武夷菌素生物合成调控基因wysPⅢ的功能

论文摘要

为了深入研究武夷菌素生物合成调控机理,通过筛选对武夷菌素产量有影响的基因,明确基因的功能,利用分子育种技术来获得武夷菌素高产菌株。本研究通过基因敲除和过表达技术,获得了wysPⅢ基因的缺失突变株、互补菌株和过表达菌株,验证了该基因在武夷菌素生物合成过程中的功能和武夷菌素产量的关系。结果表明:wysPⅢ基因的过表达菌株生长速率加快,产孢时间提前,而缺失突变株较野生菌株生长变慢,产孢量下降,孢子颜色由正常的深灰色变为灰白色,菌丝变稀疏,但是构建好的菌株与野生型菌株相比,武夷菌素产量没有显著变化。由此可知:wysPⅢ基因调节菌株的生长和产孢特征,而不影响武夷菌素的产量,过表达菌株生长速率加快可缩短武夷菌素发酵时间,降低生产成本。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 培养基和缓冲液
•   1.3 引物
•   1.4 菌株CK-15基因组DNA制备
•   1.5 基因序列生物信息学分析
•   1.6 wysPIII基因的敲除
•     1.6.1 重组质粒PKC-AB的构建
•     1.6.2 重组质粒利用接合转移法转化入链霉菌
•     1.6.3 转化子验证
•     1.6.4 双交换突变株的筛选及验证
•   1.7△wysPIII缺失突变株的互补试验
•     1.7.1 重组质粒pSETC-PIII的构建
•     1.7.2 重组质粒利用接合转移法转化入△wysRIII缺失突变株中
•     1.7.3 互补菌株的筛选与验证
•   1.8 wysPIII基因的过表达
•     1.8.1 wysPIII基因的过表达载体的构建
•     1.8.2 过表达菌株的筛选与验证
•   1.9 wysPIII基因功能初步鉴定
•     1.9.1 突变株、互补菌株、过表达菌株、野生型菌株生长形态分析
•     1.9.2 突变株、互补菌株、过表达菌株和野生菌株菌丝体干重的测量
•     1.9.3 突变株、互补菌株以及过表达菌株的发酵及发酵液抑菌活性测定
•     1.9.4 发酵液的HPLC分析
• 2 结果与分析
•   2.1 wysPIII基因生物信息学分析
•   2.2 wysPIII缺失突变株的构建
•     2.2.1 重组质粒的构建
•     2.2.2 wysPIII基因突变株的筛选及验证
•   2.3△wysPIII缺失突变株的互补试验
•     2.3.1 重组载体pSETC-PIII构建
•     2.3.2 互补菌株的构建及验证
•   2.4 过表达菌株的构建及验证
•   2.5 wysPIII基因功能鉴定
•     2.5.1 突变株、互补菌株、过表达菌株及野生菌株生长形态分析
•     2.5.2 突变株、互补菌株、过表达菌株及野生菌株菌丝干重的测量
•     2.5.3 各菌株发酵液抑菌活性的测定
•     2.5.4 各菌株发酵液HPLC分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘炳花,葛蓓孛,赵文珺,韦秋合,Abid Ali Khan,张克诚

关键词: 武夷菌素,调控,基因功能

来源: 中国生物防治学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,一般化学工业

单位: 中国农业科学院植物保护研究所/农业部作物有害生物综合治理重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31772215),国家重点研发计划(2017YFD0201104,2016YED0201000),中国农业科学院基本科研业务费用专项(Y2017JC12,S2018XM12)

分类号: TQ920.1;Q933

DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2019.02.006

页码: 255-264

总页数: 10

文件大小: 626K

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