猪δ冠状病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用

论文摘要

为了快速准确地检测猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）,本研究根据PDCoV基因序列保守区设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,建立了一种特异性检测PDCoV的TaqMan-MGB荧光定量方法。结果显示,该方法特异性良好,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型等的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在3.15×108～3.15×101copies/?L范围内具有良好的线性关系;敏感性高,最低检测限为10 copies/?L的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.25%～1.06%和0.58%～1.27%;对临床样品的检测结果显示,本研究建立的荧光定量检测方法对PDCoV的阳性检出率（40%）高于常规PCR方法对PDCoV的阳性检出率（31.7%）。该方法的建立为PDCoV的实验室鉴别诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒和临床样品
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物和探针的设计与合成
•   1.4 病毒RNA的提取和cDNA合成
•   1.5 标准品的制备
•   1.6 反应条件的优化
•   1.7 标准曲线的绘制
•   1.8 特异性试验
•   1.9 敏感性试验
•   1.1 0 重复性试验
•   1.1 1 对临床样品的检测
• 2 结果
•   2.1 标准品的制备
•   2.2 反应条件的优化
•   2.3 荧光定量PCR标准曲线的绘制
•   2.4 特异性试验
•   2.5 敏感性试验
•   2.6 重复性试验
•   2.7 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李晓菲,陈婷,韩薇,孙爱荣,葛晓杰,梁文花,黄艳,王力,王彩宏,魏笑笑,秦立廷

关键词: 猪冠状病毒,探针,荧光定量方法

来源: 中国兽医科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东新希望六和集团有限公司,青岛市黄岛区动物疫病预防与控制中心

基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0500600,2016YFD0501506)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0063

页码: 425-431

总页数: 7

文件大小: 1365K

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