表达EGFP标签的重组血清4型禽腺病毒的构建及评价

论文摘要

我国当前流行的禽腺病毒血清4型（FAdV-4）毒株与国外毒株相比存在自然缺失。为了解我国流行的FAdV-4毒株的复制能力和特点以及病毒毒力的增强机制,本研究以我国当前流行的基因组3′端自然缺失株HN/151025为亲本病毒,采用同源重组技术,在HN/151025毒株基因组35430～35431自然缺失位点插入EGFP表达盒,构建带有EGFP标签的重组病毒rHN-△35430-EGFP。获得的重组病毒在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,重组病毒在LMH细胞连续传代5代,EGFP基因随病毒的传代而稳定遗传,且EGFP蛋白稳定表达。病毒生长曲线测定结果显示,带有EGFP标签的重组病毒与亲本病毒的生长动力学趋势基本一致,均在接种后第96小时病毒滴度达到高峰,但是重组病毒滴度与亲本病毒差异显著（P<0.05）。对重组病毒感染细胞能力进行评价,结果表明,表达荧光信号的细胞比例从感染后第24小时逐渐增多,至感染后第96小时达到高峰,该结果与病毒生长曲线结果一致。本研究结果表明,FAdV-4病毒基因组3′端可作为标签基因插入位点,为进一步研究病毒复制和感染机制奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、细胞和载体
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要仪器
•   1.4 引物的设计与合成
•   1.5 转移载体的构建
•   1.6 重组病毒的构建和筛选
•   1.7 重组病毒的鉴定
•   1.8 重组病毒EGFP遗传及表达稳定性检测
•   1.9 重组病毒的生长动力学曲线
•   1.1 0 重组病毒感染细胞能力的检测
• 2 结果
•   2.1 转移载体的构建及鉴定
•   2.2 重组病毒的筛选及鉴定
•   2.3 重组病毒EGFP遗传及表达稳定性检测
•   2.4 重组病毒的生长动力学曲线
•   2.5 重组病毒感染荧光信号的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 柴冬华,邵昱昊,李慧昕,刘胜旺

关键词: 禽腺病毒,血清型,重组病毒,绿色荧光蛋白标签

来源: 中国兽医科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31702268),中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302017003)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0104

页码: 998-1005

总页数: 8

文件大小: 2203K

下载量: 129