表面脱乙酰化甲壳素颗粒固定溶菌酶及酶学性质研究

论文摘要

本研究以表面脱乙酰化甲壳素颗粒为载体,以戊二醛为交联剂,对溶菌酶进行固定化。本文利用正交试验设计,以蛋白利用率、活力回收率和保藏稳定性为指标,以半脱乙酰壳聚糖为底物,3-甲基-2-苯丙噻唑啉酮腙（MBTH）法为酶活力测定方法,优化了关键固定化参数,并考察了固定化对溶菌酶酶学性质的影响。结果表明:固定化过程中最佳脱乙酰时间（A）为25 min,戊二醛浓度（B）为5%,载体活化pH（C）为5.0,在此条件下固定化的溶菌酶与游离溶菌酶相比,其表观最适pH由4.0降至3.5;最适温度由75℃升高至80℃,且在70～90℃仍保持95%活力; Km为2.69 mg/mL,明显大于游离酶的1.75 mg/mL; 15 d稳定性保持66%。因此,固定化提高了溶菌酶的热稳定性和贮藏稳定性,具有广泛的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 底物溶液的配制与固定化方法
•     1.2.1 底物溶液的配制
•     1.2.2 固定化方法
•       1.2.2. 1 甲壳素载体的活化
•       1.2.2. 2 酶偶联
•       1.2.2. 3 固定化条件的正交试验设计
•   1.3 蛋白浓度的测定与蛋白利用率的计算
•     1.3.1 蛋白浓度的测定
•     1.3.2 标准曲线的绘制
•     1.3.3 蛋白利用率的计算
•   1.4 酶活力的测定方法
•     1.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖浓度的测定及标准曲线的绘制
•     1.4.2 游离溶菌酶活力的测定
•     1.4.3 固定化溶菌酶活力的测定
•     1.4.4 活力回收率计算
•     1.4.5 保藏稳定性计算
•   1.5 综合评分的计算
•   1.6 固定化对溶菌酶性质的影响
•     1.6.1 固定化对溶菌酶最适pH的影响
•     1.6.2 固定化对溶菌酶最适温度的影响
•     1.6.3 固定化对溶菌酶Km值的影响
•     1.6.4 相对酶活力计算
•   1.7 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 标准曲线的绘制
•   2.2 载体活化条件优化
•   2.3 固定化对溶菌酶活力的影响
•     2.3.1 固定化对溶菌酶最适pH的影响
•     2.3.2 固定化对溶菌酶最适温度的影响
•     2.3.3 固定化对溶菌酶Km值的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张永勤,许文廷,邢明霞,张凤国,王裕晓,戴吉顺,毛小艺

关键词: 溶菌酶,甲壳素,半脱乙酰壳聚糖,固定化,甲基苯丙噻唑啉酮腙

来源: 食品工业科技 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 青岛科技大学化工学院

基金: 山东省自然科学基金(ZR2017MC018),青岛市民生科技计划项目(17-6-3-28-gx)

分类号: Q814

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.05.031

页码: 188-192+200

总页数: 6

文件大小: 882K

下载量: 239