论文摘要
线粒体DNA编码多种t RNA,rRNA及蛋白质,在细胞能量代谢中发挥着重要作用。每个真核细胞中有上千个mtDNA,由于mt DNA的高突变率和有限的修复能力,细胞通常含有不同基因型的mt DNA,这种现象称为mt DNA异质性。mtDNA的突变会不断在体细胞中出现,并在整个生命过程中累积。被认为与农作物的许多生理过程有关。因此,原位成像单细胞中的单碱基突变(SNV),对于研究与mt DNA突变相关的疾病的复杂性和异质性具有重要意义。1CRISPR技术作为一种革命性的基因编辑技术,在细胞中的基因成像方面也展现了极大的应用潜力。然而目前的CRISPR成像受限于缺少高特异性的识别及高效的信号放大方法,仍主要应用于多重复序列的基因位点成像,例如端粒或MUC4基因等的分析。目前可以通过同时使用许多种sgRNA的方法实现非重复序列的成像,然而同时递送多种sgRNA的方法非常繁琐复杂,且容易造成非特异性信号,并且无法利用CRISPR系统的高碱基识别性能进一步尝试单碱基突变的成像。2为解决传统CRISPR基因成像难以分析大多数没有重复序列的基因这个问题,本课题设计利用双Cas9探针高特异性地识别目标双链DNA,并结合邻位连接和滚环扩增反应,在双Cas9探针结合的位置产生特异性产生高强度的原位荧光信号,实现对目标位点的成像。设计的Cas9探针可以高效打开DNA双链,能够实现快速无损基因分析。双探针临近效应极大提高CRISPR成像的特异性,并可以利用CRISPR的单碱基识别能力,实现单碱基突变的成像。3
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文章来源
类型: 国内会议
作者: 张开翔
关键词: 单碱基突变,原位成像
来源: 中国化学会第一届农业化学学术讨论会 2019-12-06
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 郑州大学药学院
分类号: Q78
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.078050
页码: 168
总页数: 1
文件大小: 960k