人FAT1基因启动子的克隆鉴定及其功能浅析

论文摘要

目的:克隆人脂肪非典型钙黏蛋白1（FAT atypical cadherin 1,FAT1）基因启动子,找到核心启动子区域并对其转录调控机制进行初步分析。方法:通过PCR方法获得人FAT1基因5′上游1 163 bp（-1 029～+134 bp）的片段,亚克隆至pGL3-basic载体;通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测各重组质粒在A549细胞和HEK293T细胞中的活性,找到核心启动子区域。利用生物信息学方法预测核心区域的转录因子结合位点。结果:经测序、酶切鉴定,成功构建了人FAT1启动子荧光素酶活性报告基因重组质粒。与pGL3-basic质粒相比,人FAT1启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P <0.05）。通过生物信息学软件预测人FAT1启动子区域（-233～-110 bp）可能含有TFAP2C、KLF5等转录因子结合位点。结论:成功构建人FAT1启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒。通过荧光素酶活性比较,推测人FAT1的核心启动子区域位于-233～+134 bp区域,其中可能含有若干转录因子结合位点。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养和基因组DNA的提取
•     1.2.2 生物信息学分析
•     1.2.3 克隆人FAT1基因启动子区域
•     1.2.4 人FAT1启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建与鉴定
•     1.2.5 质粒转染和荧光素酶活性检测
•   1.3 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 生物信息学分析
•   2.2 人FAT1基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建和鉴定
•   2.3 人FAT1基因启动子5′侧翼区缺失突变体的构建
•   2.4 人FAT1启动子活性的检测
•   2.5 人FAT1启动子核心区域转录因子结合位点预测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 乔春敏,乔笑芹,周国平

关键词: 脂肪非典型钙黏蛋白,启动子,转录调控

来源: 南京医科大学学报(自然科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 南京医科大学第一附属医院儿科

基金: 江苏省“科教强卫”工程创新团队(领军人才)项目(CXTDA2017018)

分类号: Q78

页码: 862-866

总页数: 5

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