表面展示新城疫病毒部分F蛋白的重组干酪乳杆菌的构建及其免疫原性

论文摘要

本研究旨在构建重组干酪乳杆菌pLA-Newcastlediseasevirus （NDV）-F/Lactobacillus casei,获得表达产物,并探讨其免疫效果。利用PCR扩增携带部分主要抗原表位的NDV F基因,与穿梭质粒pLA连接转化至大肠杆菌BL21 （DE3）中,筛选阳性重组质粒,将其电转化至干酪乳杆菌中,构建重组干酪乳杆菌pLA-NDV-F/L. casei,应用PCR鉴定阳性菌株,Western blotting鉴定重组菌反应原性,间接免疫荧光、流式细胞术和激光共聚焦检测蛋白表达情况。试验选用14日龄雏鸡,各组免疫方式为口服+滴鼻。设立pLA-NDV-F/L. casei两次免疫组和三次免疫组、弱毒疫苗组、 pLA/L.casei、未攻毒PBS组和攻毒PBS组。间接ELISA方法检测雏鸡血清IgG、肠道、鼻腔、肺脏中sIgA抗体效价,评价试验组雏鸡攻毒保护率。结果表明,有94.10%的重组菌表达了F蛋白,且高效表达在干酪乳杆菌细胞表面,蛋白大小为62kDa,并能与抗NDV阳性血清特异性结合。各免疫组anti-F IgG和s Ig A抗体水平显著高于对照组,p LA-NDV-F/L. casei三次免疫组抗体持续时间比两次免疫组延长28 d,抗体峰值没有显著差异。免疫pLA-NDV-F/L. casei三次、两次、弱毒疫苗、pLA/L. casei和PBS的攻击保护率分别为80%、80%、90%、0%和0%。因此,利用干酪乳杆菌表达体系成功表达了携带部分抗原表位的NDVF基因,具备良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫应答。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、细菌株、质粒、试验动物
•   1.2 主要试剂和仪器
•   1.3 目的基因的获取
•   1.4 pLA-NDV-F/E.coli的构建与鉴定
•   1.5 pLA-NDV-F/L.casei的构建
•   1.6 pLA-NDV-F/L.casei表达目的蛋白的鉴定
•     1.6.1 pLA-NDV-F/L.casei的表达
•     1.6.2 Western blotting分析
•     1.6.3 间接免疫荧光试验
•     1.6.4 流式细胞术
•     1.6.5 激光共聚焦
•   1.7 重组菌pLA-NDV-F/L.casei免疫攻毒保护性试验
•     1.7.1 动物免疫
•     1.7.2 血清中IgG抗体检测
•     1.7.3 肠道、鼻腔、肺脏冲洗液中sIgA抗体检测
•     1.7.4 检测结果显著性分析
•     1.7.5 pLA-NDV-F/L.casei攻毒保护试验
• 2 结果与分析
•   2.1 pLA-NDV-F/L.casei构建与鉴定
•     2.1.1 PCR鉴定
•     2.1.2 Western blotting鉴定
•     2.1.3 间接免疫荧光试验鉴定
•     2.1.4 流式细胞术鉴定
•     2.1.5 激光共聚焦鉴定
•   2.2 血清IgG抗体效价测定
•   2.3 肠道、鼻腔、肺脏冲洗液sIgA抗体效价测定
•   2.4 pLA-NDV-F/L.casei攻毒保护试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘欢欢,李树东,杨雨晴,孙晓莹,李岩,刘昕旸,陈小燕,张连妹,白永飞,侯喜林,余丽芸

关键词: 新城疫病毒,免疫原性,干酪乳杆菌,黏膜免疫,保护率

来源: 生物工程学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江八一农垦大学生命科技学院

基金: 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(No.YJSCX2017-Y40),省高校产业化前期培育项目(No.1253CGZH14),黑龙江省农垦总局科技攻关项目(No.HNK135-04-06)资助~~

分类号: S852.4

DOI: 10.13345/j.cjb.190106

页码: 1453-1462

总页数: 10

文件大小: 1989K

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