日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定

论文摘要

为了探讨日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程（上海）股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞（BHK21细胞）,观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%; BHK21细胞密度在70%～80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3; Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku; IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 病毒、载体、细胞及血清
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要仪器
• 2 方法
•   2.1 NS3基因表达引物的设计与合成
•   2.2 NS3基因的克隆
•   2.3 真核重组表达载体的构建和鉴定
•   2.4 真核重组表达载体转染BHK21细胞
•   2.5 Western-blot鉴定
•   2.6 IFA鉴定
• 3 结果与分析
•   3.1 NS3基因的克隆
•   3.2 真核重组表达载体的构建和鉴定
•   3.3 真核重组质粒转染BHK21细胞
•   3.4 Western-blot鉴定
•   3.5 IFA鉴定
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王双双,赵红梅,周丹娜,蔡行,耿超

关键词: 日本乙型脑炎病毒,基因,克隆,真核表达,转染,细胞

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年17期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 长江大学动物科学学院,湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500402),国家自然科学基金项目(31602082)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0094

页码: 90-92+96+185

总页数: 5

文件大小: 350K

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