导读:本文包含了茶花粉超氧化物歧化酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:茶花粉超氧化物歧化酶,纯化,表征,功能基团
茶花粉超氧化物歧化酶论文文献综述
何晓红[1]（2007）在《茶花粉超氧化物歧化酶的分离提纯、表征及功能基团研究》一文中研究指出从具有抗衰老特性的新鲜茶花粉中分离到超氧化物歧化酶(SOD)纯品，为SOD家族增添了新成员。本文对该SOD的分子量、所属类型、等电点、氨基酸组成、米氏常数、分子稳定性等方面进行了研究，发现该酶与其他SOD相比较具有一些共性，另又有自己的特性。首先，其分子量为69.5 kD的Cu／Zn-SOD尚未见报道；其次该蛋白富含Trp、Phe、Tyr，导致其吸收光谱红移至274nm；再则温度稳定性较一般SOD差，与其分子结构有关。它的这些研究结果对于揭示花粉抗衰老作用的机理在分子水平上提供了理论依据。本文还研究了该酶的N-末端，二级结构，并通过化学修饰法对其结构和功能进行了表征。结果发现该酶的α-螺旋较一般SOD高，His、Arg、Lys和羧基为茶花粉SOD的必需功能基团，Met、部分二硫键对保护酶的催化功能和维持酶的分子构象是必需的。这些研究结果为该蛋白的结构和功能提供新的信息。(本文来源于《吉林大学》期刊2007-06-01）
何晓红,王雪松,陈智博,于笑坤,张博珣[2]（2006）在《茶花粉超氧化物歧化酶的性质研究》一文中研究指出从茶花粉中提纯的超氧化物歧化酶(SOD)为Cu,Zn-SOD,分子量为69.5kD,亚基分子量为34.7kD,是由相同亚基组成的二聚体。等电聚焦电泳测得等电点为pH4.1,二甲氨基丹磺酰氯法确定其N-末端氨基酸为Gly,圆二色谱法测得α螺旋含量为21.8%。性质研究表明该蛋白在pH5～10范围内基本稳定,在5～35℃内保温30min酶活性基本保持不变;化学试剂KCN、H2O2、EDTA、巯基乙醇、SDS对酶活性完全抑止,4mol/L的尿素不影响酶活性。茶花粉SOD用EDTA去除金属离子后重新加入Cu2+、Zn2+恢复至天然活性,而加入Mn2+、Mg2+只能部分恢复活性。(本文来源于《食品科学》期刊2006年04期）
陈崇羔,黄序[3]（2006）在《不同破壁方法对蜂花粉超氧化物歧化酶活性的影响》一文中研究指出本试验采用超氧化物歧化酶(SOD)抑制氮蓝四唑(NBT)在荧光下的还原作用,测定了经过研磨、溶涨、发酵破壁处理后的蜂花粉中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。试验结果表明:发酵破壁与溶涨破壁处理后SOD活性明显高于研磨破壁,差异极显着;发酵破壁后的SOD活性显着高于溶涨破壁。(本文来源于《中国蜂业》期刊2006年02期）
何晓红[4]（2004）在《茶花粉超氧化物歧化酶的分离提纯及表征》一文中研究指出超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，EC 1.15.1.1，简称SOD）是一种金属酶，在生物体内分布极广，是目前为止已知的二千多种酶中研究报道最多的酶。由于金属辅基的不同，它可分为四类，分别为Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD和Ni-SOD。SOD是一种重要的氧自由基清除剂，能催化超氧阴离子（O2-. ）的歧化反应，而且它的存在可能与机体衰老、肿瘤发生、自身免疫性疾病和辐射防护等有关，故有广阔的开发及应用前景。本文综述了SOD的种类、分布、化学结构、理化性质、活性与含量的测定方法。本实验是称取500 g新鲜茶花粉，按1∶2(W/V)加入pH 7.8，25 mmol/L磷酸钾缓冲液(PBK)，加石英砂少许，冰浴中研磨成浆，于-70 ℃冰箱反复冻融叁次；4 ℃，10 000ｒ/min离心20 min，去沉淀和上层脂类物质，中层清液为SOD粗提液。0 ℃缓慢加入固体硫酸铵到粗提液中，至饱和度为35 %。4 ℃放置过夜，4 000ｒ/min离心20 min，收集上清液。在上清液中继续缓慢加入固体硫酸铵至饱和度为55 %，4 ℃放置过夜；离心弃上清，沉淀用PBK溶解透析72 h获得粗酶液。将粗酶液上到已用PBK平衡好的DEAE-52离子交换柱（3.0×35 cm），用分别含0.1 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L及0.5 mol/L NaCl的PBK进行分段洗脱，收集酶活力峰。透析除盐，冻干后用蒸馏水溶解，上Sephadex G-100分子筛层析柱（1.0×100 cm），用PBK洗脱，收集酶活力峰。将获得酶液冻干后用1.5 mol/L (NH4)2SO4溶解后上已用1.5 mol/L (NH4)2SO4平衡过的Phenyl SepharoseTM 6 Fast Flow疏水层析柱（1.5×15 cm），分别用0.75 mol/L (NH4)2SO4、0.1 mol/L (NH4)2SO4及蒸馏水进行分段洗脱，收集酶活力峰获得纯酶。共获得13943 U的纯酶，酶比活为4034.4 U/mg。将Phenyl SepharoseTM 6 Fast Flow纯化获得的SOD经透析、冻干后，进行等电聚焦电泳。纯化的SOD经等电聚焦电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）均显示一条蛋白带，表明纯化的SOD蛋白质是均一的。最后纯化倍数为81.8倍，活性回收率为27.6 ％。采用Folin酚法测定蛋白浓度，以牛血清白蛋白为标准蛋白。SOD活力<WP=63>测定采用邻苯叁酚自氧化法。酶活力单位定义为：25 ℃，在325 nm波长处，每分钟抑制邻苯叁酚自氧化速率达50 %所需酶量定义为一个酶活力单位。SDS-PAGE用考马斯亮蓝R 250进行染色，活性染色采用0.2 ％氮蓝四唑-0.01 ％核黄素光还原法。Cu/Zn-SOD对氰化物和过氧化氢均敏感，Mn-SOD对氰化物和过氧化氢均不敏感；而Fe-SOD对氰化物不敏感，对过氧化氢敏感。5 mmol/L的KCN抑制茶花花粉纯化的SOD活力达99 ％，5 mmol/L的H2O2完全抑制该酶的活力，根据不同类型SOD对不同抑制剂的敏感性不同判断其为Cu/Zn-SOD。利用凝胶的分子筛效应把物质按分子大小不同进行分离，采用Sephadex G-100凝胶过滤层析法测得其分子量为70.0 kD。采用的标准蛋白分别为核糖核酸酶A (13,700 Da)、胰凝乳蛋白酶原A (25,000 Da)、卵清蛋白(43,000 Da)、牛血清白蛋白(67,000 Da)、蓝葡聚糖 2000。经SDS-PAGE也测得其分子量为69.5 kD，亚基分子量为34.7 kD，是由相同亚基组成的二聚体。等电聚焦电泳：采用浓度为7 %的聚丙烯酰胺凝胶电泳，1 %的载体两性电解质（pH梯度为3.5-10）。该酶在等电聚焦电泳中呈现一条酶蛋白带，其等电点为4.1。SOD分子稳定性实验：研究了pH、温度、化学试剂和金属离子对SOD活性的影响。结果表明，该酶的热稳定性比一般酶强，最适温度为25 ℃，最适pH为5.5，在pH 11以上迅速失活。由5 ％的EDTA对酶完全抑制，可判断金属离子在酶的活性中心起到关键作用。1 ％SDS、0.5 ％β巯基乙醇可使酶的亚基的解聚，导致酶活丧失。4 mol/L 尿素对酶的影响不大，与文献报道一致。这些结果进一步确定该酶为Cu/Zn-SOD。称取SOD纯品10 mg，用5.7 mol/L HCl于110℃ 水解24 h，用835-50氨基酸自动分析仪进行测定。同其它来源的SOD进行比较发现该酶具有显着特点：富含Trp、Phe、Tyr。二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）法测得其N-末端氨基酸为Gly。SOD的圆二色谱分析：用JASCO J 810圆二色谱仪进行测定，蛋白浓度为43.2 μg/ml。SOD的α螺旋度用圆二色谱222 nm处的椭圆率值以单值法进行计算，测得该蛋白的α螺旋含量为21.8 ％。<WP=64>用760 CRT型双光束紫外可见分光光度计进行全波长扫描，发现该酶的特征吸收峰在274 nm处。大多数SOD因不含有Trp，其特征吸收峰一般在258 nm左右，而花粉SOD紫外特征吸收峰红移至274 nm，推测可能与花粉SOD的Trp含量相关。而由于酸水解后蛋白质的Trp完全被破坏，因此Trp的含量进行单独测定。发现花粉SOD含有大量的Trp，而其它生物的SOD几乎不含Trp。由于花粉SOD与其它生物的SOD在Trp数量上的巨大差异，使得花粉SOD的荧光光谱成为其特征光谱。荧光光谱用770 CRT荧光分光光度计测定，激发波长为295 nm，激发波长狭峰宽度为2 nm，发射波长狭峰宽度为5 nm，测定波长范围为320-375 nm。用N-溴代琥珀亚胺（NBS）对SOD分子中的色氨酸残基进行了化学修饰，发现每个SOD分子有21个Trp残基，其中7个位于分子表面。Trp的发射荧光光谱的最大荧光强度在335 nm，NBS修饰花粉SOD后其修饰酶的荧光强度?(本文来源于《吉林大学》期刊2004-06-01）
茶花粉超氧化物歧化酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
从茶花粉中提纯的超氧化物歧化酶(SOD)为Cu,Zn-SOD,分子量为69.5kD,亚基分子量为34.7kD,是由相同亚基组成的二聚体。等电聚焦电泳测得等电点为pH4.1,二甲氨基丹磺酰氯法确定其N-末端氨基酸为Gly,圆二色谱法测得α螺旋含量为21.8%。性质研究表明该蛋白在pH5～10范围内基本稳定,在5～35℃内保温30min酶活性基本保持不变;化学试剂KCN、H2O2、EDTA、巯基乙醇、SDS对酶活性完全抑止,4mol/L的尿素不影响酶活性。茶花粉SOD用EDTA去除金属离子后重新加入Cu2+、Zn2+恢复至天然活性,而加入Mn2+、Mg2+只能部分恢复活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
茶花粉超氧化物歧化酶论文参考文献
[1].何晓红.茶花粉超氧化物歧化酶的分离提纯、表征及功能基团研究[D].吉林大学.2007
[2].何晓红,王雪松,陈智博,于笑坤,张博珣.茶花粉超氧化物歧化酶的性质研究[J].食品科学.2006
[3].陈崇羔,黄序.不同破壁方法对蜂花粉超氧化物歧化酶活性的影响[J].中国蜂业.2006
[4].何晓红.茶花粉超氧化物歧化酶的分离提纯及表征[D].吉林大学.2004
标签：茶花粉超氧化物歧化酶; 纯化; 表征; 功能基团;