胰岛样结构分泌功能的初步评价

论文摘要

目的:以胰腺组织裂解液定向诱导骨髓间充质干细胞分化,形成胰岛样结构并对其进行评价,探究分化过程中细胞形态变化的规律;探讨胰岛样结构的形态变化与内分泌功能的关系。方法:采用胰腺组织裂解液,诱导骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构;倒置相差显微镜下观察细胞、结构的变化;以石蜡包埋切片并HE染色,观察组织结构和细胞形态;以双硫腙染色对分化形成的细胞团进行初步筛选;Mallory染色鉴别细胞及分布;使用免疫细胞化学染色技术检测Insulin、C-peptide、Glucagon、和Somatostatin蛋白;实时荧光定量PCR检测Pdx1、Ngn3、MaFA、Nkx6.1、Insulin、Glucagon、Somatostatin、GLUT-2基因的表达;酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中Insulin和C-peptide,以评价胰岛样结构的分泌功能。结果:1.诱导分化过程中,细胞形态变化规律。诱导早期,散在的细胞增多并聚集成细胞团;细胞团收缩、细胞密度增加,逐渐形成有被膜包绕的结构。2.胰岛样结构内可检测到Insulin、C-peptide、Glucagon、Somatostatin阳性细胞;Nkx6.1在诱导早期低表达,诱导后期持续高表达;GLUT-2在诱导早期低表达,诱导后期开始表达,至形成胰岛样结构时达峰值。3.酶联免疫吸附实验检测:培养液中Insulin和C-peptide的浓度先升高,随后逐渐趋于稳定。结论:以胰腺组织裂解液定向诱导骨髓间充质干细胞分化、发育为胰岛样结构,其形态变化具有明显的规律:开始诱导后,散在的细胞增多并聚集成细胞团;随后细胞团收缩、细胞密度增加,逐渐形成表面有被膜包绕的结构。诱导早期Nkx6.1开始表达,并持续趋高,提示细胞开始分化的状态;随着结构越来越复杂,GLUT-2的表达逐渐趋高,表明向具有转运葡萄糖载体结构的细胞分化,并持续稳定在较高水平;通过检测Insulin和C-peptide分泌的关联,初步评价胰岛样结构的功能发育状态。

论文目录

• 个人简历
• 中英文缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 BMSC分化为胰岛样结构的研究进展
•   参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 攻读学位期间参加的学术会议

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘红静

导师: 陈维平

关键词: 定向诱导,胰岛样结构,胰岛素

来源: 广西医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 广西医科大学

分类号: R329.2

总页数: 99

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