（广西壮族自治区右江民族医学院附属医院；广西百色533000）
【摘要】目的探讨二氯乙酸钠（DCA-Na）诱导人胃癌SGC-7901和MGC803细胞株凋亡的影响。方法MGC-803细胞与SGC-7901接种于含有浓度为10%胎牛血清的RPMI1640培养液当中，待持续培养24h之后，加入二氯乙酸钠（10、40与80?mol/L），继续培养，时间为12、24h与48h。待药用24h后，运用流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果二氯乙酸钠对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡具有依赖性诱导作用。结论二氯乙酸钠对胃癌SGC-7901与MGC803细胞增殖具有抑制作用，并能诱导其凋亡。
【关键词】二氯乙酸钠；胃癌；SGC-7901；MGC803；凋亡
胃癌为临床中一种较常见型消化系统肿瘤，在各类恶性肿瘤死因中，其位居第二位。当前，胃癌治疗方法有生物免疫、放化疗及手术切除治疗等。近年，二氯乙酸钠（DCA-Na）在胃癌治疗中较多应用。有实验证实[1]，用作治疗线粒体遗传性疾病与乳酸酸中毒的小分子药物二氯乙酸盐（DCA），能杀死乳腺、肺、胃、脑等肿瘤细胞，此外，DCA对肿瘤细胞内线粒体相应功能具有激活作用，因而对细胞内源性凋亡通路，同样具有激活效能，最终可实现杀死癌细胞的效果。本次实验用DCA-Na，观察其对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡的影响，为DCA-Na临床应用丰富实验依据。
1.资料与方法
1.1材料
选用河北奥发医药科技有限公司生产的DCA-Na，小鼠抗人β-actin多克隆抗体/苯甲磺酰氟（PMSF）、抑肽酶、碘化丙啶（PI）与DMSO均购自Sigma公司；选用购买于GibcolBRL公司生产的胎牛血清与RPMI1640培养液；胰蛋白酶与MTT（Amresco公司）；人胃癌细胞株MGC803与SGC-7901（中科院上海细胞所）。选用购自北京宝塞生物公司的膜联蛋白V（AnnexinV）-异硫氰酸荧光素（FITC）试剂盒。
1.2方法
（1）细胞培养。MGC803与SGC-7901细胞均进行常规传代，分别培养于含有100mg/L链霉素、100kU/L青霉素与浓度为10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，然后放置于浓度为5%CO2、饱和湿度及温度为37℃的培养箱中进行培养。（2）检测细胞凋亡率。运用流式细胞仪，MGC803与SGC-7901单细胞悬液，接种于6个孔板，均依据1.5×104个/孔行此操作。待药物持续作用达24h后，对各孔细胞进行收集，以1000r/min转速实施离心操作，时间为5min，然后用磷酸盐缓冲液（PBS）连续洗涤（3次），取结合缓冲液200?l，将之重混悬其中，外加PI5?l与之混匀，于室温状态下实施避光反应，持续10min，最后运用流式细胞术，对细胞凋亡率进行检测。
1.3统计学方法
SPSS22.0处理数据，t检验计量资料，X2检验计数资料，P＜0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
运用AnnexinV-FITC/PI双染色，能够对正常细胞（PI双标阴性染色与AnnexinV）、坏死细胞（PI双标阳性染色与AnnexinV）、早期凋亡细胞（AnnexinV单标阳性染色）。对于左下象限细胞簇而言，其所表示的是正常细胞，而对于左上象限细胞簇来讲，即为坏死细胞，另外，右上象限细胞簇所表示的是晚期凋亡细胞，而右下象限细胞簇即为凋亡细胞。DCA-Na诱导人胃癌MGC803与SGC-7901细胞株凋亡。如图1。
较DCA-Na0?mol/L，aP＜0.05，bP＜0.05。
图1DCA-Na对SGC-7901与MGC803细胞株凋亡的影响
3.讨论
在胃癌的发生、发展进程中，环氧化酶2挥着举足轻重的作用，而选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞增殖、转移具有抑制作用。有报道指出[2]，选择性COX-2抑制剂能使心血管不良事件发生几率增加，还会增加胃肠道出血风险，因而限制了其临床应用。由本次研究可知，二氯乙酸钠（DCA-Na）对于高表达COX-2的SGC-7901细胞以及并不表达的MGC803细胞，均呈现出剂量与时间依赖性增殖抑制作用，DCA-Na对SGC-7901细胞的IC50值的干预，相比MGC803细胞，高于后者，表明DCA-Na在抗肿瘤效应方面，能通过多种途径发挥作用[3]。由本次研究得知，DCA-Na剂量对PCNA表达具有依赖性抑制作用，PCNA实为一种酸性核蛋白，分子量为36kD，在对DNA合成调节及控制细胞周期等方面，均发挥着重要作用。相关研究指出，香烟诱导白鼬胃黏膜癌变的机制，及其在抑制Caspase-3活性及促进PCNA合成中所起到的作用，相关于对细胞凋亡的抑制。因此，二氯乙酸钠对人胃癌SGC-7901与MGC803细胞株凋亡具有依赖性诱导作用。
参考文献：
[1]刘小军,刘敏,段玲,等.二氯乙酸钠联合顺铂对胃癌细胞的抑制作用[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2016,23(1):30-35.
[2]王志新,邹玺,胡守友.润生方对人胃癌细胞SGC-7901生物学活性的影响及诱导凋亡研究[J].吉林中医药,2016,36(5):499-503.
[3]李笃军,阚氏海,唐菁.阿司匹林和吲哚美辛抑制胃癌细胞株MGC803细胞增殖实验研究[J].中华肿瘤防治杂志,2016,23(20):1351-1354.
项目级别：广西教育厅高校科研（科研成果课题）
项目名称：二氯乙酸钠诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株凋亡的实验研究
项目编号：（YB2014293）