导读:本文包含了入核转运论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞核,蛋白,质粒,复合体,肥厚,狂犬病,心肌。
入核转运论文文献综述
王一平[1]（2016）在《伪狂犬病病毒DNA聚合酶入核转运的分子机制》一文中研究指出伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)又被称为猪疱疹病毒1型或奥耶斯基病病毒,属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科水痘病毒属。PRV可引起家畜和多种野生动物发生伪狂犬病,其中猪是该病的主要宿主和传染源。PRV在多个国家均有流行,对养猪业危害极大,造成严重的经济损失。PRV DNA复制是一个复杂的过程,需要病毒编码的多种酶蛋白协同参与,其中病毒DNA聚合酶发挥关键作用。PRV DNA聚合酶包含2个亚基:催化亚基UL30和辅助亚基UL42。UL30具有天然的酶活性,能催化病毒DNA的合成,而UL42能将聚合酶全酶固定在DNA模版上,增强全酶的持续合成能力。PRV DNA聚合酶在细胞质合成后必须转运到细胞核中才能发挥功能,这是启动病毒DNA复制的先决条件。然而,PRV DNA聚合酶入核转运的分子机制尚未阐明。作为PRV DNA聚合酶的辅助亚基,UL42是否是病毒复制所必需的也还不清楚。本研究旨在阐明PRV DNA聚合酶UL42与UL30亚基入核转运的分子机制,并明确辅助亚基UL42在PRV DNA复制过程中的作用。为阐明PRV DNA聚合酶UL42与UL30亚基的入核通路,本研究经免疫荧光试验证实,UL42能独立定位于细胞核中,UL30主要定位于细胞质中,然而当UL42与UL30共表达时,UL30的细胞质定位完全转移为细胞核定位,表明UL30的入核转运依赖于UL42。对UL42和UL30进行缺失和定向突变分析发现,UL42在354~370位氨基酸包含一个功能性和可转移性的双分型核定位信号(Nuclear localization signal,NLS),并证实K354、R355和K367是UL42双分型NLS保持完整结构和功能所必需的,然而UL30并无功能性NLS。免疫共沉淀试验结果表明,UL42与Importinα3(Impα3)和Impα4存在相互作用,且这一相互作用是由UL42双分型NLS介导的。经体外入核转运试验证实,UL42的核定位是一个温度、能量和受体依赖的过程,需要Impα和Impβ同时参与,表明UL42是经Impα/β通路入核的。当缺失NLS的UL42突变体(UL42ΔNLS)与UL30共表达时,UL42ΔNLS/UL30异源二聚体被完全限制在细胞质中,表明UL30利用UL42 NLS的功能入核。上述结果表明,PRV DNA聚合酶全酶复合体在细胞质中装配完成后,借助于UL42双分型NLS的功能,经Impα/β通路入核。研究表明,PRV UL42能在体外刺激UL30的催化活性,且它是UL30的细胞核协同转运蛋白,能在体外引导UL30入核,因此推测UL42是PRV复制的必需基因。本研究对PRV感染后UL42的表达动力学进行了分析,结果发现UL42是PRV的一个早期基因,在病毒感染后5 h就能检测到。根据UL42序列特征设计了3条特异性si RNAs,经Western blot试验证实它们都能在体外有效地抑制UL42的表达。在哺乳动物细胞中转染si RNAs后感染PRV,结果发现这3条si RNAs能剂量依赖性地抑制病毒感染后UL42的表达,且在下调UL42的表达后,PRV的复制显着降低,表明靶向UL42的RNAi能有效地降低UL42的表达,从而抑制PRV的复制。上述结果表明,UL42是PRV复制的必需基因。综上所述,本研究阐明了PRV DNA聚合酶入核转运的分子机制,证实了UL42是PRV复制的必需基因,对深入理解PRV的复制机制具有重要科学意义。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2016-06-01）
王殿丽[2]（2008）在《JC病毒VP2蛋白的抗原抗体制备及核定位信号与入核转运受体的鉴定》一文中研究指出目的:JC病毒属于人类多瘤病毒属,是一种重要的机会感染性疾病病原体。JC病毒广泛分布于人群中,有80﹪的成人血清学检测为阳性[1]。当免疫力低下时,JC病毒会引发多灶性脑白质病(PML)[2]。然而,JC病毒的临床检测,以及它的包膜蛋白VP2入核的机制和入核转运受体并不清楚。本研究拟通过原核表达、抗体制备、核定位信号鉴定和入核转运受体的鉴定几个方面初步阐释JC病毒的小包膜蛋白VP2基因在PML发生发展过程中的生物学功能。方法:(1)构建原核表达载体pET-32a(+)-VP2,转化BL21宿主菌后经IPTG诱导,获得了带有组氨酸标签的重组融合蛋白的优化表达。(2)利用Ni+亲和柱纯化表达蛋白并免疫BALB /c小白鼠,获得抗VP2多克隆抗体。以纯化VP2为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。(3)构建重组绿色荧光表达载体pEGFP-C1-VP2,转染7402细胞,24hr后观察各截短体的亚细胞定位情况。(4)表达纯化pGEX-2T-importin(importinα1、3、5、7和imporinβ)的GST融合蛋白。(5)通过GST-pull down方法,寻找并确定VP2的入核转运受体。结果:(1)通过PCR方法从病人的脑脊液中获得VP2的目的片段,并成功构建了pET-32a(+)-VP2原核表达载体。pET-32a(+)-VP2原核表达载体在IPTG的诱导作用下,成功表达融合蛋白通过Ni+亲和层析法获得了融合蛋白纯品。(2)用纯化的VP2融合蛋白免疫BALB/c小鼠,成功制备了高效价,高特异性的鼠抗VP2多克隆抗体。通过ELISA法表明多克隆抗体效价>1:160,000, Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。(3)通过PCR方法获得了VP2截短体的目的片段,成功构建了VP2各截短体的绿色荧光表达载体;将构建好的VP2各截短体绿色荧光表达载体转染7402人肝癌细胞,通过各截短体的亚细胞定位分析出了VP2蛋白的核定位信号为946-972段。(4)成功表达纯化了五个pGEX-2Timportin融合蛋白。(5)通过GST-pull down实验,分析发现VP2能够与入核转运受体蛋白importinα1、importinα3结合,从而被转运入细胞核,发挥它的生理和生化作用。结论:1.我们成功构建了pET-32a(+)- Vp2原核表达载体,在IPTG的诱导下,成功表达纯化了VP2融合蛋白。这就为抗体的制备以及研究VP2蛋白与其它蛋白的相互作用做了物质上的准备。2.将VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了高效价、高特异性的鼠抗VP2多克隆抗体。这对于VP2抗原的检测,以及免疫组化奠定了基础。3.成功的鉴定出VP2的核定位信号,通过构建四个pEGFP-C1-Vp2绿色荧光载体,脂质体转染7402细胞株,在荧光显微镜下观察pEGFP-C1-Vp2各截短体的亚细胞定位。这是第一次鉴定出VP2的核定位信号,为进一步的研究提供了信息。4.通过GST-pull down方法,我们成功的鉴定出VP2的入核转运受体为importinα1、importinα3。初步阐明了VP2入核过程中参与的入核转运受体。(本文来源于《大连医科大学》期刊2008-05-01）
周鸣,李小玲,李桂源[3]（2006）在《蛋白质入核转运的机制和研究进展》一文中研究指出细胞核膜是由外膜和内膜组成的磷脂双分子层结构,同时镶嵌一些核孔复合体(NPC).核孔复合体是胞浆和胞核之间主动和被动转运的生理屏障.核内功能蛋白在胞浆内合成后通过核孔复合体进入胞核,这个过程除了需要NPC上核孔蛋白、胞浆内核转运受体和RanGTP等蛋白的参与外,货物蛋白本身的结构特征在其入核转运过程中亦发挥重要作用.本文着重就蛋白入核转运的机制及近年来取得的相关进展进行综述.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2006年10期）
刘健,刘晓莉,王培勇,何作云,肖颖彬[4]（2004）在《外源性钙调素入核转运及其在大鼠心肌肥厚时的变化》一文中研究指出目的 探讨大鼠心肌细胞核对外源性钙调素入核转运的调节机制及其在大鼠心肌肥厚时的变化。方法 制备腹主动脉缩窄心肌肥厚大鼠模型、差速离心提纯心肌细胞核、酶学方法测定钙 ATP酶活性、荧光分光光度计测定荧光标记钙调素向细胞核转入量。结果 离体纯化的大鼠心肌细胞核在ATP存在下 ,外源性钙调素经核孔向核内转运量具有显着钙离子浓度依赖性 ,随核外钙离子浓度的增加而递增 (P <0 0 5 )。在钙离子浓度为 10 -3 mol/L时 ,钙 ATP酶抑制剂thapsigargin (5μmol/L)、兰尼碱受体拮抗剂钌红 (rutheniumred ,5 0 μmol/L)和IP3 受体拮抗剂肝素 (10 μg/ml)使外源性钙调素的细胞核孔转运分别降低 90 %、2 0 %和 89% (P <0 0 5 )。腹主动脉缩窄术后 4周大鼠心肌显着肥厚 ,伴有明显的血流动力学异常 ,与对照组相比 ,腹主动脉缩窄心肌肥厚大鼠外源钙调素入核转运明显减少 (P <0 0 5 ) ,心肌细胞核钙 ATP酶活性显着下降 (P <0 0 0 1)。结论 外源性钙调素入核转运可能受核外钙离子浓度和核钙摄取、释放系统所调节 ,心肌肥厚时 ,钙调素入核转运减少、心肌细胞核钙 ATP酶活性下降 ,可能在相对稳定核功能紊乱的调节中起负性反馈作用。(本文来源于《中华心血管病杂志》期刊2004年10期）
刘琦,罗阳,姜莉,周伟强,满晓辉[5]（2004）在《CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)》一文中研究指出应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。(本文来源于《遗传学报》期刊2004年05期）
王培勇,刘健,唐朝枢[6]（2002）在《大鼠心肌细胞核钙调素入核转运与核钙调节关系的探讨》一文中研究指出最近发现,钙调素作为细胞内钙受体,除了调节胞浆的多种功能之外,可能还参与胞浆信号向核内快速传递。本研究观察大鼠心肌细胞核对钙调素的入核转运与钙浓度的关系,并初步探讨其调节机制。大鼠心肌细胞核采用差速离心和密度梯度离心分离提纯。用荧光分光光度计测定荧光标记钙调素向细胞核转入量发现,大鼠心肌细胞核对核外的CaM向核孔转运量具有[Ca~(2+)]浓度依赖性,随核外[Ca~(2+)]浓度的增加而增加(P<0.001),在[Ca~(2+)]浓度为10~(-3)mol/L时,ryanodine受体的拮抗剂rutheniumred和cADP ribose受体拮抗剂8-Br cADP ribose显着抑制CaM的细胞核孔转运(分别降低20％和18％,P<0.05),而IP_3受体拮抗剂heparin和Ca~(2+)-ATPase抑制剂thapsigargin抑制CaM的细胞核孔转运更显着(分别降低90％和89％,P<0.001)。上述结果表明心肌细胞核对CaM的向核转运,受核外[Ca~(2+)]和核钙摄取、释放所调节。(本文来源于《细胞生物学杂志》期刊2002年02期）
入核转运论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:JC病毒属于人类多瘤病毒属,是一种重要的机会感染性疾病病原体。JC病毒广泛分布于人群中,有80﹪的成人血清学检测为阳性[1]。当免疫力低下时,JC病毒会引发多灶性脑白质病(PML)[2]。然而,JC病毒的临床检测,以及它的包膜蛋白VP2入核的机制和入核转运受体并不清楚。本研究拟通过原核表达、抗体制备、核定位信号鉴定和入核转运受体的鉴定几个方面初步阐释JC病毒的小包膜蛋白VP2基因在PML发生发展过程中的生物学功能。方法:(1)构建原核表达载体pET-32a(+)-VP2,转化BL21宿主菌后经IPTG诱导,获得了带有组氨酸标签的重组融合蛋白的优化表达。(2)利用Ni+亲和柱纯化表达蛋白并免疫BALB /c小白鼠,获得抗VP2多克隆抗体。以纯化VP2为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。(3)构建重组绿色荧光表达载体pEGFP-C1-VP2,转染7402细胞,24hr后观察各截短体的亚细胞定位情况。(4)表达纯化pGEX-2T-importin(importinα1、3、5、7和imporinβ)的GST融合蛋白。(5)通过GST-pull down方法,寻找并确定VP2的入核转运受体。结果:(1)通过PCR方法从病人的脑脊液中获得VP2的目的片段,并成功构建了pET-32a(+)-VP2原核表达载体。pET-32a(+)-VP2原核表达载体在IPTG的诱导作用下,成功表达融合蛋白通过Ni+亲和层析法获得了融合蛋白纯品。(2)用纯化的VP2融合蛋白免疫BALB/c小鼠,成功制备了高效价,高特异性的鼠抗VP2多克隆抗体。通过ELISA法表明多克隆抗体效价>1:160,000, Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。(3)通过PCR方法获得了VP2截短体的目的片段,成功构建了VP2各截短体的绿色荧光表达载体;将构建好的VP2各截短体绿色荧光表达载体转染7402人肝癌细胞,通过各截短体的亚细胞定位分析出了VP2蛋白的核定位信号为946-972段。(4)成功表达纯化了五个pGEX-2Timportin融合蛋白。(5)通过GST-pull down实验,分析发现VP2能够与入核转运受体蛋白importinα1、importinα3结合,从而被转运入细胞核,发挥它的生理和生化作用。结论:1.我们成功构建了pET-32a(+)- Vp2原核表达载体,在IPTG的诱导下,成功表达纯化了VP2融合蛋白。这就为抗体的制备以及研究VP2蛋白与其它蛋白的相互作用做了物质上的准备。2.将VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了高效价、高特异性的鼠抗VP2多克隆抗体。这对于VP2抗原的检测,以及免疫组化奠定了基础。3.成功的鉴定出VP2的核定位信号,通过构建四个pEGFP-C1-Vp2绿色荧光载体,脂质体转染7402细胞株,在荧光显微镜下观察pEGFP-C1-Vp2各截短体的亚细胞定位。这是第一次鉴定出VP2的核定位信号,为进一步的研究提供了信息。4.通过GST-pull down方法,我们成功的鉴定出VP2的入核转运受体为importinα1、importinα3。初步阐明了VP2入核过程中参与的入核转运受体。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
入核转运论文参考文献
[1].王一平.伪狂犬病病毒DNA聚合酶入核转运的分子机制[D].中国农业科学院.2016
[2].王殿丽.JC病毒VP2蛋白的抗原抗体制备及核定位信号与入核转运受体的鉴定[D].大连医科大学.2008
[3].周鸣,李小玲,李桂源.蛋白质入核转运的机制和研究进展[J].中国生物化学与分子生物学报.2006
[4].刘健,刘晓莉,王培勇,何作云,肖颖彬.外源性钙调素入核转运及其在大鼠心肌肥厚时的变化[J].中华心血管病杂志.2004
[5].刘琦,罗阳,姜莉,周伟强,满晓辉.CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)[J].遗传学报.2004
[6].王培勇,刘健,唐朝枢.大鼠心肌细胞核钙调素入核转运与核钙调节关系的探讨[J].细胞生物学杂志.2002
论文知识图
