测。结果MG患者与健康对照外周血CD4~+CD25~(high)T细胞百分率分别为6．2％±3．4与5．2％±1．9，差异无统计学意义(p=0．061)，而21例非手术治疗患者其外周血CD4~+CD25~(high)T细胞百分率的变化与病情评分的变化呈负相关(r=-0．563，p=0．008)。结论这种短期非手术治疗前后的CD4~+CD25~(high)T细胞的变化情况可能与病情相关，但胸腺切除后早期观察的情况有所不同。B：重症肌无力患者外周血调节性T细胞及B细胞激活因子受体的分析目的基于外周血CD4~+CD25~(high)T细胞在重症肌无力(MG)患者中没有区别，本文进一步研究MG患者外周血CD4~+CD25~(high)T细胞Fxop3的表达及CD8~+调节性T细胞的水平及B细胞激活因子受体(B cell-activating factor receptor，BAFF-R)在B细胞上的表达情况。方法应用四色流式细胞仪检测61例MG患者与23名健康对照外周血调节性T细胞(CD4~+CD25~(high)Foxp3~+、CD8~+CD28~-、CD8~+CD122~+)以及CD19~+BAFF-R~+细胞的百分率。结果MG组与健康对照组外周血CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T细胞的百分率分别为32．1％±16．1与65．2％±14．7，MG组该群调节性T细胞的水平明显低于健康对照(p<0．01)；两组CD8~+CD28~-及CD8~+CD122~+T细胞的水平差异无统计学意义(p>0．05)。此外，MG组外周血CD19~+BAFF-R~+细胞的水平(10．6％±5．6)显着高于健康对照组(5．4％±3．9，p<0．01)。大剂量激素或大剂量激素加丙种球蛋白治疗短期内可使MG组外周血CD4~+CD25~(high)Foxp3~+调节性T细胞的百分率增加(p<0．05)。结论MG患者Foxp3~+的CD4~+CD25~(high)调节性T细胞的减少提示MG患者存在免疫和耐受的失衡，显示了T细胞的自身免疫性。在B细胞方面，MG患者外周血CD19~+B细胞上BAFF-R表达增高，提示其体内B细胞已处于易激活状态。C：重症肌无力患者外周血调节性CD4~+CD25~+T细胞的功能研究目的：研究MG患者CD4~+CD25~+T细胞的功能。方法：流式细胞仪分析CD4~+CD25~(high)T细胞表面可能与功能相关的分子，GITR、Neuropilin-1、CTLA-4(CD152)及CD103，与凋亡相关的分子(CD95)；我们还分离出MG患者及正常对照的CD4~+CD25-~T细胞与CD4~+CD25~+T细胞，分组如下：A：CD4~+CD25~-T；B：CD4~+CD25~-T与CD4~+CD25~+T细胞；C：CD4~+CD25~+T细胞。各组单独培养或共培养后，氚标胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入法检测各组增殖情况，ELISA检测细胞因子的分泌。结果：1)MG患者外周血CD4~+CD25~(high)Neuropilin-1~+T及CD4~+CD25~(high)CD103~+T细胞百分率明显低于正常对照；2)细胞增殖情况：MG患者B组CPM计数高于A组(p=0．0158)与C组(p=0．0676)，而正常对照各组之间未见差异。3)培养后细胞因子TGF-β、IL-10及sICAM-1的分泌结果：sICAM-1：A、B组：MG患者高于正常对照；C组两者未见显着差异。IL-10：A组、B组未见差异；而C组正常对照水平高于MG患者。TGF-β各组均未见显著差异。结论：与正常对照相比，MG患者外周血CD4~+CD25~+T细胞表面部分功能相关分子的表达降低，其抑制功能及IL-10的分泌也低于正常；此外，MG患者外周血CD4~+CD25~-T细胞可能分泌更多的sICAM-1。A：重症肌无力患者血清及外周单个核细胞培养上清液各类细胞因子、sCTLA-4及sICAM-1的研究目的：重症肌无力(MG)是一种T细胞介导的抗体依赖的神经肌肉接头障碍的自身免疫性疾病。许多研究表明T辅助细胞及细胞因子可能参与了MG的发生发展。为此，我们研究了MG患者及正常对照血清及外周单个核细胞(PBMC)培养上清液Th1、Th2、Th3、炎症性细胞因子、sCTLA-4及sICAM-1的分泌情况，分析其在MG中的作用。方法：主要采用应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测75例MG患者与50例正常对照血清及其中40例MG患者与20例正常对照PBMC培养48小时后上清液各类可溶性因子的分泌水平。结果：血清及细胞培养上清液中MG患者IL-2，IL-4，IL-10，IL-13，IFN-γ，TNF-β，TGF-β及sCTLA-4的水平与正常对照相比未见显着差异(P>0．05)，MG患者血清中IL-12的水平有所下降(P<0．05)，而sICAM-1水平在血清(p=0．054)及上清液(P<0．01)中均高于正常对照。结论：MG患者血清及培养上清液中各类细胞因子水平与正常对照相比B：检测重症肌无力患者体内sICAM-1水平的有效方法目的细胞间粘附分子(ICAM-1)，尤其是可溶性ICAM-1(sICAM-1)是很多疾病的重要相关指标。本实验旨在研究sICAM-1与重症肌无力(MG)的关系。方法应用酶联免疫吸附技术(ELISA)定量检测MG患者及正常对照血清及外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中sICAM-1的水平。结果血清中MG患者与正常对照之间sICAM-1的水平无差异，而PBMC培养上清液中MG患者显着高于正常对照；10例正常对照PBMC培养液中加自身血清的sICAM-1水平显着高于加胎牛血清(FBS)的培养上清液，而IL-10、IL-12、TNF-α的水平均为加FBS高于加自身血清，IL-4则未见变化；加入激素共培养48小时后，7例MG患者sICAM-1水平显着下降，而大剂量激素治疗一月后患者血清水平却未见变化。结论MG患者的PBMC分泌更多的sICAM-1；与血清相比，检测PBMC培养上清液中sICAM-1的水平是一种较好的研究方法；激素可以减少PBMC中sICAM-1的分泌，但是这种改变未见于高剂量激素治疗后MG患者的血清水平。结论：1．MG患者存在CD4~+CD25~+Treg细胞的缺陷，并且B细胞处于更易激活的状态。这种T细胞的失衡和B细胞的活化可能有助于MG的发生和发展。2．MG患者体内血清IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α、TGF-β以及sCTLA-4未见显着差异，但其sICAM-1的水平高于正常，并且升高的sICAM-1可能主要由MG患者外周血反应性CD4~+CD25~-T细胞分泌。3．动态观测MG患者外周血CD4~+CD25~(high)T细胞的表达及其外周血单个核细胞sICAM-1的分泌有助于进一步了解疾病的变化情况。(本文来源于《复旦大学》期刊2007-10-20）
乔天武[8]（2006）在《小鼠卵丘细胞通过分泌可溶性因子促进卵母细胞老化》一文中研究指出哺乳动物卵母细胞一般停滞在MⅡ期,当有精子穿入或者受到适当的刺激可以解除停滞,恢复减数分裂。但若卵母细胞因未能及时受精或激活而导致停滞在MⅡ期的时间过长会发生质量下降称之为卵母细胞的老化。老化的卵母细胞由于其成熟促进因子(MPF)活性的下降导致孤雌激活敏感性的显着增加。卵丘细胞作为围绕在卵母细胞周围的颗粒细胞亚群,对于卵母细胞减数分裂阻滞、减数分裂的恢复、卵母细胞的成熟和受精都起着重要的作用。排卵后卵丘细胞随卵母细胞一起排入输卵管中,已经证明小鼠排卵后卵丘细胞能促进卵母细胞的老化。但是关于卵丘细胞促进卵母细胞老化的作用机理还不清楚,本论文通过DO与COC的共培养、DO与细胞单层共培养、COC和细胞单层的条件化培养基处理DO等方法研究了卵丘细胞是通过什么方式促进卵母细胞老化的;通过卵母细胞(COC和DO)在不同温度条件下老化研究了不同条件下卵丘细胞分泌老化促进因子(APF)的能力的不同;通过对条件化培养基加热和超低温冻融研究了条件化培养基中的老化促进因子对不同温度处理的反应。结果如下:1.当体内﹑外成熟DOs与体内成熟COCs以1比2共培养6小时时,DOs孤雌激活率显着高于在CZB培养液中单独老化6小时的对照组。当体内﹑外成熟DOs与体外成熟COCs以1比5共培养12小时才能显着增加DOs的孤雌激活率,说明体内成熟的COCs分泌老化促进因子的能力要显着高于体外成熟的COCs。2.用30个COCs在200μl CZB培养液中老化6小时制备的条件化培养基处理COCs或DOs 6小时,能显着加速COCs和DOs的老化进程。但是,15个COCs或30个DOs在200μl CZB培养液中老化6小时制备的条件化培养基处理COCs或DOs 6小时,COCs和DOs的孤雌激活率与对照组相比都无显着差异。说明足够量的COC制备的条件化培养基能促进卵母细胞的老化,并且卵丘细胞促进卵母细胞老化不需要接触而是通过分泌可溶性因子而起作用的。3.hCG 12小时和hCG 18小时的COCs在CZB培养液中老化6小时所制得的条件化培养基促老化能力要显着高于hCG 24小时的COCs在CZB培养液中老化6小时制备的条件化培养基。当增加制备条件化培养(本文来源于《山东农业大学》期刊2006-06-12）
姚静,徐格致[9]（2004）在《可溶性因子在视网膜移植中的作用》一文中研究指出视网膜移植是治疗视网膜疾病的一种新方法,通过细胞与局部微环境中的可溶性因子的相互作用,视网膜前体细胞可以发育成特定的细胞类型。本文主要对可溶性因子在视网膜前体细胞诱导分化为感光细胞中的作用作一综述。(本文来源于《国外医学(眼科学分册)》期刊2004年02期）
曾晓峰[10]（2003）在《破骨细胞的分化及可溶性因子调节》一文中研究指出破骨细胞起源于造血干细胞的粒细胞 巨噬细胞集落形成单位。在它的分化、融合和增生期均受到体内激素和多种可溶性细胞因子的调节 ,介导破骨细胞的骨吸收作用及其对各种细胞因子反应的信号传导通路 ,主要包括环磷酸腺苷 (cAMP)和受体酪氨酸激酶 (R PTK)。了解破骨细胞研究方面的新进展 ,将有助于临床更好地分析各种骨代谢性疾病的病因及发病机制 ,进而为治疗提供理论依据。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2003年03期）
可溶性因子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探索内源性神经干细胞在大鼠海马可溶性因子中的体外发育归宿及分化鉴定。方法显微镜下分离Wistar大鼠海马组织放置于低温DMEM/12培养基,低温振荡2小时后高速离心(15000 g),获取实验所用海马组织可溶性因子。取材出生1天的Wistar乳鼠海马中的内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,ENSCs),将ENSCs分别于含海马可溶性因子终浓度为0(对照组)、50、100、200、400μl/m L的无血清DMEM/F12培养基中培养6天并每日观察,使用免疫细胞化学、Western Blot印记技术比较各组ENSCs中Nestin、CD133的表达量;同时计量并比较各组ENSCs成球个数,以探索在模拟颅内微环境情况下,ENSCs发育、归宿及分化。进一步于最适宜的海马可溶性因子终浓度中分化神经球,对分化的细胞行神经元特异性蛋白入(如:β-tubullin III、MAP2)及胶质细胞特异性蛋白(如:GFAP、S100及p75 NGFR)免疫细胞化学检测。结果大鼠ENSCs在培养基中呈单细胞漂浮生长,球形;ENSCs于海马可溶性因子各实验分组中培养第2天呈细胞球状态,对照组中无细胞球形成(与100μl/m L组比较,P1=0.00),100μl/m L组与对照组比较有统计学意义(P1=0.00<0.05);至第6天,在100μl/m L组中的细胞球数量明显多于其余各组(P1’=P2’=P3’=P4’=0.00)。在免疫细胞化学检测中,100μl/m L组中细胞球表达干细胞高亲和蛋白Nestin、CD133阳性,Western Blot免疫印迹检测其中Nestin、CD133蛋白高于对照组。进一步分化试验中,细胞球呈贴壁生长的单细胞状态、有突起伸出、长梭形,免疫细胞化学检测分化的细胞表达胶质细胞特异性蛋白GFAP、S100、p75NGFR阳性,但不表达神经元特异性蛋白β-tubullin III与MAP2。结论大鼠ENSCs在终浓度为100μl/m L的HSF作用下,可促进ENSCs的增殖分裂;ENSCs在同样浓度下的HSF中可进一步分化为表达GFAP、S100、p75NGFR阳性的胶质样细胞;100μl/m L的HSFS是ENSCs的一种生理性诱导剂或参与促进ENSCs增殖、分化及通过细胞替代或因子分泌等机制修复神经损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
可溶性因子论文参考文献
[1].何海萍.脐带华氏胶来源间充质干细胞及其分泌的可溶性因子IDO的免疫抑制作用[J].昆明理工大学学报(自然科学版).2018
[2].李鹏,陈凡帆,谢伟,张昊,钟文军.海马可溶性因子体外诱导分化大鼠内源性神经干细胞为胶质样细胞[J].广州医药.2016
[3].王艳.过表达Hsp75削弱小胶质细胞可溶性因子对神经干细胞毒性作用与机制的研究[D].南方医科大学.2015
[4].李敏敏,邹亚伟,彭淑梅,唐远平,林英.白血病患儿骨髓间质细胞通过可溶性因子介导耐药的研究[C].广东省遗传学会第九届代表大会暨学术研讨会论文及摘要汇编.2014
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[10].曾晓峰.破骨细胞的分化及可溶性因子调节[J].医学研究生学报.2003