下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

论文摘要

目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-αmRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。结果 LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t=11.091,11.585,P均<0.001）;LPS组与LPS+siTLR4-3组TLR4 mRNA（1.39±0.09,3.28±0.15）和蛋白表达（0.31±0.02,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t=20.857,12.650,P均<0.001）且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA（11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F=98.803,P均<0.01）、TNF-αmRNA（15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F=278.064,P均<0.01）、Cleaved Caspase-3蛋白（0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F=154.851,P均<0.01）、Bax蛋白（0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F=71.310,P均<0.01）、NF-κBp65蛋白（0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F=56.571,P均<0.01）的表达水平和细胞凋亡率[（21.36±2.85）%,（20.94±3.22）%,（13.08±1.16）%,（7.25±1.28）%,F=25.685,P均<0.01]均明显升高,而细胞活力（0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F=80.811,P均<0.01）和Bcl-2蛋白（0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F=76.762,P均<0.01）、IκBα蛋白（0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F=53.635,P均<0.01）的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6mRNA、TNF-αmRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义（t=8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均<0.01）,而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（t=6.005,4.899,3.674,P <0.05）,而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义（P> 0.05）。结论下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。

论文目录

• 材料与方法
•   一、主要材料
•   二、方法
•   三、统计学分析方法
• 结??果
• 讨??论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 申光富,罗长琴,黄波,毕靖,张璇,余蕊,杨俊,谢军,杜培

关键词: 样受体,脂多糖,支气管上皮细胞,炎症,凋亡

来源: 中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 陕西省安康市中心医院呼吸内科

分类号: R329.2

页码: 166-172

总页数: 7

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