导读:本文包含了人醇脱氢酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人醇脱氢酶ADH2,大引物突变法,原核表达,酶活力检测
人醇脱氢酶论文文献综述
王旭达[1]（2008）在《基因定点突变提高人醇脱氢酶ADH2蛋白酶活性的研究》一文中研究指出醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase ADH)是一种含锌金属酶。其最重要的作用是催化乙醇代谢的初始反应,因此关于醇脱氢酶活性的研究在防止乙醇引起的肝损伤方面具有重要意义,把ADH应用在研制开发解酒护肝药物方面有很大的潜力。随着基因定点突变技术的迅速发展,人们通过定点突变可以达到改造蛋白质结构和功能的目的。ADH2活性中心附近残基的存在限制了乙醇脱氢酶的活性中心区,因此这些位点的替代会扩大该口袋并改变其底物特异性及亲和力,使酶活性得到显着提高。采用大引物突变法改变ADH2基因,设计3条引物,一条突变引物,另外两条引物位于突变引物的两侧,并带上合适的酶切位点,以供突变片段构建完成以后可以克隆至合适的载体。然后以突变引物与其附近的反向引物一起扩增带突变位点的片段,再以此PCR产物片段为引物与剩下的另一条引物一起扩增,成功实现定点突变,将其94位由苯丙氨酸突变为丙氨酸,将371位由苏氨酸突变为半胱氨酸。以pTYB11为载体,利用EcoR I和Xho I酶切位点构建了ADH2突变基因的原核表达载体,将其导入宿主菌ER2566中获得表达。最佳诱导时间为4 h,最佳诱导温度为16℃,最佳IPTG浓度为0.3 mmol·L~(-1)。突变ADH2的蛋白表达量占总蛋白的15.85﹪。利用Chitin纯化柱纯化宿主菌ER2566中表达的突变的ADH2,获得了分子量约为40 KD的目的蛋白。利用考马斯亮兰法测定蛋白浓度,确定纯化重组突变酶ADH2的蛋白质浓度范围是0.25 mg·mL~(-1)～0.33 mg·mL~(-1)。在25℃,pH7.5的100 mmol·L~(-1)磷酸钠溶液中测定突变重组酶的A_(340nm),以酵母醇脱氢酶为标准蛋白,计算突变重组酶制剂的酶活力,测得定点突变后ADH2的比活力为8.9 U·mg~(-1),实现了其酶活力的显着提高。本试验成功地对人醇脱氢酶ADH2实现了点突变,使其活性得到了显着提高。为进一步研究它的生物学功能提供了良好的条件,并为研制与开发新型的解酒护肝产品奠定了基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2008-04-10）
曾凡才,冯春红,刘友平,杨烨,李洪[2]（2007）在《人醇脱氢酶ADH1B*2等位基因的克隆与序列分析》一文中研究指出目的克隆人醇脱氢酶ADH1B*2等位基因,并对克隆序列进行序列分析。方法用RT-PCR法获得ADH1B基因的cDNA,然后用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUC19载体上。经蓝白筛选后,用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST比对分析鉴定,并用SNPBLAST比对分析和查询dbSNP数据库,分析所克隆序列的单核苷酸多态性。结果证实所克隆序列为ADH1B*2等位基因。提示ADH1B*2等位基因有2个位点存在单核苷酸多态性。结论成功克隆了ADH1B*2等位基因,并进行了SNP分析。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2007年21期）
人醇脱氢酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的克隆人醇脱氢酶ADH1B*2等位基因,并对克隆序列进行序列分析。方法用RT-PCR法获得ADH1B基因的cDNA,然后用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUC19载体上。经蓝白筛选后,用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST比对分析鉴定,并用SNPBLAST比对分析和查询dbSNP数据库,分析所克隆序列的单核苷酸多态性。结果证实所克隆序列为ADH1B*2等位基因。提示ADH1B*2等位基因有2个位点存在单核苷酸多态性。结论成功克隆了ADH1B*2等位基因,并进行了SNP分析。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人醇脱氢酶论文参考文献
[1].王旭达.基因定点突变提高人醇脱氢酶ADH2蛋白酶活性的研究[D].东北农业大学.2008
[2].曾凡才,冯春红,刘友平,杨烨,李洪.人醇脱氢酶ADH1B*2等位基因的克隆与序列分析[J].中国现代医学杂志.2007