基于A型塞尼卡病毒结构蛋白VP1间接ELISA检测方法的建立及初步应用

论文摘要

为建立A型塞尼卡病毒（SVA）血清学检测方法,本研究根据GenBank中SVA基因序列设计引物,PCR扩增其VP1基因,将目的片段克隆于p ET-32a（+）表达载体中,在大肠杆菌BL21（DE3+）中诱导表达。利用纯化的重组VP1 （rVP1）蛋白作为包被抗原,通过矩阵法优化ELISA反应条件,初步建立了SVA的间接ELISA抗体检测方法。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测;利用该方法对43份背景清晰的猪血清进行检测,并与中和试验结果进行比较;同时对205份临床猪血清样品进行检测。结果显示,本研究正确表达了约51.0 ku的可溶性重组蛋白,western blot试验表明纯化的r VP1蛋白具有良好的反应原性,以r VP1蛋白建立了间接ELISA方法。特异性试验结果显示该ELISA方法可以检测SVA抗体,而与FMDV （O/A/Asia I）、 PEDV、 PCV2、PRRSV、PRV等病原的抗血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示样品经1∶800倍稀释后折OD450nm值仍大于临界值;批内、批间的重复性试验变异系数均小于10%,具有较好的重复性和稳定性。43份猪血清样品的检测结果与中和试验符合率为93.02%。205份临床猪血清样品的阳性检出率为5.37%。本研究为SVA血清学检测提供了技术手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 引物设计与合成
•   1.3 VP 1基因的扩增及重组表达载体的构建
•   1.4 r VP 1蛋白的表达、纯化及活性鉴定
•   1.5 ELIS A最佳工作条件的优化
•   1.6 临界值的确定
•   1.7 特异性试验
•   1.8 敏感性试验
•   1.9 重复性试验
•   1.1 0 符合率试验
•   1.1 1 临床样品检测
•   1.1 2 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 VP 1基因的扩增及重组表达载体的构建
•   2.2 r VP 1蛋白的表达、纯化及活性鉴定
•   2.3 ELIS A最佳工作条件的优化
•   2.4 临界值的确定
•   2.5 特异性试验结果
•   2.6 敏感性试验结果
•   2.7 重复性试验结果
•   2.8 符合率试验结果
•   2.9 临床样品检测情况
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵月龙,闫若潜,王淑娟,马震原,班付国,赵雪丽,谢彩华,杨朋霞

关键词: 型塞尼卡病毒,基因,表达,间接

来源: 中国预防兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南科技大学动物科技学院,河南省动物疫病预防控制中心,河南农业大学牧医工程学院

基金: 河南省科技创新人才计划项目(174200510003)

分类号: S852.651

页码: 818-823

总页数: 6

文件大小: 438K

下载量: 109