Amphibacillus xylanus谷氨酸脱氢酶基因工程菌培养条件优化

论文摘要

首先构建了5株表达NADH依赖型谷氨酸脱氢酶的大肠杆菌基因工程菌,获得来源于Amphibacillus xylanus的谷氨酸脱氢酶AxyGDH。其最适温度为60℃、最适p H为8.0,该条件下比酶活达到（903.1±24.6）U/mg,酶活半衰期为167h。其次,确定了表达AxyGDH的大肠杆菌基因工程菌E.coli BL21（DE3）/pET-28a（+）-AxyGDH的产酶条件:诱导剂IPTG浓度为0.7mmol/L、诱导温度为25℃;优化后的培养基组成为:甘油11.3g/L,酵母粉16.3g/L,Mg SO4·7H2O 0.62g/L,NaCl 0.5g/L,Na2HPO4·12H2O 17.1g/L,KH2PO43g/L,NH4Cl 1.5g/L。最后,在10L发酵罐中控制比生长速率为0.2h-1进行补料分批发酵,所得AxyGDH的发酵酶活为（9 066±45）U/ml,是LB摇瓶发酵酶活的51.1倍,为谷氨酸脱氢酶的低成本生产奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2主要试剂
•     1.1.3 主要仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 谷氨酸脱氢酶表达菌种构建
•     1.2.2 菌种保藏与活化
•     1.2.3 摇瓶发酵产酶
•     1.2.4 酶的纯化
•     1.2.5 菌体密度测定（OD600）
•     1.2.6 谷氨酸脱氢酶酶活测定
•     1.2.7 响应面实验设计
•     1.2.8 10L发酵罐发酵产酶
•     1.2.9 比生长速率测定
• 2 结果与分析
•   2.1 筛选谷氨酸脱氢酶
•   2.2 AxyGDH酶学性质测定
•   2.3 E.coli BL21（DE3）/p ET-28a（+）-AxyGDH的诱导条件
•   2.4 E.coli BL21（DE3）/p ET-28a（+）-AxyGDH的发酵碳氮源选择
•   2.5 E.coli BL21（DE3）/p ET-28a（+）-AxyGDH的发酵培养基优化
•   2.6 E.coli B L21（DE3）/p ET-28a（+）-AxyGDH的10L发酵罐发酵
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈子晗,周海胜,尹新坚,吴坚平,杨立荣

关键词: 谷氨酸脱氢酶,异源表达,比酶活,稳定性,发酵

来源: 中国生物工程杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所

基金: 国家自然科学基金面上项目(21476199),国家973计划(2011CB710800)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191007

页码: 58-66

总页数: 9

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