一、血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响（论文文献综述）
董菲[1]（2021）在《芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨》文中进行了进一步梳理背景:长期和持续的高血压导致心脏压力负荷增加,引起心肌细胞结构和功能障碍,使心肌顺应性下降,出现心肌纤维化,心脏舒张功能异常。心肌纤维化是高血压性心脏病的临床演变中重要病理特征。如何在副作用最小化下防治高血压心肌纤维化是目前乃至今后心血管研究的重大课题,而中医药研究有可能是解决问题的一种思路。芪参六味方是根据气血理论及高血压的病机所创立的复方,具有补益肝肾,益气活血化瘀的功效,课题组前期研究表明其可改善高血压患者左心室舒张功能,降低左室舒张末期内径,能够有效抑制心室重塑。而心肌纤维化是心脏舒张功能障碍的重要过程之一。因此,本研究使用芪参六味方干预自发性高血压导致的心肌纤维化大鼠,探讨其可能机制。目的:观察芪参六味方对自发性高血压大鼠所诱导的心肌纤维化的干预作用,并探讨其可能机制。方法:将30只20周龄的雄性SHR大鼠及WKY大鼠分为模型组、芪参六味方低浓度组、高浓度组、西药组,同龄雄性WKY大鼠为对照组;各组大鼠适应性喂养1周后,各给药组灌胃给药12周,SHR和对照组分别给与等体积无菌蒸馏水。干预12周,测量大鼠血压、超声心动。后处死全部动物,取出其心脏并称重,计算大鼠心质量指数。采用HE染色观察大鼠左心室形态;采用Masson染色观察心肌胶原纤维的含量;采用天狼猩红染色观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的比例;Western blot法检测各组大鼠左心室组织中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、Smad2、Smad3 以及 CD31、VE-Cadherin 蛋白的表达、间质细胞标志 α-SMA、FSP1 和 β-catenin、Snail、Notch ICD蛋白的表达;Real-Time RT-PCR法检测各组大鼠左心室组织中Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、Smad2、Smad3、β-catenin、Snail、Notch mRNA 的表达和内皮细胞标志物CD31、VE-Cadherin mRNA表达、间质细胞标志α-SMA、FSP1 mRNA的表达。结果:1.血压:给药12周后,与对照组相比,32周龄模型组大鼠收缩压显着上升（P<0.05）,与模型组相比,高浓度组、西药组大鼠的收缩压明显下降（P<0.05）,低浓度组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,模型组大鼠的舒张压升高,中药低浓度组、中药高浓度组、西药组舒张压均显着低于模型组（P<0.05）。2.超声心动:与对照组相比,32周龄SHR大鼠的射血分数和短轴收缩率均无明显的统计学差异（P<0.05）;与SHR大鼠相比,中药低浓度组、中药高浓度组、西药组射血分数及短轴收缩率无明显统计学差异（P>0.05）。与对照组相比,模型组大鼠E/E’明显升高（P<0.05）;与SHR大鼠相比,中药高浓度组与西药组E/E’明显下降（P<0.05）。3.心脏质量指数:与对照组大鼠相比,模型组心质量指数明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05;与模型组大鼠相比,高浓度组、西药组的比值明显降低（P<0.05）。4.HE染色可见:对照组大鼠内膜光滑,心肌细胞排列整齐,结构正常。模型组心肌细胞增生肥大,排列紊乱,边界模糊。与模型组相比,西药组大鼠给药后心肌细胞肥大增生较轻,血管内平滑肌细胞排列较整齐,血管细胞结构较清晰。心肌细胞直径结果显示:各组间均无明显统计学差异（P>0.05）。5.Masson染色结果显示,与对照组相比,模型组蓝色区域明显扩大,且心肌肌束间隙变大,在心肌细胞间质中可见明显的纤维化改变,且伴有严重的胶原沉积。与模型组相比,各干预组心肌纤维化程度明显减轻,胶原含量减少。胶原纤维比例结果显示:与对照组相比,模型组胶原纤维面积百分比明显增加（P<0.01）;与模型组相比,高浓度组、西药组胶原纤维面积显着减小（p<0.01）,低浓度组统计学无显着差异（P>0.05）。6.苦味酸天狼猩红染色结果显示:对照组大鼠心肌胶原纤维分布正常,排列整齐,清晰均匀,而模型组大鼠心肌间质胶原纤维分布明显增多,排列紊乱,可见明显互相交错的网状胶原纤维。与模型组相比,中药低浓度组、高浓度组、西药组心肌胶原纤维数量明显减少,其中高浓度组、西药组心肌纤维化程度最轻。Ⅰ型胶原/Ⅲ型胶原纤维结果可见:与对照组相比,模型组比值明显增加（P<0.01）;与模型组大鼠相比,中药高浓度组、西药组比值降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,而低浓度组无明显差异（P>0.05）。7.Western blot 结果:7.1 Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原蛋白表达:结果显示,与对照组相比,在模型组大鼠左心室组织中的Collagen Ⅰ及CollagenⅢ蛋白表达含量明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组、西药组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达含量均明显下降,具有显着统计学差异（P<0.01）。7.2 MMP-9及TIMP-1蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠的MMP-9蛋白表达含量明显升高（P<0.01）,同时TIMP-1蛋白的表达含量明显下降（P<0.01）,差异具有统计学意义。与模型组大鼠相比,西药组、中药高浓度组MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,西药组TIMP-1的蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,而中药高浓度组TIMP-1的表达含量无明显差异（P>0.05）。7.3大鼠左心室中内皮细胞标志CD31、VE-Cadherin蛋白表达及间质细胞标志α-SMA、FSP1蛋白表达:结果显示,与对照组大鼠相比,模型组大鼠FSP1、α-SMA mRNA表达增加（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达降低（P<0.01）,差异具有统计学意义;与SHR 大鼠相比,西药组 FSP1、α-SMA mRNA 降低（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA 表达显着增高（P<0.01）。高浓度芪参六味方组α-SMA mRNA显着降低（P<0.01）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）,高浓度芪参六味方FSP1 mRNA无明显统计学差异。各组间CD31mRNA表达无明显差异（P>0.05）。7.4大鼠TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平均明显上调（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组的SHR大鼠左心室组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达含量均明显下降（P<0.01）,西药组的SHR大鼠心肌组织中Smad2、Smad3蛋白的表达含量均下降（P<0.05）,西药组大鼠左心室组织中TGF-β 1的含量无明显差异（P>0.05）。7.5大鼠左心室中β-catenin蛋白、Snail蛋白表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中β-catenin蛋白、Snail蛋白的表达水平均显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组大鼠心肌组织中的β-catenin蛋白、Snail蛋白含量均下降（P<0.05）,西药组SHR大鼠心肌组织中的β-catenin蛋白、Snail蛋白均无明显差异（P>0.05）。7.6大鼠左心室中Notch ICD蛋白的表达:结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中Notch ICD蛋白的表达水平显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组大鼠心肌组织中Notch ICD蛋白表达含量明显下降（P<0.01）,西药组大鼠心肌组织中的含量降低（P<0.05）。8.Real-Time RT-PCR 结果:8.1 Collagen Ⅰ、CollagenⅢmRNA表达:与对照组相比较,模型组大鼠左心室Collagen Ⅰ、CollagenⅢmRNA水平明显上调（P<0.05）;与模型组相比,中药组及西药组左心室Collagen Ⅰ mRNA水平下调（P<0.05）,各干预组Collagen Ⅲ mRNA表达水平均无明显差异。8.2左心室MMP-9、TIMP-1 mRNA表达:与对照组相比,模型组大鼠左心组织中MMP-9 mRNA表达增高（P<0.05）;与模型组相比,中药高浓度组、西药组MMP-9mRNA表达均降低（P<0.05）。各组间TIMP-1 mRNA水平均无明显差异（P>0.05）。8.3大鼠左心室中内皮细胞标志CD31、VE-Cadherin mRNA表达及间质细胞标志α-SMA、FSP1的mRNA表达:与对照组大鼠相比,模型组大鼠FSP1、α-SMA mRNA表达增加（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达降低（P<0.01）,差异具有统计学意义;与SHR大鼠相比,西药组FSP1、α-SMA mRNA降低（P<0.05）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）。高浓度芪参六味方组α-SMA mRNA显着降低（P<0.01）,VE-Cadherin mRNA表达显着增高（P<0.01）,高浓度芪参六味方FSPlmRNA无统计学差异。各组间CD31mRNA表达无明显差异（P>0.05）。8.4大鼠左心室TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达:与对照组比较,模型组SHR大鼠左心室TGF-β1、Smad2mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组大鼠相比,中药组SHR大鼠左心室TGF-β1、Smad2 mRNA表达水平均下降（P<0.05）,西药组SHR大鼠左心室Smad2 mRNA降低（P<0.05）;各组大鼠间Smad3 mRNA表达无明显差异（P>0.05）。8.5大鼠左心室中内β-catenin蛋白、Snail蛋白的mRNA表达:与对照组大鼠相比,模型组大鼠左心组织中β-catenin、Snail mRNA的表达水平均显着升高（P<0.05）;与模型组大鼠相比,中药组及西药组大鼠心肌组织中的β-catenin、Snail mRNA均下降（P<0.05）。8.6大鼠左心室组织中Notch mRNA表达:与对照组相比,模型组SHR大鼠左心室Notch mRNA的表达水平明显增高（P<0.05）;与模型组SHR大鼠相比,中药组及西药组SHR大鼠左心室Notch mRNA的表达明显降低（P<0.01）。结论:芪参六味方能够降低SHR大鼠血压,改善心肌纤维化,从而改善SHR大鼠舒张功能。其作用机制可能与调控Notch信号通路,抑制TGF-β 1/Smads与Wnt/β-catenin信号通路,影响EndMT过程,进而改善MMPs/TIMPs比例,抑制胶原纤维的沉积有关。
孙敬辉[2]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中研究指明心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
刘清霞[3]（2021）在《Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化》文中认为背景Alamandine（ALA）及其受体Mas相关G蛋白耦合受体（MrgD）是最近被报导的肾素-血管紧张素系统（RAS）的新成分。ALA可由血管紧张素（1-7）（Ang（1-7））脱羧形成,也可以由血管紧张素转化酶2（ACE2）水解血管紧张素原A（Ang A）形成。ALA主要通过激活MrgD受体起作用,它的作用包括舒张血管、保护缺血再灌注心脏、抑制氧化应激、减轻心脏及肾脏纤维化等作用。然而,ALA对肺纤维化的作用及MrgD受体是否在肺成纤维细胞中表达目前尚不清楚。目的1、在小鼠原代成纤维细胞上验证ALA减轻AngⅡ诱导的肺成纤维细胞胶原沉积的假说及探讨相关通路。2、采用qPCR技术分析MrgD受体是否在成纤维细胞中表达。3、观察ALA在博来霉素（BLM）诱导的小鼠肺纤维化中的作用及探讨相关机制。方法1、采用第三至第五代C57/B小鼠原代肺成纤维细胞进行体外实验,Western blot法检测各组α-colllgen Ⅰ、CTGF、LC3B、NOX4、P62的蛋白水平;qPCR检测原代肺成纤维细胞MrgD mRNA的表达水平;试剂盒检测细胞H2O2;免疫荧光检测自噬流水平。2、体内实验采用气管内滴入BLM的方法构建C57/B小鼠肺纤维化的模型。28天后取下肺组织,control组、BLM组、BLM+ALA组及BLM+pirfenidone组分别进行HE染色观察肺组织损伤情况,Masson染色分析组织胶原的情况,Ashcroft score及masson进行肺纤维化半定量评分,免疫组化检测组织LC3B、NOX4、P62免疫强度,试剂盒检测组织H202及HYP的含量。3、采用SPSS22.0软件进行统计分析,以P<0.05表示有统计学意义。结果1、ALA减轻小鼠肺成纤维细胞胶原的沉积。ALA(10-7mol/L)预处理肺成纤维细胞,随后暴露于AngⅡ(10-7mol/L)24h,ALA能明显减少肺成纤维细胞α-collagen Ⅰ、CTGF的蛋白水平。2、ALA通过MrgD受体起作用。qPCR检测提示肺成纤维细胞MrgD mRNA的表达水平升高。加入MrgD受体抑制剂D-Pro7-Ang-（1-7）后ALA的抗纤维化作用明显被逆转。3、ALA通过抑制NOX4减轻肺纤维化。ALA(10-7mol/L)、NAC(10-3mol/L)、H202(5x10-5mol/L)分别预处理肺成纤维细胞后,随后加入 AngⅡ(10-7mol/L)作用24h,Control组α-collagenⅠ、NOX4蛋白表达量及H2O2浓度无明显升高,AngⅡ组上述指标明显升高,AngⅡ+ALA组明显低于AngⅡ组与AngⅡ+NAC组相近,与AngⅡ+H202组相反。4、ALA通过诱导自噬减轻肺纤维化。ALA(10-7mol/L)、rapamycin(10-6mol/L)、bafilommycicn A1(2.5x10-8mol/L,)分别预处理肺成纤维细胞1h,随后加入AngⅡ(10-7mol/L)作用 24h。AngⅡ组与control组比,α-collagenⅠ、P62、NOX4蛋白表达量明显增多,LC3BⅠ向LC3BⅡ转化明显减少,AngⅡ+ALA组较A即Ⅱ组α-collagenⅠ、P62、NOX4蛋白表达量明显减少,LC3BⅠ向LC3BⅠ转化增多,与AngⅡ+rapamycin组相同。加入自噬晚期抑制药物bafilomycicn A1后ALA诱导的自噬
马征[4]（2021）在《基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制》文中研究表明房颤是临床上常见的心律失常,可引起包括脑卒中在内的多种栓塞性疾病,并诱发、加重心力衰竭,严重威胁了人类健康。目前,房颤的西医治疗以内科药物和射频消融术为主,虽然疗效有了明显提高,但仍存在一定局限。中医从整体观念出发,辨证用药,或可作为临床防治房颤的一个策略。在临床实践中发现以益气活血法为基础,通过加入清热化痰、养心安神等方法治疗房颤有一定疗效,然而由于当前临床研究的样本量、方法、质量水平参差不齐,其有效性尚缺乏准确的判断。Meta分析作为循证医学寻求最佳证据的有力手段,或可为解决这一问题提供思路,因此,本研究拟采用Meta分析的方法,对益气活血法为主治疗房颤的临床疗效及安全性进行探讨。流行病学显示房颤与高血压之间关系密切,高血压心房重构被认为是其发生房颤的重要原因,其中,以心房纤维化为主要特征的心房结构重构是关键环节。目前,仍缺乏针对高血压心房重构的有效药物,中医药研究有可能是解决这一问题的突破口。高血压的中医辨证分型主要有肝阳上亢、痰浊阻滞、气虚血瘀等,发病过程容易出现痰热,而快速性心律失常在气虚血瘀的基础上,痰热证表现较为突出,特别是在如房颤等快速性心律失常的发作期,痰热尤为明显。参连复脉颗粒作为我院心内科治疗心律失常的协定处方,其在益气活血的基础上,注重清心化痰,临床治疗有一定疗效。前期研究发现参连复脉颗粒具有抑制炎症、缩短动作电位时长、降低快速性室性心律失常、减少房颤复发率的作用。相关文献研究亦发现参连复脉颗粒主要组成药物及有效成分可通过抑制TGF-β1通路等作用抑制心房纤维化,减少房颤的发生。本研究通过复制原发性高血压大鼠动物模型,运用小动物超声心动图、心电图、在体心房burst刺激、电生理检查、免疫组化及Western Blot等方法,从整体、组织细胞、分子层面进行研究,以验证“参连复脉颗粒可能通过调节ERK1/2和TGF-β 1/Smad3通路,抑制高血压心房重构和房颤易感性”的假说。目的1.探讨以益气活血法为主治疗房颤的临床疗效和安全性,为房颤的中医药治疗提供循证医学证据。2.探究参连复脉颗粒对高血压心房重构和房颤易感性的干预作用及可能机制。第一部分 益气活血法治疗房颤的Meta分析方法通过计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI）,中国生物医学文献数据库（CBM）,维普中文期刊全文数据库（VIP）,万方数据库,以及国外数据库包括PubMed、Web of Science及Cochrane Library。收集公开发表的关于益气活血法为主联合西医常规治疗房颤的随机对照临床实验。用RevMan5.3软件对纳入的文献进行Meta分析,结果通过森林图呈现,敏感性分析评估结果是否稳定,漏斗图分析文献是否存在发表偏倚。结果1.文献检索筛选结果经过文献检索和补充,共检索出712篇文献,排除重复文献215篇,进而浏览标题、,剔除289篇与纳入标准不符的文献,最后进行文献通读,纳入文献17篇。2.纳入文献特征2.1一般资料17篇文献共纳入1639人,其中治疗组828人,对照组811人;17篇文献中有2篇未详细说明治疗组和对照组具体年龄和性别分布情况,其余均详细描述了治疗组和对照组患者的例数、性别、年龄、干预措施和疗程,17篇文献中有3篇文献未明确说明病程情况,其余详细描述了病程;17篇文献均描述治疗组和对照组的一般资料无统计学差异。2.2中药使用情况本研究纳入的文献以益气活血法为基础治法,其中使用频次较高的药物为人参（10次）,黄芪（6次）,丹参（8次）,三七（7次）。2.3不良反应及随访情况纳入的17篇文献中,有4篇明确报道无不良反应;有6篇明确报道出现不良反应,包括有头晕、恶心呕吐、心动过缓等;有7篇未描述是否发生不良反应。3.文献质量评价纳入文献总体质量一般,经改良jadad评分量表评分,有4篇文献2分,6篇文献3分,6篇文献4分,1篇文献6分。纳入的17篇文献均提及“随机”字样,其中13篇采用了正确的随机方法,17篇文献均未描述分配方案隐藏,有1篇文献采用了正确的盲法,2篇文献报告偏倚风险低,17篇文献结果数据均完整、没有其他偏倚来源。4.Meta分析结果Meta分析结果显示,益气活血中药联合常规西药组在临床疗效（RR=1.16,95%CI=[1.08,1.23],Z=4.33,P<0.00001）、中医证候疗效（RR=1.29,95%CI=[1.18,1.41],Z=4.33,P<0.00001）、房颤转复率（RR=1.23,95%CI=[1.04,1.46],Z=2.46,P=0.01）、窦性心律维持（RR=1.31,95%CI=[1.14,1.50],Z=3.80,P=0.0001）、房颤发作次数（SMD=-1.00,95%CI=[-1.73,-0.27],Z=2.67,P=0.008）和安全性评价（RR=0.43,95%CI=[0.28,0.66],Z=3.83,P=0.0001）方面优于常规西药组。结论以益气活血法为主的口服中药联合西药,在改善房颤临床疗效、中医证候疗效、房颤转复率、窦性心律维持及房颤发作次数方面有一定疗效,且安全性较好。但由于纳入的文献质量有限,本次Meta分析结果尚有待大样本、高质量的临床研究证实。第二部分基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制方法1.分组与给药将自发性高血压大鼠随机分为SHR空白组（SHR组）、SHR+氯沙坦钾组（LOS组）、SHR+参连复脉颗粒组（SLFM组）,同时以正常血压京都威斯特大鼠作为正常对照组（WKY组）,共4组。给予相应药物或生理盐水灌胃,共4周。2.检测方法各组大鼠干预4周后记录体重、血压、心率、死亡情况;利用小动物超声心动图检测左心房及左心室的结构和功能;利用心电图检测P波时限、PR间期;利用多导生理记录仪检测心房有效不应期,利用在体心房burst刺激检测房颤易感性;利用H&E染色、Masson染色及免疫组化检测心房心肌细胞肥大、心房间质纤维化情况;利用ELISA、Rt-qPCR及Western Blot技术检测ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路相关基因及蛋白表达水平。结果1.模型评价:（1）与WKY组相比,SHR组体重较轻,收缩压和舒张压均明显升高（P<0.05）;（2）与WKY组相比,SHR组左室壁增厚、左室内径缩小、左心房扩大、左心房总射血分数降低、标化左心房重量及标化全心重量增加（P<0.05）;（3）与WKY组相比,SHR组P波时限、PR间期、房颤诱发持续时间增加（P<0.05）;（4）与WKY组相比,SHR组心房心肌细胞肥大、胶原蛋白I和胶原蛋白Ⅲ表达增高,胶原纤维容积分数升高（P<0.05）;（5）与WKY组相比,SHR组心肌纤维化相关因子表达异常,表现为 ERK1/2 通路相关因子 AngⅡ、AT1R、p-ERK1/2 显着升高（P<0.05）,而 TGF-β1/Smad3通路相关因子 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、MMP-3 升高（P<0.05）,TIMP-3 降低（P<0.05）。2.参连复脉颗粒对心脏结构和功能的作用:SLFM组与SHR组相比,左心房内径、左心房最大容积显着缩小（P<0.05）,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,舒张期左室前壁厚度、左房内径显着缩小（P<0.05）,左心房最大容积有缩小的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。3.参连复脉颗粒对心房电生理及房颤诱发率的作用:SLFM组与SHR组相比,P波时限、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异;LOS组与SHR组相比,P波时间、PR间期、房颤诱发持续时间显着降低（P<0.05）,房颤诱发率有降低的趋势,但差异没有统计学意义,其余指标均无明显差异。4.参连复脉颗粒对心房心肌细胞肥大及心房间质纤维化的作用:与SHR组相比,SLFM组与LOS组心房心肌细胞肥大有所抑制,胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ表达有所减少,纤维容积分数明显减少（P<0.05）。5.参连复脉颗粒对心房ERK1/2及TGF-β1/Smad3通路相关因子表达的作用:与SHR组相比,SLFM 组与 LOS 组心房 AT1R、p-ERK1/2/t-ERK1/2 显着降低（P<0.05）;SLFM组与 LOS 组心房 Galectin-3、TGF-β1、p-Smad3、t-Smad3、MMP-3、MMP-3/TIMP-3 显着降低（P<0.05）,TIMP-3 明显升高（P<0.05）。结论1.参连复脉颗粒能改善自发性高血压大鼠心房结构重构,对心房电重构及房颤易感性有一定抑制作用。2.参连复脉颗粒改善自发性高血压大鼠心房结构重构的机制可能和调控ERK1/2及TGF-β1/Smad3信号通路有关。
胡欢[5]（2021）在《Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究》文中提出研究背景:高血压心肌重构主要的特征表现为左心室肥厚和间质纤维化,是心力衰竭发生的主要原因之一。在高血压心肌重构进程中,压力负荷、神经体液及细胞因子等各种刺激因素引起心肌组织中氧化应激增强和炎症反应的激活,进一步导致心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的活化和细胞外基质成分的合成。因此,抑制氧化应激及炎症是减轻高血压心肌重构的重要途径之一。Adropin是由能量稳态相关基因（Enho）编码的一种肽类激素,早期研究发现其在维持能量代谢平衡和改善胰岛素抵抗过程中发挥重要作用。近期越来越多的研究表明Adropin同样可以通过抗氧化应激和抗炎作用参与多种疾病的发生与发展过程,然而其在高血压心肌重构中的作用及调节机制并不明确。本研究团队前期研究发现Adropin可能在肥胖青少年患者的血管内皮功能中发挥保护作用。基于Adropin在抗氧化应激、抗炎、维持能量代谢平衡、改善胰岛素抵抗及保护血管内皮功能等诸多病理生理过程中发挥重要作用,本研究团队推测Adropin可能参与了高血压心肌重构进程。本研究从临床、动物及细胞水平探究了Adropin在高血压心肌重构中的作用及其相关机制。第一部分高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义目的:探讨高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义。方法:本研究纳入于南昌大学第二附属医院心血管内科就诊的高血压患者86例以及于南昌大学第二附属医院体检科就诊的健康对照者12例,收集入组人群一般资料、临床指标结果、心脏彩超数据等。采用ELISA法检测入组人群血清Adropin水平,分析其在高血压患者和健康对照人群中的变化,进一步探究Adropin在高血压伴左室肥厚患者和高血压不伴左室肥厚对照人群血清中的变化,采用多元线性回归分析Adropin与左室肥厚标志物左室质量指数的关系,采用ROC曲线分析检测Adropin在高血压LVH中可能的诊断价值。结果:1.与健康对照人群相比,高血压患者血清Adropin表达水平显着降低,健康对照组Adropin水平:9.06±2.80 pg/mL;高血压组Adropin水平:4.64±0.64 pg/mL。2.与高血压不伴左室肥厚对照人群相比,高血压伴左室肥厚人群年龄更高,Adropin表达水平显着降低,其中高血压不伴左室肥厚对照组Adropin水平:4.79±0.65 pg/mL;高血压伴左室肥厚组:4.15±0.21 pg/mL。3.运用多元线性回归分析发现Adropin与左心室质量指数（LVMI）呈负相关性。当调整年龄、性别和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.31个单位:β（95%CI）=-7.31（-13.95,-0.67）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-18.82（-28.21,-9.42）,P<0.001;T3:β（95%CI）=-20.76（-30.36,-11.15）,P<0.001]。进一步调整年龄、性别、BMI、收缩压、舒张压、总胆固醇、血糖、谷草转氨酶及谷丙转氨酶混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.52个单位:β（95%CI）=-7.52（-14.32,-0.71）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36 pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-17.59（-27.53,-7.65）,P=0.001;T3:β（95%CI）=-20.72（-30.41,-11.04）,P<0.001]。4.ROC曲线分析Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值:血清Adropin的曲线下面积为0.936,在4.265 pg/mL临界点处,特异性为89.5%,敏感性为91%,且具有统计学意义。结论:高血压患者血清Adropin水平低于健康对照者,高血压伴左室肥厚患者血清Adropin低于高血压不伴左室肥厚对照者,Adropin与LVMI呈负相关,且其具有作为诊断高血压左室肥厚标志物的可能性。第二部分重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响目的:探究自发性高血压大鼠血清Adropin水平的变化并观察重组Adropin治疗12周后对自发性高血压大鼠心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入6只16周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,Rat）为实验组即高血压组（SHR）,6只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠为对照组即正常血压组（WKY）。使用无创血压仪测量大鼠血压,超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌组织中肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平,验证自发性高血压大鼠心肌重构模型。通过ELISA法,免疫组织化学法,RT-PCR法及Western Blot法检测自发性高血压大鼠心脏组织中Adropin的表达变化。2.我们构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入12只4周龄的雄性SHR及6只雄性WKY作为对照组。进一步将SHR分为2组:SHR组（n=6）和SHR接受Adropin处理组（n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（2.1μg/kg/d）,SHR组注射同等剂量的赋形剂。处理过程中每两周检测一次血压,处理12周后完成各项反映心肌重构的指标检测。通过ELISA法及Western Blot法检测大鼠血清及心肌组织中炎症因子IL-6及TNF-α的表达水平。通过DHE染色、组织MDA和SOD含量检测法进一步探究大鼠心肌组织中的氧化应激水平。结果:1.相比16周WKY组,16周SHR组大鼠SBP,DBP,心率及心脏重量及心指数（HW/BW）显着增高。彩超分析发现,相比WKY组,SHR组大鼠舒张末期室间隔厚度（IVS;d）,舒张末期左室后壁厚度（LVPW;d）显着增加,舒张末期左室内径（LVID;d）显着降低,而二者左心室射血分数（EF）和缩短分数（FS）无明显差异。组织病理染色发现,相比WKY组,HE染色提示SHR组大鼠心肌组织出现排列紊乱甚至断裂现象,WGA染色提示SHR组大鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示SHR组大鼠心肌组织纤维化水平显着增加,RT-PCR法提示SHR组大鼠心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高。ELISA,免疫组织化学染色及RT-PCR检测提示SHR大鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平显着降低。2.4周龄的大鼠分为三组:WKY组;SHR组;SHR+Adropin组。Adropin处理过程中,相比WKY组,SHR组大鼠的SBP和DBP水平随着年龄的增加显着升高,而Adropin持续处理12周能显着延缓SHR的SBP和DBP的水平增加进展。彩超分析发现,三组在4周龄基线水平时的IVS;d、LVPW;d、LVID;d、EF及FS水平无明显统计学差异。而在Adropin处理12周后的16周龄时,相比WKY组,SHR组的IVS;d,LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平显着下降,而SHR+Adropin组的IVS;d,LVPW;d水平较SHR组显着降低,LVID;d水平显着增高。三组的EF和FS水平无明显统计学差异。HE、WGA及Masson染色发现,相比WKY组,SHR组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低SHR组大鼠心肌肥大和纤维化水平。RT-PCR法提示,相比WKY组,SHR组心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高,而Adropin干预能显着降低其水平。进一步通过ELISA和Western Blot分析发现,相比WKY组,SHR组血清及心肌组织炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而Adropin干预能显着降低二者的表达水平。心肌组织DHE染色、MDA和SOD含量检测提示,相比WKY组,SHR组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD水平显着下降,而Adropin处理能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。结论:16周龄的自发性高血压大鼠伴有心肌重构,Adropin表达水平的下降。重组Adropin治疗12周后显着减轻自发性高血压大鼠的心肌重构水平,降低心脏组织炎症水平及改善氧化应激。第三部分Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制目的:探究高血压心肌重构常见刺激因素压力负荷增加和血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构过程中Adropin水平的变化,观察重组Adropin腹腔注射对病理性心肌重构的作用,观察Adropin敲除对病理性心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入28只8周龄的C57BL/6小鼠行主动脉弓缩窄（Transverse Aortic Constriction）手术及皮下埋植入式胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ构建小鼠病理性心肌重构模型。小鼠分为4组:假手术Sham组（n=8）,TAC组（n=8）;胶囊渗透压泵持续灌注生理盐水（Normal Saline,NS）组（n=6）,胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）组（n=6）。超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,验证小鼠病理性心肌重构模型。通过ELISA法,RT-PCR法及Western Blot法检测小鼠病理性心肌重构中Adropin的表达变化。2.构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入48只8周龄的C57BL/6小鼠。进一步将小鼠分为8组:假手术Sham给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Sham,n=6）,假手术Sham给予Adropin处理组（Vehicle+Adropin,n=6）,TAC给予赋形剂处理组（Vehicle+TAC,n=6）,TAC给予Adropin处理组（Adropin+TAC,n=6）;含生理盐水（NS）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+NS,n=6）,含生理盐水（NS）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+NS,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Ang Ⅱ,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+Ang Ⅱ,n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（450 nmol/kg/d）2周,Vechile组注射同等剂量的赋形剂。Ang Ⅱ组皮下灌注Ang Ⅱ（1500 ng/kg/d）2周,NS组皮下灌注等剂量的正常生理盐水。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响。3.构建Adropin基因敲除小鼠,在血管紧张素Ⅱ模型中进一步进行功能缺失性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠和10只8-10周龄同窝出生的野生型小鼠。小鼠分为4组:含生理盐水（NS）泵植入野生型小鼠组（WT+NS,n=5）,含生理盐水（NS）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+NS,n=5),含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入野生型小鼠组（WT+Ang Ⅱ,n=5）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+Ang Ⅱ,n=5)。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究各组小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin敲除对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2表达水平的影响。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP及空载对照病毒（Vector）,经尾静脉注射特异性上调小鼠心肌组织Nrf2的表达,在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构实验中进一步进行功能回复性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠,小鼠分为2组:尾静脉注射Vector的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（Vector+Ang Ⅱ,n=5）;尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ,n=5）。Ang Ⅱ处理2周后完成完成各项反映心肌重构的指标检测。通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.彩超结果发现,相比Sham组,TAC组的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而EF及FS二者无明显差异;相比NS组,Ang Ⅱ组的IVS;d、LVPW;d、EF及FS水平显着增高,LVID;d水平下降。组织病理染色发现,相比Sham组,HE染色提示TAC组小鼠心肌组织出现排列明星紊乱以及断裂现象,WGA染色提示TAC组小鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示TAC组小鼠心肌组织纤维化水平显着增加。相比NS组,Ang Ⅱ组小鼠心脏出现相似的组织病理学改变。ELISA,RT-PCR及West检测提示TAC小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较Sham组显着降低,而Ang Ⅱ小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较NS组显着降低。2.在TAC模型实验中,彩超结果结果,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平较Vehicle+TAC显着下降,LVID;d水平明显上升。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低TAC组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen Ⅰ蛋白表达水平明显升高,而Adropin治疗能显着降低二者水平。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin干预能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。在Ang Ⅱ模型实验中,可以发现类似的Adropin治疗逆转病理性心肌重构,改善氧化应激的现象。进一步通过Western Blot研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle+NS组,Vehicle+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平显着升高,总NQO-1表达水平显着下降,而Adropin治疗组即Adropin+Ang Ⅱ小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平相比Vehicle+Ang Ⅱ组进一步升高,胞浆NQO-1的表达水平上升。Adropin干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.构建Adropin基因敲除小鼠,验证Adropin缺失对血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构模型的影响。Western Blot研究发现,相比野生型小鼠,Adropin基因（Enho）敲除小鼠心肌组织中无Adropin蛋白的表达,证明Adropin基因敲除小鼠模型的成功构建。彩超分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平相比WT+Ang Ⅱ组进一步升高,LVID;d水平进一步下降,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin敲除能进一步增加Ang Ⅱ组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen I蛋白表达水平明显升高,而Adropin敲除能进一步升高二者水平,且二者具有统计学意义。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin敲除能进一步增加心肌组织活性氧水平,增加MDA含量,降低SOD的蛋白表达水平。RT-PCR和Western Blot法分析发现,相比WT+Ang Ⅱ,Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着下降,进一步提示Adropin可能通过Nrf2信号通路参与Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP,验证心肌组织Nrf2过表达在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构中的回复性作用。冰冻切片荧光显像、RT-PCR和Western Blot分析发现,相比尾静脉注射NS组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP及Vectord的Adropin敲除小鼠心脏组织出现荧光蛋白表达。相比尾静脉注射Vectro组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP组小鼠心肌组织Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着增高,证明了AAV9-Nrf2-GFP具有上调Adropin-/-小鼠心肌组织中Nrf2表达水平的能力。心脏彩超分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着下降,LVID;d水平升高,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着下降,心肌组织纤维化水平显着降低。RT-PCR分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA水平显着降低。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织ROS水平和MDA含量明显降低,而SOD水平明显升高。Nrf2过表达干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激Adropin基因敲除小鼠引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。结论:Adropin处理可以延缓压力负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Adropin敲除可以加重血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Nrf2/HO-1信号通路可能在其中发挥作用。第四部分Adropin在Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制目的:细胞水平探究Adropin是否参与了Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成及相关机制。方法:1.探究血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）处理心肌成纤维细胞对Adropin表达水平的影响,分为四组:Control组,Ang Ⅱ 0.1μM组,Ang Ⅱ 1μM组和Ang Ⅱ 2μM组,处理时间为24小时。采用RT-PCR和Western Blot法检测Adropin的mRNA及蛋白表达水平变化。采用外源添加重组Adropin及WB的方法观察其对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响。2.采用外源添加重组Adropin的方法,在Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成中进行功能型实验,分为四组:Vehicle组,Adropin组,Vehicle+Ang Ⅱ组及Adropin+Ang Ⅱ组。其中,采用噻唑蓝（MTT）法检测心肌成纤维细胞的增殖;采用Western Blot检测心肌纤维化标志分子Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及CTGF指标的表达。3.探究Adropin对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成进程中的氧化应激指标ROS、MDA及SOD水平的影响,Western Blot法研究外源添加重组Adropin对Nrf2/HO-1信号通路的影响。Nrf2的DNA结合活性实验分析Adropin处理对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞过程中细胞内Nrf2的DNA结合活性的影响。结果:1.RT-PCR和Western Blot实验提示,Adropin的mRNA及蛋白的表达水平随着Ang Ⅱ浓度增高下降,外源添加重组Adropin处理能提高处于Ang Ⅱ刺激下的纤维细胞中的Adropin水平。2.MTT检测发现,相比对照Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激可引起心肌成纤维细胞增殖水平的增加,而Adropin处理能显着降低血管紧张素Ⅱ刺激引起的增殖水平增加。Western Blot分析提示,相比Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激引起心肌成纤维细胞中的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和CTGF蛋白表达水平增高,而Adropin处理能显着降低三者的水平。3.细胞氧化应激水平检测发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞内活性水平和MDA水显着增高,而Ang Ⅱ+Adropin组活性氧及MDA水平较Ang Ⅱ组显着下降。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞中SOD水平显着降低,而Ang Ⅱ+Adropin组SOD水平较Ang Ⅱ组显着上升。进一步分析Adropin干预对心肌成纤维细胞在Ang Ⅱ刺激下的Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞核Nrf2和HO-1蛋白表达水平显着增高,Adropin处理进一步增加了胞核Nrf2和HO-1的蛋白表达。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞总的Nrf2蛋白表达水平增高,NQO-1表达水平下降,而Adropin处理后进一步提高总的Nrf2和NQO-1蛋白的表达。此外,Nrf2的DNA结合活性实验分析发现,相比vehicle组,Ang Ⅱ刺激引起Nrf2的转录活性增加,Adropin处理能进一步显着增加Nrf2的转录活性。结论:Adropin处理可能通过增强Nrf2/HO-1信号通路提高细胞抗氧化能力,减轻细胞活性氧水平从而抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成。
何璐[6]（2021）在《ARNi改善心肌纤维化的研究进展》文中研究说明沙库巴曲缬沙坦较依那普利能够进一步减少射血分数降低型心力衰竭（Heart Failure With Reduced Ejection Fraction,HFr EF）患者因心衰住院和心血管死亡风险,然而其治疗获益更多的机制目前并未完全明确。多项研究表明,血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂（angiotesin receptor-neprilysin inhibitor,ARNi）作为一种全新机制的心衰治疗药物,抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统（Renin-angiotensin-aldosterone System,RAAS）,同时抑制利钠肽的降解,较血管紧张素转换酶抑制剂（Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor,ACEI）显着改善心肌纤维化和心室重塑,减少室性心律失常,进一步降低心源性死亡和猝死风险。其改善心肌纤维化的作用机制可能与抑制RASS过度激活,从而抑制TGF-β、MMP-9等RAAS调控因素的表达相关。
刘云青[7]（2021）在《尿酸所致纤维化的机制研究以及HLA-B在高血压心室重构的作用研究》文中指出目的心肌纤维化是高血压患者心室重构的重要病理改变,是心血管疾病患者的重要病理生理基础,然而心室重构发生的具体分子机制尚不清楚。探究在不同浓度尿酸的刺激下成纤维细胞中骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）表达、成纤维细胞活化、增殖和凋亡、I型胶原蛋白（Type I collagen,Coll-1）、α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin,α-SMA）表达的差异。高血压致心室重构是心肌疾病发生的重要病理改变,本团队胡博士的前期研究发现人类白细胞抗原-B（Human leukocyte antigen B,HLA-B）可能作为高血压合并心室重构的核心基因靶点,本次研究我们拟利用高级模拟算法及高血压合并心室重构患者的临床标本对HLA-B在该疾病中的核心作用进行验证。材料与方法正常传代培养原代人心肌成纤维细胞（Human Cardiac Fibroblasts,HCF）,使用不同浓度的尿酸（Uric acid,UA）刺激HCF,并根据尿酸浓度进行分组:UA 0mg/dl组;UA 5 mg/dl组;UA 10 mg/dl组;UA 15mg/dl组。尿酸刺激培养48或72小时后进行以下实验:用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测Coll-1、OPN、α-SMA的m RNA表达情况;经蛋白印迹（Western blot,WB）实验检测各组Coll-1、OPN、α-SMA的蛋白表达量情况;用细胞发光值生长活力检测试剂盒检测不同尿酸各组成纤维细胞的生长活力;用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖毒性;Trans-well实验检测各组细胞的迁移能力;用碘化丙啶染色试剂盒检测各组细胞的凋亡情况。首先基于Gene Expression Omnibus（GEO）数据库通过Perl与LIMMA对HLA-B在高血压合并心室重构患者中的表达情况进行验证,进而通过收集高血压合并心室重构患者的临床标本对HLA-B在该疾病中的表达情况进行RT-qPCR验证;利用加权基因共表达网络分析（Weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）对HLA-B在高血压合并心室重构中的核心作用进行模块化验证及疾病相关性分析;通过Metascape和GSEA对HLA-B为核心的高血压合并心室重构相关的差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）进行功能富集验证;利用CTD数据库对HLA-B作为心室重构相关的重要核心基因进行分析;进一步预测HLA-B作为高血压合并心室重构核心基因的CeRNA网络;鉴定HLA-B与高血压合并心室重构相关的候选小分子药物。结果经48小时不同浓度尿酸处理后,在qPCR检测和WB检测中UA 5 mg/dl组、UA10 mg/dl组、UA 15mg/dl组心脏成纤维细胞OPN、α-SMA、Coll-1表达较UA 0 mg/dl组均有上调趋势,其中UA 10 mg/dl组显着性最高（P<0.001）;细胞生长活力检测结果显示,UA 5 mg/dl组、UA 10 mg/dl组、UA 15mg/dl组中心脏成纤维细胞的生长增殖活力较UA 0 mg/dl组显着提高（P<0.001）,细胞增殖活力趋势也呈倒U型曲线关系;CCK-8检测结果显示UA 5 mg/dl组、UA 10 mg/dl组细胞的增殖毒性较UA 0 mg/dl组有明显提升（P=0.004）;Trans-well小室迁移实验结果发现三个实验组（包括:UA 5 mg/dl组、UA 10 mg/dl组、UA 15mg/dl组）的细胞迁移能力均增强,UA 10 mg/dl组细胞迁移能力增强最为显着;不同浓度尿酸刺激72小时后碘化丙啶染色检测结果显示,UA 5 mg/dl组、UA 10 mg/dl组、UA 15mg/dl组细胞的凋亡减轻,UA 10 mg/dl组最明显。基于胡博士前期研究在高血压合并心室重构患者外周血样中发现了显着的核心基因:HLA-B、CTSL、RHOG、FLNA、MYD88、CAPNS1和TIMP1。其中以HLA-B的变化最为显着。本次研究通过HLA-B差异表达分析发现:高血压合并心室重构组较无左心室重构组相比HLA-B的表达增加,且差异具有统计学意义（log FC=-0.596,p值=0.037）,进而通过PCR分析得到了同样的表达趋势:心室重构组与对照组相比,HLA-B的相对表达水平明显升高（P<0.05）。通过WGCNA分析,棕色模块包含了HLA-B基因,且其与心室重构的相关系数为0.67。在HLA-B高表达组中,基因本体（Gene Ontology,GO）的富集分析结果表明主要表现在心脏磷脂代谢过程、细胞迁移以及心脏发育。京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析的富集分析结果表明主要表现在丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen Activated Protein Kinases,MAPK）信号通路、细胞自噬过程。ROC分析得出HLA-B可能作为心室重构预测靶点的特异性和灵敏度较高（曲线下面积=0.735,P=0.014）。结论（1）尿酸能上调心脏成纤维细胞中OPN的表达,促使成纤维细胞增殖活化,增加胶原蛋白分泌。（2）尿酸能上调心脏成纤维细胞中OPN的表达,延缓成纤维细胞凋亡,延长细胞的存活时间。（3）尿酸刺激成纤维细胞产生的促纤维化作用,并非一直存在剂量依赖,呈倒U型曲线的趋势。（4）HLA-B与高血压合并心室重构存在相关性,有可能作为该疾病临床诊断新的基因标志物。
候翠柳[8]（2021）在《Mep1α在病理性心脏重塑中的作用及机制研究》文中研究说明研究背景:心力衰竭是指各种心脏结构或功能性疾病导致心室充盈及（或）射血能力受损为主要表现的一组综合征,其中最常见的类型是射血分数降低型心衰,是以左心室收缩功能障碍,射血分数降低以至于不能满足机体代谢需要为表现,是多种心血管疾病发生发展的终末状态。而病理性心脏重塑是慢性心衰发生发展的核心环节。除心肌细胞肥大和凋亡外,细胞外基质沉积及炎症反应备受关注。Meprins是一种锌指金属蛋白酶,在以往的报道中在人和小鼠肠道的上皮细胞中高度表达,并可以与膜结合和（或）分泌到肠腔内发挥作用。以往报道中其可以剪切胶原纤维成为成熟的Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白在细胞外沉积,并且最近研究表明:Meprins除了在上皮细胞中大量表达外,也存在于一些免疫细胞,如巨噬细胞、肥大细胞中。并在慢性炎症反应性疾病中例如动脉粥样硬化、动脉壁炎症和腹主动脉瘤中发挥重要作用。但是Mep1α在心衰中的作用机制尚不清楚。研究目的:探究Mep1α在病理性心脏重塑中的作用及机制。研究方法:构建血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导及主动脉缩窄（TAC）手术诱导的小鼠心衰模型,qPCR和Western blot检测心脏组织中Mep1α的表达情况;构建Mep1α基因敲除小鼠,通过构建AngⅡ和TAC心衰模型,观察Mep1α敲除对心脏重塑的影响。为进一步探索Mep1α为心脏重塑的影响,本项目借助Mep1α的抑制剂Actinonin抑制Mep1α活性,探究其活性的改变在心脏重塑中的作用。通过心脏超声检测Mep1α对心功能的影响;通过WGA免疫荧光染色评估Mep1α对心肌肥大的影响;通过天狼猩红染色评估Mep1α对心脏纤维化的影响;通过a-SMA和periostin免疫组化染色评估心肌成纤维细胞的激活情况。同时我们通过免疫组化染色也评估了免疫细胞浸润及炎症因子表达。最后,本项目从细胞水平（巨噬细胞、心肌细胞、心肌成纤维细胞）进一步验证了敲低Mep1α或使用其抑制剂Actinonin对心肌肥大、炎症及纤维化的影响。同时,初步探究了 Mep1α所调节的下游重要信号通路分子的表达情况。研究结果:体内实验,在Ang Ⅱ（1000ng/min/kg）灌注的心脏重塑模型中观察到敲除Mep1α后显着缓解收缩期及舒张期左心室壁厚度,但是对心功能EF及FS值没有影响;进一步探究发现敲除Mep1α后显着缓解心脏肥厚及纤维化。为了进一步验证上述得到的实验结论,我们构建TAC心脏重塑模型,超声显示敲除Mep1α后显着缓解心功能下降,同时减轻心脏肥厚及纤维化。进一步探究Mep1α在这一过程中的变化,我们对WT小鼠Ang Ⅱ刺激后的心脏组织进行检测发现其mRNA及蛋白水平均未发生改变。用Actinonin抑制Mep1α酶活性后进一步探究酶的活性对心脏重塑的影响,结果显示在Ang Ⅱ心脏重塑模型中,抑制Mep1α的活性后显着缓解心脏肥大及纤维化;在TAC心脏重塑模型中得到相同的实验结论。初步探究炎症在这一过程中的作用,免疫组化染色结果显示:敲除Mep1α后显着缓解缓解心脏组织中巨噬细胞的浸润,而对肥大细胞及T淋巴细胞没有影响。进一步检测炎症因子的改变情况,结果显示:敲除Mep1α后显着缓解缓解心脏组织及血清中IL-6及IL-β的产生,而对IL-18、TNF-α、MCP-1的表达没有影响。体外实验,首先发现Mep1α在心肌细胞及心肌成纤维细胞高表达,进一步转染腺病毒敲低Mep1α后发现显着缓解心肌细胞肥大及成纤维细胞的激活。机制方面探究发现:敲低Mep1α后可以和缓解巨噬细胞、心肌细胞及心肌成纤维细胞中ERK1/2的磷酸化水平,缓解心脏中炎症反应、心肌细胞肥大及心肌成纤维细胞的激活,从而缓解心脏重塑。研究结论:我们发现敲除Mep1α后可以抑制心肌细胞、心肌成纤维细胞及巨噬细胞中ERK1/2激活,抑制心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的激活以及巨噬细胞引起的炎症反应,进而减轻Ang Ⅱ及TAC引起的心脏重塑。
任佳梦[9]（2021）在《小鼠心房纤维化模型miRNA表达谱分析及miR-483-5p在纤维化中的作用及生物瓣置换术后合并房颤患者的预后分析》文中提出第一部分 小鼠心房纤维化模型的microRNA表达谱分析目的:心房颤动（房颤）是临床上最常见的一种心律失常。已有多项研究发现,与窦性心律患者相比,房颤患者心房组织中microRNA（miRNA）分子表达有显着差异,提示miRNA可能参与了房颤的发生发展过程。血管紧张素Ⅱ持续给药诱导的小鼠心房纤维化模型被大量用于房颤相关基础分子机制的研究。但是目前尚无文献报道该模型中心房miRNA的表达情况。因此本研究通过建立小鼠血管紧张素Ⅱ模型并进行转录组测序,绘制该模型的miRNA及mRNA差异表达图谱,为拟用该模型进行心房纤维化相关研究的实验提供一些基础信息。此外,本研究将结合文献检索筛选出与心房纤维化有关的miRNA分子。方法:本实验通过迷你渗透泵持续泵入血管紧张素Ⅱ（2mg/kg/d）14天,在10-12周龄的雄性C57BL/6N野生型小鼠中建立血管紧张素Ⅱ模型。采用心脏超声证实心房扩大;采用病理实验证实心房纤维化;采用右心房短阵快速起搏诱导房颤以观察模型鼠对房颤的易感性。取小鼠双侧心房进行转录组测序（每组3只）,筛选出差异表达的 miRNA 和 mRNA 分子。采用 miRanda、TargetScan、RNAhybrid 三个 miRNA 靶点预测数据库进行靶点预测,筛选出任意两个数据库中预测一致的靶基因与mRNA差异表达基因做交集,对交集基因及差异表达的mRNA运用GO、KEGG、Reactome数据库及GESA计算方法进行功能注释。同时结合既往已发表的基于人源性心房标本的测序结果,筛选出适合应用该模型进行分子机制研究的候选miRNA。结果:本研究成功构建小鼠血管紧张素Ⅱ模型,实验组小鼠心房扩大,心房发生纤维化,房颤诱导率增高（55.6%vs12.5%）。与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组小鼠心房样本中共有34个miRNA分子有差异,其中上调13个,下调21个;共有456个mRNA分子有差异,其中上调276个,下调180个。根据功能注释分析,差异表达的mRNA分子主要集中在细胞外基质成分和炎症激活相关通路;差异表达的miRNA靶基因集中在Ras信号通路、cAMP信号通路、TGF-β信号通路、p53信号通路、细胞外基质结构、钙离子结合、钾离子通道激活等方面。通过与已发表文献对比,筛选出6个可能参与了房颤发生发展的miRNA分子:miR-21a-3p、miR-24-5p、miR-30c-5p、miR-421-5p、miR-483、miR-212,并对其中的miR-483的靶基因进行了预测及功能注释分析发现,其可能参与了纤维化的调控。结论:本研究成功在小鼠建立了血管紧张素Ⅱ诱导的心房纤维化模型,绘制了该模型中心房miRNA及mRNA表达谱,为拟用该模型进行miRNA分子机制研究的实验提供了一定的基础信息。本研究还筛选了 6个可能参与了房颤发生发展的miRNA分子。第二部分 MiR-483-5p在血管紧张素Ⅱ诱导的心脏纤维化方面的作用目的:与窦律患者相比,miR-483-5p在房颤患者的心房及血浆中差异表达,提示可能参与了房颤的发生发展。基于前期动物实验的结果,miR-483-5p可能参与了心房纤维化的形成。因此本研究拟探索miR-483-5p在纤维化方面的作用。方法:本研究首先在血管紧张素Ⅱ处理过的小鼠原代心脏成纤维细胞中用RT-qPCR的方式探索miR-483-5p的表达趋势。通过向成纤维细胞中转染miR-483-5p模拟剂及抑制剂以在细胞内过表达或敲低该分子,Western blot法测定与纤维化密切相关的胶原蛋白COL1A1、COL3A1的表达情况。此外,采用CCK-8法来检测过表达或抑制miR-483-5p对细胞增殖的影响。结果:小鼠原代心脏成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激后,细胞内的miR-483-5p表达量下调。在原代心脏成纤维细胞中转染miR-483-5p模拟剂后发现COL3A1蛋白表达量降低,COL1A1蛋白表达量无变化;而在原代心脏成纤维细胞中转染miR-483-5p抑制剂后,COL3A1的蛋白表达量明显增加,而COL1A1蛋白表达量无变化。小鼠原代心脏成纤维细胞过表达miR-483-5p后,细胞的增殖能力较miRNA模拟剂对照组下降,而抑制原代小鼠心脏成纤维细胞的miR-483-5p,细胞的增殖能力较miRNA抑制剂对照组增强。结论:在体外血管紧张素Ⅱ刺激下心脏成纤维细胞中miR-483-5p表达降低,过表达miR-483-5p可以起到抗纤维化的作用,同时会抑制细胞的增殖能力。第三部分 生物瓣置换术后合并房颤患者的临床现状及预后分析目的:随着老龄化的进展,生物瓣置换术后合并房颤患者逐年增加。但是既往房颤相关研究很少纳入此类患者,因此该人群的临床资料较少。故本研究回顾性收集相关人群的资料对该人群的临床特征、抗凝现状、长期预后、危险因素及其变化进行分析。方法:本回顾性研究共纳入了 2010年1月至2018年12月期间在本院行生物瓣置换术且出院诊断中包含心房颤动的903例患者,通过查询医院电子数据库收集基线资料,通过查阅医院电子数据库及电话访视的方式收集换瓣术后结局事件、抗栓治疗情况及新发疾病的数据。分类变量用频率和百分比来展示,连续变量根据数据的分布特征用平均值±标准差或中位数（四分位间距）来表示。采用logistic回归模型来分析影响换瓣术3个月后口服抗凝药使用的相关因素;计算C统计值来评价CHA2DS2-VASc评分在该人群中对血栓栓塞事件的预测能力;采用Cox回归模型分析该人群全因死亡及血栓栓塞事件的相关因素。结果:纳入人群的年龄为65.6（61.9-69.1）岁,其中548例（60.7%）患者为女性。本研究纳入的人群中风湿性心脏病的患病率为63%,合并高血压29.7%、冠心病22.1%、高脂血症16.3%、既往血栓栓塞史14.2%和糖尿病12.5%。二尖瓣生物瓣置换术的患者642例（71.1%）,主动脉生物瓣置换术112例（12.4%）,同时行二尖瓣和主动脉生物瓣置换术144例（15.9%）,同时行二尖瓣和三尖瓣生物瓣置换术3例（0.3%）,2例患者同时进行了二尖瓣、主动脉和三尖瓣的生物瓣置换术。在同期外科手术方面,287例患者在术中同时行房颤外科消融（31.8%）,131例行左心耳缝扎或切除（14.5%）。基线CHA2DS2-VASc评分为0（男）或1（女）、1（男）或2（女）、≥2（男）或3（女）组的患者换瓣术3个月后口服抗凝药的比例分别为 52.3%,59%和 63.2%。与抗凝药使用的因素有年龄（OR:1.035,95%CI:1.008-1.062,P=0.01）、左房前后径（OR:1.054,95%CI:1.031-1.078,P<0.001）、风湿性心脏病史（OR:1.487,95%CI:1.052-2.102,P=0.025）、慢性肾功能不全（OR:0.203,95%CI:0.054-0.76,P=0.018）、术中房颤外科消融（OR:0.334,95%CI:0.237-0.472,P<0.001）和使用抗血小板药（OR:0.077,95%CI:0.045-0.132,P<0.001）。在 3.84（2.64-5.51）年的随访期内,有 68 例（1.8%/年）患者死亡,81例（2.1%/年）患者发生了血栓栓塞,23例（0.6%/年）患者出现了大出血。多因素Cox回归分析结果发现,与随访期内全因死亡相关的因素有:估算肾小球滤过率（HR:0.966,95%CI:0.943-0.99,P=0.005）、左室射血分数（HR:0.962,95%CI:0.931-0.993,P=0.016）、风湿性心脏病史（HR:0.516,95%CI:0.311-0.854,P=0.01）、术中房颤外科消融（HR:0.348,95%CI:0.171-0.711,P=0.004）。与随访期内血栓栓塞风险有关的因素为:术中房颤外科消融（HR:0.263,95%CI:0.133-0.519,P<0.001）、换瓣术 3 个月后口服抗凝药（HR:0.587,95%CI:0.375-0.918,P=0.019）。CHA2DS2-VASc评分作为分类变量在未服用口服抗凝药的人群中预测血栓栓塞事件的 C 统计值为 0.6（95%CI:0.511-0.689,P=0.046,类别:CHA2DS2-VASc评分为0（男）或1（女）、1（男）或2（女）、≥2（男）或3（女））。患者CHA2DS2-VASc评分增长的年化发生率为11.6%（即每年每100人中有11.6个人的CHA2DS2-VASc评分增长）。结论:1.本研究初步探索了生物瓣置换术后合并房颤患者的流行病学特征:整体年龄相对较轻、瓣膜病病因仍以风湿性心脏病为主、其他合并疾病相对较少;生物瓣膜植入以二尖瓣为主,具有一定比例的术中房颤外科消融及左心耳缝扎或切除。2.血栓栓塞事件仍然是随访期内的主要事件,需要重点关注。3.处于血栓栓塞中高风险的人群存在抗凝治疗不足的情况。4.在中国人群中证实CHA2DS2-VASc评分在评估生物瓣置换术后合并房颤人群的血栓栓塞风险方面,具有一定的临床指导意义。5.该人群的血栓栓塞危险因素处于动态变化,需要持续评估,及时采取相应的管理措施。
倪淑媛[10]（2021）在《葛根素通过PARP-1抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路对心脏纤维化保护作用的研究》文中进行了进一步梳理背景:心脏纤维化是多种心血管疾病发展至心力衰竭的关键病理过程,其特征是以胶原蛋白为主要成分的细胞外基质过度沉积引起心室重构。近些年越来越多的研究发现,炎症反应在触发心室不良重构的发生发展中起着至关重要的作用。寻求遏制炎性因子引发的级联瀑布效应的药物,可能是干预心脏纤维化发生发展的有效手段。葛根素有抗炎、抗氧化作用,有研究显示,葛根素具有抑制心脏纤维化的作用,但其确切的机制尚未清楚。目的:观察葛根素对心脏纤维化及其形成过程中出现的炎症反应的影响,并围绕PARP-1、HMGB1研究TLR4-NF-κB这一促炎信号通路在葛根素干预心脏纤维化后出现的变化,从而探讨葛根素抑制心脏纤维化的机制。方法:1.分析心脏纤维化与炎性因子HMGB1、PARP-1、TNF-α、IL-6的关系。A.分离大鼠原代心脏成纤维细胞（CFs）,予脂多糖（LPS）刺激,并进行相关检测。B.免疫荧光检测α-SMA评估CFs的激活情况。C.用ELISA、RT-qPCR和westernblot检测TNF-α、IL-6、HMGB1、PARP-1、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的水平。2.研究葛根素对心脏纤维化及HMGB1、PARP-1、TNF-α、IL-6的影响。A.腹主动脉缩窄术（TAC）建立大鼠心脏纤维化模型,葛根素干预后,对心脏组织进行Masson染色、ELISA检测羟脯氨酸、western blot和免疫组化检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达,western blot检测HMGB1、PARP-1的水平。B.葛根素预处理LPS诱导的原代大鼠CFs,采用ELISA、免疫荧光、RT-qPCR、western blot 检测 TNF-α、IL-6、HMGB1、PARP-1、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的水平。3.探索葛根素抑制心脏纤维化的机制。A.westernblot 检测 TAC 大鼠心脏组织 TLR4、p65、p-p65、IκBα和 p-IκBα的水平。B.原代大鼠CFs转染PARP-1过表达质粒和（或）HMGB1 siRNA,再予葛根素和（或）LPS 预处理,用 ELISA、RT-qPCR、western blot 检测 HMGB1的表达,western blot检测TLR4、p65、p-65、IκBα和p-IκBα的表达,及免疫荧光、RT-qpCR、western blot检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的水平。结果:1.原代大鼠CFs在LPS诱导后,PARP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6和纤维化相关蛋白α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达明显增加。2.葛根素有效抑制LPS诱导的大鼠原代CFs合成α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白。葛根素明显减轻TAC大鼠的心脏纤维化程度。3.葛根素抑制LPS诱导的原代大鼠CFs PARP-1、HMGB1和炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达;葛根素同样抑制TAC大鼠心脏组织PARP-1、HMGB1的表达。4.过表达PARP-1可上调HMGB1并逆转葛根素对LPS诱导的心脏纤维化的抑制作用,而HMGB1基因沉默后,纤维化相关蛋白α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平明显下降。5.葛根素显着抑制TLR4-NF-κB信号通路,其抑制作用可被PARP-1过表达所逆转,而HMGB1基因沉默可减弱PARP-1过表达所引起的逆转葛根素效应。结论:葛根素对大鼠心脏纤维化有明显保护作用,其机制与下调了 PARP-1从而抑制HMGB1介导的TLR4-NF-κB信号通路有关。
二、血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响（论文提纲范文）
（1）芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 高血压心肌纤维化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医药治疗高血压研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 Alamandine通过MrgD受体抑制氧化应激诱导自嗟减轻AngⅡ诱导的肺成纤维细胞胶原沉积 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料及方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 Alamandine通过自嗤减轻小鼠肺纤维化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结与展望 |
| 综述一 肾素-血管紧张素系统与肺部疾病 |
| 综述二 肾素-血管紧张素系统的新成员：Alamandine及MrgD受体 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写对照 |
| 博士在读期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（4）基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 心房颤动的中医研究进展 |
| 1. 病名沿革 |
| 2. 心房颤动的脉象 |
| 3. 房颤的中医病因 |
| 4. 房颤的中医病机 |
| 5. 房颤的辨证分型 |
| 6. 中医对房颤的治疗 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 高血压房颤的发生机制与药物防治靶点 |
| 1. 高血压与房颤的患病情况 |
| 2. 高血压对房颤的影响因素 |
| 3. 高血压房颤的病理生理学机制 |
| 4. 心房纤维化是导致心律失常的心房结构重构的重要特点 |
| 5. 高血压房颤心房纤维化的机制 |
| 6. 高血压房颤的药物干预靶点 |
| 7. 中药可能的防治靶点 |
| 8. 小结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 临床文献研究 |
| 前言 |
| 益气活血法治疗房颤的Meta分析 |
| 目的 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Adropin在高血压患者血清中的表达水平变化 |
| 3.2 高血压患者一般临床资料 |
| 3.3 Adropin水平与左室质量指数的相关性研究 |
| 3.4 Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHR大鼠心肌重构的发生及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓高血压大鼠心肌重构的进展 |
| 3.3 Adropin处理抑制SHR大鼠心肌组织炎症水平的影响 |
| 3.4 Adropin处理降低SHR大鼠心肌组织氧化应激水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠病理性心肌重构的形成及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓TAC诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.3 Adropin处理延缓Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.4 Adropin敲除增加Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.5 Nrf2 过表达减轻Adropin缺失加重Ang Ⅱ模型小鼠病理性心肌重构的程度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 Adropin在 Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Ang Ⅱ对 CFs细胞Adropin表达的影响 |
| 3.2 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响 |
| 3.3 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞增殖的影响 |
| 3.4 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞胶原合成的影响 |
| 3.5 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞氧化应激的影响 |
| 3.6 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞引起Nrf2/HO-1 信号通路变化的影响 |
| 3.7 Adropin增强Ang Ⅱ刺激CFs细胞中的Nrf2 转录活性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 Adropin:一种新的心脏疾病生物标记物 |
| 参考文献 |
（6）ARNi改善心肌纤维化的研究进展（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 ARNi概述 |
| 2 ARNi改善心肌纤维化 |
| 3 ARNI改善心肌纤维化的作用机制 |
| 4 心肌纤维化的检测 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（7）尿酸所致纤维化的机制研究以及HLA-B在高血压心室重构的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 骨桥蛋白在心肌纤维化发生时的作用及机制研究 |
| 1 实验细胞 |
| 2 实验仪器及耗材 |
| 3 主要试剂 |
| 4 实验方法 |
| 5 实验结果 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 第二部分 HLA-B在高血压心室重构发生时在外周血的表达和临床应用探索 |
| 1 实验材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨桥蛋白在心肌纤维化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 论文答辩委员名单 |
| 个人简历 |
（8）Mep1α在病理性心脏重塑中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一 实验动物 |
| 二 材料 |
| 1. 主要仪器 |
| 2. 化学试剂 |
| 3. 主要试剂及配置方法 |
| 三 实验方法 |
| 1. 分子实验方法 |
| 2. 细胞实验方法 |
| 3. 动物实验方法 |
| 四 统计学分析 |
| 结果 |
| 一. 敲除Mep1α基因减轻TAC及AngⅡ灌注诱导的心脏重塑 |
| 1.1 构建Mep1α全身敲除小鼠 |
| 1.2 敲除Mep1α后减轻AngⅡ灌注引起的病理性心脏重塑 |
| 1.3 全身性敲除Mep1α基因后缓解TAC引起的心脏的重塑 |
| 二.Mepla的抑制剂Actinonin可以减缓AngⅡ及TAC引起的心脏重塑 |
| 2.1 Actinonin缓解AngⅡ灌注引起的心脏重塑 |
| 2.2 Actinonin缓解TAC引起的心脏重塑 |
| 三.敲低或抑制Mepla显着缓解Aug Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及心肌成纤维细胞激活 |
| 3.1 Mep1α在心肌细胞和心肌成纤维细胞中表达 |
| 3.2 敲低心肌细胞中的Mepla抑制心肌细胞的肥大 |
| 3.3 敲低成纤维细胞中的Mep1a缓解心肌成纤维细胞的激活、纤维化 |
| 四.Actiiumin显着缓解AugⅡ刺激导致的心肌细胞肥大和成纤维细胞激活 |
| 4.1 Actinonin显着缓解AngⅡ刺激导致的心肌细胞肥大 |
| 4.2 Actinonin显着缓解AngⅡ刺激引起的成纤维细胞激活 |
| 五.敲除Mepla减少AngⅡ诱导的心脏中的巨噬细胞的浸润及IL-lp、IL-6的表达 |
| 5.1 敲除Mep1α减少AngⅡ诱导的心脏组织中巨噬细胞的浸润 |
| 5.2 敲除Mep1α显着减少了IL-1β及IL-6的分泌 |
| 5.3 敲除Mep1α减少巨噬细胞分泌的IL-1β及IL-6 |
| 六. Mep1α介导ERK1/2激活并加重心脏重塑 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 病理性心脏重塑研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）小鼠心房纤维化模型miRNA表达谱分析及miR-483-5p在纤维化中的作用及生物瓣置换术后合并房颤患者的预后分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 小鼠心房纤维化模型的microRNA表达谱分析 |
| 1 前言 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 MiR-483-5p在血管紧张素Ⅱ诱导的心脏纤维化方面的作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 生物瓣置换术后合并房颤患者的临床现状及预后分析 |
| 1 前言 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述: MicroRNAs在心房颤动中的临床应用进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）葛根素通过PARP-1抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路对心脏纤维化保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠心脏纤维化与PARP-1、HMGB1表达关系的研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 葛根素抑制大鼠心脏纤维化与PARP-1、HMGB1 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 葛根素通过PARP-1抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路对心脏纤维化起保护作用 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 炎症反应与心脏纤维化 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
四、血管紧张素Ⅱ和醛固酮对培养的心脏成纤维细胞胶原代谢的影响（论文参考文献）
- [1]芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化作用机制的探讨[D]. 董菲. 北京中医药大学, 2021(08)
- [2]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]Alamandine通过MrgD受体抑制NOX4诱导自噬减轻肺纤维化[D]. 刘清霞. 南方医科大学, 2021(02)
- [4]基于ERK1/2与TGF-β1/Smad3通路研究参连复脉颗粒干预高血压心房重构及房颤易感性机制[D]. 马征. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究[D]. 胡欢. 南昌大学, 2021(01)
- [6]ARNi改善心肌纤维化的研究进展[D]. 何璐. 重庆医科大学, 2021(01)
- [7]尿酸所致纤维化的机制研究以及HLA-B在高血压心室重构的作用研究[D]. 刘云青. 卫生部北京老年医学研究所, 2021(01)
- [8]Mep1α在病理性心脏重塑中的作用及机制研究[D]. 候翠柳. 北京协和医学院, 2021(02)
- [9]小鼠心房纤维化模型miRNA表达谱分析及miR-483-5p在纤维化中的作用及生物瓣置换术后合并房颤患者的预后分析[D]. 任佳梦. 北京协和医学院, 2021(02)
- [10]葛根素通过PARP-1抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路对心脏纤维化保护作用的研究[D]. 倪淑媛. 南方医科大学, 2021
标签：成纤维细胞论文; 血管紧张素论文; 高血压论文; 高血压性心脏病论文; 血管紧张素转换酶抑制剂论文;