导读:本文包含了毛细血管内皮细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:内皮,毛细血管,细胞,视网膜,酪氨酸,肾病,综合征。
毛细血管内皮细胞论文文献综述
李佩文,李宁,龙勉[1]（2019）在《基底硬度的增加加剧肝血窦内皮细胞毛细血管化》一文中研究指出肝血窦内皮细胞(Liver sinusoidal endothelial cell,LSEC)是肝内特化的毛细血管内皮,是保护肝细胞免受损伤的第一道防线。窗孔是LSEC的特征性结构,贯穿细胞,直径在50～200 nm。LSEC毛细血管化是肝纤维化过程中的一个显着病理特征,窗孔消失是毛细血管化的重要特征。目前对肝脏纤维化过程中组织硬度增加对LSEC影响的生物力学调控机制尚不清楚。本研究利用不同交联度的聚丙烯酰胺水凝胶体外模拟肝脏组织硬度的变化,并通过对相关力学敏感基因和蛋白表达检测、窗孔孔隙率的统计分析以及小分子抑制剂的使用,探究了基底硬度对LSEC毛细血管化和功能的影响及其相关分子机制。研究结果显示,硬度的增加加剧了LSEC的毛细血管化,在1、6、60 kPa的水凝胶上培养LSEC 3 d,孔隙率随体外培养时间和基底硬度增加而下降,同时LSEC毛细血管化的标志分子CD31膜表达也增加。窗孔的形成和存在与细胞骨架的重组之间存在密切关联,荧光成像显示肌动蛋白微丝紧紧围绕在窗孔的周围;使用肌动蛋白聚合抑制剂后,可观察到窗孔数目显着性增多;相应地,随着硬度增加,LSEC的肌动蛋白微丝也不断增加。采用Ⅱ型肌球蛋白抑制剂处理LSEC,因硬度增加所导致的窗孔退化加剧得到了有效抑制。此外,LSEC对氧化低密度脂蛋白有很强的吞噬清除功能,这种能力随体外培养时间增加而降低;有趣的是,在硬基底上的长时间培养比软基底上更好的保留了这种功能,提示一种可能的LESC细胞自我保护功能。对1 kPa和60 kPa水凝胶上培养的LSEC进行RNA测序分析,结果显示,在硬基底上与细胞骨架、胞间黏附、清道夫受体以及血管内皮细胞生长因子受体等相关的基因上调。以上结果表明,力学信号转导通路在肝血窦内皮细胞毛细血管化中扮演着重要作用,该研究的相关结果可为深入认识LSEC毛细血管化、治疗肝纤维化和肝硬化提供新思路。(本文来源于《医用生物力学》期刊2019年S1期）
罗瑜,陈华峰,聂玉雯,朱可彬,张建[2]（2018）在《西医联合真武汤加减对毛细血管渗漏综合征患者血管内皮细胞的保护作用》一文中研究指出目的:观察西医联合真武汤加减对毛细血管渗漏综合征(CLS)患者血管内皮细胞的保护作用。方法:选取46例CLS证属肾阳衰微患者,按随机数字表法分成观察组和对照组各23例。对照组行西医治疗,观察组在对照组的治疗基础上加用真武汤加减治疗。对比两组治疗前、后的外周血循环内皮细胞(CEC)、尿微量蛋白(U-MALB)、急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)及多器官功能衰竭综合征(MODS)发生率。结果:两组治疗前CEC、U-MALB及APACHE Ⅱ得分均无统计学差异(P>0.05);观察组治疗后第4天、第7天及第14天CEC、UMALB及治疗结束后APACHE Ⅱ得分均明显低于对照组(P<0.05);观察组MODS发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论 :西医联合真武汤加减对CLS患者血管内皮细胞具有较好的保护作用,可有效的改善患者预后,值得临床推广。(本文来源于《中国民族民间医药》期刊2018年04期）
王倩[3]（2017）在《毛细血管内皮细胞增生性IgA肾病中医证候、临床病理及预后分析》一文中研究指出研究背景IgA肾病(immunoglobulin Anephropathy,IgAN)是指病理表现以系膜区IgA沉积为主的肾小球肾炎,是全世界范围内最常见的原发性肾小球疾病。其发病机制复杂、临床表现多样、病理形态不一,治疗尚无特效疗法,亦是导致终末期肾脏病(end-stage renal diseases,ESRD)的重要原因。因此,尽早诊断、准确评估预后并积极治疗对控制IgAN的进展极其重要。牛津病理分型法作为IgAN评估病理表现的重要手段,将系膜细胞增生(M)、毛细血管内皮细胞增生(E)、肾小球节段性硬化(S)和肾小管萎缩或间质纤维化(T)共同列为评估IgAN预后的病理指标。其中,毛细血管内皮细胞增生(E)对于IgAN患者的临床及预后价值仍极具争议。但因其临床病例数偏少、易受药物及感染等因素影响,且常合并有不同程度的多种病变等致使有关毛细血管内皮细胞增生(内皮增生)性IgAN的研究未有定论。中医学对IgAN的认识体系已较为完备,且可以联系其肾脏病理学表现,从宏观及微观角度分别辨证论治。然而,局限于牛津病理分型法尚未能普遍应用,中医学对该分型法以及内皮增生(E)病变的认识仍有待进一步完善。本研究拟从内皮增生性IgAN展开,探讨其中医证候、临床病理及预后转归,进一步评估内皮增生病变与中医证型、临床及预后的相关性,丰富中医学对牛津病理分型体系的认识,以期为中西医诊治提供一定依据。目的1.初步探讨内皮增生性IgAN患者的中医证候、临床及病理特征。2.初步探讨内皮增生病变对IgAN患者预后的影响。方法基于IgAN的中医辨证指南以及中国中医科学院广安门医院肾病科的优势病种诊疗方案,选取2003年12月至2017年1月期间于我科经肾活检确诊为IgAN者共407例,回顾性分析符合纳入标准的78例内皮增生性IgAN患者,观察其中医证候、临床及病理特征。其中45例经连续随访6个月以上且临床资料完整者纳入随访研究,进一步分析内皮增生性IgAN的中西医治疗方法及预后转归。结果1中医证候1.1症状常见症状为乏力(58.9%)、腰痛(53.8%)以及咽部不适(包括咽痛、咽干及咽痒等,48.7%)。1.2中医证型结合我科及指南所述IgAN中医辨证标准,将78例患者共分为四型。据统计:(1)卫外不固、风热湿毒内归伤肾型共计39例(50.0%);(2)肝肾不足、阴虚火旺型共16例(20.5%);(3)脾肾气虚、湿瘀互阻型共17例(21.8%);(4)脾胃虚弱型共6例(7.7%)。其中,卫外不固、风热湿毒内归伤肾型为内皮增生性IgAN的主要证型(P<0.05)。1.3中医证候与临床相关性1.3.1 一般资料性别:各中医证型组间无统计学差异(P>0.05);起病年龄:卫外不固、风热湿毒内归伤肾型较肝肾不足、阴虚火旺型更早(P<0.05);有无前驱感染:卫外不固、风热湿毒内归伤肾型患者较其他证型多见前驱感染(P<0.05)。1.3.2实验室指标比较四种中医证型与24h-UTP、eGFR、Cr、CKD分期及RBC-M值之间的相关性。脾胃虚弱型较肝肾不足、阴虚火旺型及脾肾气虚、湿瘀互阻型患者的RBC-M值更高(P<0.05);余指标未见统计学差异(P>0.05)。1.4中医证型与病理相关性四种中医证型与牛津病理分型、球性硬化及新月体形成的相关性研究中未见统计学差异(P>0.05)。2临床及肾脏病理2.1临床特征2.1.1 一般资料发病率:占同期IgAN确诊者的19.2%;男女性别比:1.23:1(P>0.05);平均起病年龄:34.86±13.31岁;存在前驱感染者:30例(38.5%),以上呼吸道感染为主(P<0.05);表现为肉眼血尿者:共16例(20.5%)。2.1.2临床及实验室指标观察78例内皮增生性IgAN患者各项实验室指标的基线水平。(1)24h-UTP 为2.568±2.043g/d,其中有 61 例(78.2%)24h-UTP>1g/d,并以 1-3.5g/d者居多(P<0.05);(2)Cr 为 129.70±93.85μmol/L,基线 Cr 升高者共 38 例(48.7%);平均 eGFR 为69.75±33.12ml/(min-1.73m2);CKD1-5 期分别有 19 例(24.4%)、27 例(34.6%)、23例(29.5%)、6 例(7.7%)和 3 例(3.8%);(3)伴有高血压者共计50例(64.1%),尤以高血压3级者居多(P<0.05);(4)存在镜下血尿者共65例(83.3%),平均RBC-M为60.41±141.11/HP;(5)其他实验室指标:伴尿素氮升高者共19例(24.4%);伴尿酸升高者共26例(33.3%);伴白蛋白降低者共35例(44.9%);存在总胆固醇、甘油叁酯、低密度脂蛋白升高者分别有18例(23.1%)、38例(48.7%)、37例(47.4%);伴有血红蛋白降低者共 14 例(17.9%)。以上结果提示,内皮增生性IgAN患者的基础肾功能较差,临床常表现为较多蛋白尿(>1g/d)及高血压。2.2肾脏病理2.2.1免疫荧光沉积除IgA与C3以外,伴IgM沉积者共48例(61.5%),FRA沉积8例(10.3%),IgG沉积 7 例(8.9%),C1q 沉积 6 例(7.6%),ALB 沉积 1 例(1.3%)。2.2.2牛津病理分型伴有M1、S1及T1/2病变者分别为75例(96.2%)、47例(60.3%)及52例(66.7%)/20 例(25.6%)。2.3临床与病理相关性比较合并不同程度M、S、T与主要临床预后指标(24h-UTP、HT及eGFR)之间的相关性:M的病变程度在24h-UTP、HT及eGFR中均未见显着差异(P>0.05)。T的病变程度与eGFR下降及严重的高血压相关(P均<0.05);S的病变程度与较重的高血压相关(P<0.05)。余未见统计学差异(P>0.05)。3治疗方法及转归3.1治疗方法78例患者使用中西医结合治疗者共69例,9例单用中药治疗。3.1.1辨证论治卫外不固、风热湿毒内归伤肾型以益气清热方加减(39例,50.0%);肝肾不足、阴虚火旺型予知柏地黄丸合二至丸加减(16例,20.5%);脾肾气虚、湿瘀互阻型以当归芍药散合防己黄芪汤加减(17例,21.8%);脾胃虚弱型以参苓白术散或半夏泻心汤加减(6例,7.7%)。以黄芪、白术、茯苓、车前草、白花蛇舌草为治疗内皮增生性IgAN的高频基础药物(药物选用频率>处方总数的2/3)。3.1.2西医治疗方案使用RAS阻滞剂治疗者共40例(57.9%);免疫抑制剂(糖皮质激素、环磷酰胺、硫唑嘌呤、吗替麦考酚酯及环孢素A等)治疗者共36例(52.2%)。3.2预后转归随访研究中共纳入45例患者,平均随访时间为45.9±34.9个月,男女构成比为1.5:1,总有效率:82.2%(37例)。3.2.1主要疗效指标治疗前后比较(1)实验室指标:24h-UTP及RBC-M可见显着减少(P<0.001),ALB水平明显增加(P<0.05)。eGFR、Cr、BUN及HGB水平未见明显差异(P>0.05)。(2)免疫抑制剂:比较20例(44.4%)使用免疫抑制剂者与25例(55.6%)未使用者治疗前后的临床指标差异。前者可见24h-UTP、eGFR及RBC-M均有明显缓解(P<0.05),后者仅在RBC-M值上差异具有统计学意义(P<0.05)。3.2.2终点事件本研究中发生终点事件者共5例(1例患者eGFR下降并<15ml/min·1.73m2;余4例患者进入长期规律肾脏替代治疗),平均时间为45.9±34.9月,占本研究总人数的11.1%。结论毛细血管内皮细胞增生性IgAN的中医证型以卫外不固、风热湿毒内归伤肾型为主,临床常表现为早期肾功能损害、较多蛋白尿(>1g/d)及高血压。免疫荧光沉积以IgA、C3及IgM为主,牛津分型常可合并M1、S1及T1病变。本研究因病例数较少,毛细血管内皮细胞增生与IgAN预后的相关性尚不明确。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2017-05-01）
邢茜[4]（2016）在《激肽释放酶结合蛋白抑制高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞增殖作用的研究》一文中研究指出糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见的微血管并发症,是世界性的重要致盲性眼病,它的非增殖期表现包括微血管瘤、视网膜内出血、视网膜内微血管异常,增殖期表现为新生血管形成、玻璃体积血或视网膜前出血。眼内新生血管生成是增殖性糖尿病视网膜病变(Proliferative diabeticretinopathy,PDR)恶化和视力丧失的主要原因。新生血管导致的出血、渗出和增生牵引导致眼内结构和功能破坏,终至视力丧失。所以,寻找有效的方法来防止和治疗DR迫在眉睫。内源性血管生成抑制因子激肽释放酶结合蛋白(Kallistatin,Kallikrein-Binding Protein,KBP)是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员,有多种生物功能,包括调节血压、抗炎、血管松弛和刺激内膜增生等。研究发现KBP是一种血管生成抑制剂,能够抑制肿瘤组织的新生血管反应,也可抑制大鼠后肢缺血模型的自发性血管生成,但是KBP对于人眼部视网膜新生血管的作用研究不多。本研究在人眼部组织标本实验及离体细胞培养实验中探讨了KBP与糖尿病视网膜病变新生血管形成的关系。第一部分KBP在增殖性糖尿病视网膜病变患者玻璃体中表达水平的研究目的探讨KBP是否参与糖尿病视网膜病变新生血管的形成。方法临床因特发性黄斑裂孔、特发性黄斑前膜和PDR需行玻璃体切割手术的患者,糖尿病患者根据1999年WHO诊断标准确诊为2型糖尿病。分为2组:无糖尿病病史的特发性黄斑裂孔、特发性黄斑前膜患者作为对照组;因PDR手术的患者,为PDR组。25G玻璃体切割手术标准叁通道切口完成后,将1ml注射器接玻切头的抽吸通道侧,玻切头进入前部玻璃体腔,未开灌注前,高速切割并抽吸玻璃体保存。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测玻璃体中KBP的表达。结果ELISA检测结果显示对照组玻璃体KBP含量为38.48±1.97μg/ml,PDR组玻璃体KBP含量为18.35±2.74μg/ml,两组比较差异有统计学意义(t=16.59,P<0.05)。结论糖尿病视网膜病变PDR期患者玻璃体中KBP表达下降,可能与PDR的形成相关,KBP可能对糖尿病视网膜新生血管的形成有抑制作用。第二部分KBP抑制高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞增殖作用的研究目的观察KBP对高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞增殖是否有抑制作用。方法1.将人视网膜毛细血管内皮细胞(Human retinal endothelial cells,HRECs)分成两组,分别加入5m M和30m M浓度糖溶液干预24h后提取细胞RNA,检测不同糖浓度对KBP及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。2.将细胞分成4组:加5m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖及100n M KBP或1000n M KBP。将细胞加入96孔板中,每孔约1000细胞,待细胞贴壁,饥饿处理24h,加入不同浓度葡萄糖及KBP干预24h,再加入CCK-8 10μl,37℃培养箱放置2-4h,酶联仪检测每孔内450nm波长的吸光度(OD值),记录分析。收集细胞,进行western blot检测VEGF的蛋白表达。3.将细胞分成3组:加5m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖及1000n M KBP。细胞迁移用24孔板,Transwell小室装置,细胞饥饿过夜加入膜上层,下层加入不同浓度葡萄糖和KBP,24h后,记录膜下层的细胞数。4.将细胞分成3组:加5m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖,加30m M浓度葡萄糖及1000n M KBP。将HRECs以及不同浓度的葡萄糖及KBP加入到含Matrigel基质胶的96孔板内,培养箱培养8h后拍照,管腔数目统计分析。5.将细胞分成两组:一组导入干扰KBP基因表达的si RNA,一组导入空载si RNA。在5m M葡萄糖环境下进行CCK-8实验、细胞迁移实验、管腔形成实验。分别记录结果统计。结果1.RT-PCR结果显示,与5m M糖浓度相比,30m M糖浓度刺激HRECs中KBP及VEGF的表达(P<0.05)。2.与5m M糖浓度相比,30m M糖浓度促进细胞的增殖迁移及管腔形成,加入了100n M KBP或1000n M KBP后,这些作用被抑制(P<0.05)。3.VEGF的蛋白表达在30m M葡萄糖+1000nmol/L KBP组低于30m M葡萄糖组。4.在5m M糖浓度环境下,用KBP si RNA干扰KBP基因表达可以提高细胞增殖迁移管腔形成的能力(P<0.05)。5.在5m M糖浓度环境下,用KBP si RNA干扰细胞KBP基因,VEGF蛋白表达增加。结论1.高糖促进HRECs KBP及VEGF基因表达。2.100n M KBP或1000n M KBP抑制高糖刺激诱导的HRECs增殖。3.1000n M KBP抑制高糖刺激诱导的HRECs中VEGF的表达。4.抑制KBP基因表达可以提高HRECs的增殖作用。5.抑制KBP基因提高HRECs中VEGF的表达。(本文来源于《苏州大学》期刊2016-12-01）
邓元俊[5]（2016）在《PP2Ac Y127位点硝基化在肾小管管周毛细血管内皮细胞转分化中的作用及干预研究》一文中研究指出目的肾小管管周毛细血管内皮细胞向间充质转分化(EndMT)是新近发现的肾间质肌成纤维细胞的重要来源,其发生机制与内皮细胞紧密连接失去功能密切相关。研究表明蛋白丝/苏氨酸磷酸酶2A (PP2A)的催化亚单位C (PP2Ac)酪氨酸位点硝基化可激活PP2A并能下调紧密连接连接蛋白(Occludin)丝/苏氨酸位点磷酸化,从而参与内皮细胞紧密连接的功能调控。本研究探讨PP2Ac酪氨酸核心位点硝基化对内皮细胞紧密连接的影响,并阐明该位点是肾小管管周毛细血管EndMT的重要调控分子,参与进行性肾间质纤维化,为探索防治肾间质纤维化进行性发展的新治疗靶点提供实验依据。方法体外构建硝基化反应体系,用过氧化亚硝酸盐(Peroxynitrite)刺激重组的PP2Ac蛋白,western blotting收集对照组和刺激组中的蛋白行质谱检测,分析PP2Ac酪氨酸发生硝基化的具体位点。对上述硝基化位点进行计算机模拟分析以明确各位点空间暴露程度从而确定调控PP2A活性的核心位点。同时构建、合成以核心位点为中心的底物模拟多肽和对照多肽,体外实验中验证该多肽对EndMT的干预作用,体内实验首先应用活体成像技术检测多肽在小鼠体内的分布以及代谢状态,然后通过尾静脉联合腹腔多肽注射观察该多肽在UUO小鼠模型中对管周毛细血管EndMT的干预效应。结果：质谱检测分析PP2Ac发生硝基化的具体位点有Y284/267/265/218/130/127 。在这六个位点中,Y127在蛋白质空间结构、相邻氨基酸电荷分布上具有更稳定的空间表位优势,在PP2Ac活化过程中起核心作用。以127位点为中心构建及合成的可穿透性底物模拟多肽和对照多肽能够抑制TGF-β1诱导的EndMT。体外试验中,多肽在肝脏和肾脏中具有较高的药物积聚；较对照多肽,底物模拟多肽可明显抑制Occludin去磷酸化,减少EndMT发生,稳定外周毛细血管结构并部分减轻肾间质纤维化。结论以PP2Ac Y127为核心的底物模拟多肽可有效干预内皮细胞转分化,是肾间质纤维化治疗的潜在生物靶点。第一部分管周毛细血管EndMT是肾间质纤维化的重要组成部分目的在原发和继发性肾脏疾病以及UUO动物模型中探讨EndMT发生的证据,观察转化生长因子β1 (Transforming growth factor beta 1, TGF-β1)促进内皮细胞间充质转分化效应,探讨肾间质纤维化肌成纤维细胞内皮源性。方法选取原发性肾脏疾病(IgA肾病)以及继发性肾脏疾病(狼疮肾炎和糖尿病肾病)肾活检标本,应用血管内皮细胞特异性标志物CD31和肌成纤维细胞特异性标志物a-SMA行连续切片免疫荧光双标检测,并在阳性区域进行共聚焦叁维结构重建明确CD31+a-SMA+共表达。体内实验采用C57小鼠单侧输尿管梗阻肾病模型,荧光双标结合叁维重建观察CD31+a-SMA+共表达情况。体外实验采用TGF-β1 (lOng/ml)刺激人脐静脉内皮细胞72h建立EndMT细胞模型,镜下观察细胞形态变化,免疫荧光及western blot检测血管内皮钙粘素(VE-cadherin,内皮特异性标志物)和平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达变化。结果和对照组相比,在IgA肾病、狼疮肾炎、糖尿病肾病以及UUO动物模型肾间质纤维化区域,管周毛细血管管腔异常膨大或缩小;共聚焦显微镜下观察发现CD31和α-SMA共表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05)；对该共表达部位血管进行叁维立体重建,发现部分内皮细胞可表达α-SMA。体外实验,TGF-β1刺激72h后,内皮细胞形态由铺路石状向梭型转化,细胞与细胞间距明显增大;和对照组相比,肌成纤维细胞标志物α-SMA表达显着增加,而内皮细胞标志物VE-cadherin表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在原发和继发性肾脏病中,内皮细胞间充质转分化是肾间质纤维化肌成纤维细胞的重要组成部分。内皮细胞受到促纤维化因子刺激后,细胞表型和功能特性均可向间充质细胞转化。第二部分PP2A活化及PP2Ac硝基化对EndMT的作用研究目的探讨内皮细胞PP2A活化及PP2Ac硝基化对EndMT进程的影响方法(1)提取UUO小鼠不同梗阻时间点下肾脏组织蛋白以及不同TGF-β1刺激时间点下细胞总蛋白,继而用丝／苏氨酸蛋白磷酸酶活性试剂盒监测PP2A的活性变化;(2)采用PP2A特异性抑制剂冈田酸(Okadaic acid, OA)预处理后,观察TGF-β1刺激下α-SMA、VE-cadherin蛋白表达变化以及PP2A底物紧密连接蛋白Occludin磷酸化水平;(3) PP2Ac是PP2A的活性亚基,运用免疫组化及免疫荧光定位PP2Ac在肾脏组织的表达,并通过免疫共沉淀检测TGF-β1刺激下内皮细胞PP2Ac翻译后修饰变化及其对PP2A磷酸酶活性的影响。结果(1)和对照组相比,随着梗阻时间延长,PP2A活性逐渐增加并在UUO-14d达到峰值;体外实验,TGF-β1刺激下,PP2A的活性在15min开始升高,在60min时显着增强(P<0.05) 。 (2) western blot结果显示较TGF-β1组,OA干预组α-SMA表达显着下调而VE-cadherin表达显着上调；免疫共沉淀示正常HUVE细胞紧密连接蛋白Occludin磷酸化水平维持在较高水平,TGF-β1刺激72h后磷酸化水平明显降低,OA预处理后可部分抑制Occludin磷酸化减少(P<0.05)。(3)免疫荧光检测可见PP2Ac主要在肾小球及肾间质毛细血管内皮细胞表达；与对照组相比,PP2Ac蛋白表达量并无显着改变,但是PP2Ac硝基化水平明显升高;和其他翻译后修饰相比,PP2Ac硝基化可明显上调PP2A磷酸酶活性(P<0.05)。结论PP2A激活可破坏内皮细胞稳定性,促进EndMT的发生,抑制PP2A活性可减弱EndMT效应。PP2Ac硝基化是内皮细胞PP2A活性增强的主要原因,提示PP2Ac硝基化在内皮细胞转分化中发挥重要的促进作用。第叁部分PP2Ac Y127硝基化在EndMT中的作用研究目的前期研究表明蛋白丝/苏氨酸磷酸酶2A (PP2A)的催化亚单位C (PP2Ac)硝基化可激活PP2A并能下调紧密连接蛋白Occludin丝/苏氨酸位点磷酸化,从而参与内皮细胞紧密连接功能调控。本部分研究探讨PP2Ac酪氨酸硝基化具体位点及核心位点,并阐明该位点是肾小管管周毛细血管EndMT的关键调控位点,参与进行性管周毛细血管萎缩,为探索防治肾间质纤维化提供潜在的治疗靶点和干预策略。方法 (1)体外构建硝基化反应体系,用过氧化亚硝酸盐(Peroxynitrite)刺激重组PP2Ac蛋白,western blot收集对照组和刺激组中的蛋白行质谱检测,分析PP2Ac酪氨酸发生硝基化的具体位点。(2)对上述硝基化位点进行计算机模拟分析以明确各位点空间暴露程度从而确定调控PP2A活性的核心位点。同时构建以酪氨酸硝基化位点为中心的底物模拟多肽,偶联TAT穿膜肽,采用化学合成法获得融合多肽。(3)为了验证多肽是否能够顺利穿透进入内皮细胞,高效运载PP2Ac活性片段,我们运用FITC标记该多肽。将多肽与HUVECs共培养72小时后,荧光显微镜下观察该多肽细胞内荧光强度并采用CCK8法筛选最佳细胞药物浓度。(4)体外实验验证上述多肽对EndMT的干预效应,进一步明确PP2Ac核心位点。结果(1)质谱结果显示,对照组仅检测出一个硝基化位点Y218,实验组PP2Ac硝基化位点增加至六个：Y284/267/265/218/130/127.计算机模拟分析显示,在这六个位点中,Y127在蛋白质空间结构、相邻氨基酸电荷分布上具有更稳定的空间表位优势,在PP2Ac活化过程中可能起核心作用。(2)以构建的TAT-127WT融合多肽为例,携带荧光标记的多肽可渗透进内皮细胞且可持续到实验终点时间72h,对内皮细胞具良好的穿透效率。CCK8法检测不同浓度下该多肽的细胞毒性,结果表明在5-10uM浓度下该多肽不仅具有良好的穿透性,对细胞的毒性作用最低。因此,在后续的细胞实验中选择10uM进行研究。(3)以各位点为中心构建合成的可穿透性底物模拟多肽抑制TGF-β1诱导的EndMT效应依次为：Y127>Y265>Y130>284>Y267。结论酪氨酸127是PP2Ac硝基化及PP2A活化的关键位点,以该位点为核心构建的底物模拟多肽可有效抑制EndMT,可能是管周毛细血管病变、间质纤维化治疗的潜在生物靶点。第四部分TAT-Y127WT对EndMT的体内外干预研究目的前期研究表明,PP2Ac Y127是PP2A全酶活性的核心位点,以PP2Ac Y127为中心构建的底物模仿多肽较其他位点具有更显着的抑制EndMT效应。本部分研究进一步探讨TAT-Y127WT及其对照多肽TAT-Y127Scr对内皮细胞转分化的体内外干预效应,为肾间质纤维化的治疗提供实验依据和策略。方法(1)合成以PP2Ac Y127为中心的底物模拟多肽(TAT-127WT)和对照多肽(TAT-127Scr),预处理HUVECs 30min,给予TGF-β1 (10ng/ml)刺激72h, western blot检测a-SMA、VE-cadherin蛋白表达变化及PP2A底物Occludin磷酸化水平。(2)运用活体动物成像技术,在多肽注射前、注射后30min、4h及24h观察其在体内的代谢情况。同时在相应时间点取出重要器官和组织进行示踪。(3)尾静脉联合腹腔注射(5 nmol/g,术前一次、术后1次／天),2周后观察该多肽对UUO模型鼠肾脏管周毛细血管内皮细胞EndMT的干预效应,免疫组化观察α-SMA、Vimentin沉积情况。结果(1) Western blot结果显示TAT-127WT组较TGF-β1组、TAT-127Scr组,a-SMA表达显着下调,而VE-cadherin和occludin磷酸化水平显着上调,差异具有统计学意义(P<0.05) 。 (2) TAT-127WT在体内的代谢速度较快,4h后不足10%,24h后完全从体内代谢。肝脏和肾脏药物的富集程度较高,心、肺、脾脏程度低。检测血液中荧光强度进一步证明该融合多肽的半衰期大约为2.5h。(3)较对照组,经Y127WT干预后,肾组织微血管密度上调,具有一定EndMT抑制效应。免疫组化结果显示,干预组能够部分减少α-SMA、Vimentin在肾间质中的表达和积聚,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论通过抑制EndMT,以PP2Ac Y127为核心的底物模拟多肽对UUO小鼠肾小管管周毛细血管病变具有一定的改善作用,为肾间质纤维化治疗提供了新的思路。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
方石峰[6]（2016）在《microRNA-126通过IRS-1调控糖尿病模型鼠视网膜毛细血管内皮细胞周细胞PI3K/AKT/VEGF通路并抑制细胞增殖及侵袭作用的研究》一文中研究指出背景:糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见且最严重的并发症之一,也是成年人失明的重要原因之一,随着人们生活水平的提高,及胰岛素替代治疗的广泛应用,其发病率逐年增高。糖尿病视网膜病变分为非增殖型病变和增殖型病变两种,后者以新生血管形成为主要病理特点,易导致玻璃体出血、增殖性视网膜脱离等严重并发症,是造成严重视功能损害的主要原因。新生血管的生长受血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节,新生血管生成过程中的关键环节是内皮细胞的增殖和迁移。VEGF是一种血管内皮细胞特异性的分裂原,能诱导血管内皮细胞增殖、促进新生血管形成。在糖尿病视网膜病变患者眼内VEGF含量明显上调,且其上调程度与视网膜血管出血、渗出等病理过程相关。VEGF的过度表达为糖尿病视网膜病变发生的重要机制之一。因此,抑制VEGF的表达成为临床上糖尿病视网膜病变治疗的重要思路。微小核糖核酸(MicroRNA,miRNAs)是近年来在真核生物中发现的一类内源性的并具有调控功能的非编码RNA,miRNAs可通过序列特异性的方式与特定靶基因的3’UTR相互作用从而调节靶基因的蛋白表达。miRNAs的功能十分广泛,具有高度的保守性、时序性和组织特异性,对细胞的增殖、凋亡、分化、生长发育、胰岛素分泌、肿瘤发生、器官形成、造血过程、病毒等微生物感染防御等均具有非常重要的调节作用。研究表明,某些miRNA具有调节新生血管形成的作用,其中miR-126是目前报道的与血管内皮细胞及血管功能密切相关的一种miRNA,也是体内对维持血管内皮细胞和血管完整性至关重要的一种血管生成信号调节因子。据报道,mir-126可负性调控vegf等血管生长因子,并抑制新生血管的生成。在多种肿瘤细胞中,mir-126的表达均较正常细胞降低,因此mir-126曾被视为一种抑制细胞生长的因素,且作用于胰岛素受体底物-1(insulinreceptorsubstrate-1,irs-1)。irs-1在胰岛素的信号转导及糖尿病的发生发展中起着至关重要的作用。有报道视网膜表达大量的irs-1和pi3k,且胰岛素通过irs-1/pi3k/akt通路和ras/mapk通路可诱导小鼠主动脉平滑肌细胞内vegfmrna的转录和vegf的表达。胰岛素对血管内皮细胞vegf表达的上调可能是通过激活pi3k/akt通路实现的,且据kegg通路数据库的预测,vegf位于irs-1/pi3k/akt通路的下游。因此,在糖尿病视网膜病变中,mir-126很可能作用于irs-1且通过irs-1/pi3k/akt通路参与视网膜新生血管形成过程的调节。目的:检测mir-126及irs-1在糖尿病模型大鼠的视网膜血管内皮细胞(endothelialcells,ec)和周细胞(retinalpericytes,rp)中的表达水平,寻找并证实irs-1为mir-126的靶基因。探讨过表达或抑制mir-126对糖尿病模型鼠的ec细胞和rp细胞中irs-1及vegf、pi3k、akt等通路蛋白表达水平的影响;探讨过表达或抑制mir-126对糖尿病模型鼠的ec细胞和rp细胞增殖及侵袭能力的影响。验证mir-126对糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞中irs-1及vegf、pi3k、akt等蛋白表达水平的抑制作用以及对ec细胞和rp细胞增殖及侵袭能力的抑制作用是否是通过调控irs-1的表达而实现的。为mir-126成为一种潜在的以irs-1为靶点治疗糖尿病视网膜病变的新药提供理论依据。方法:通过real-timepcr检测mir-126及irs-1在糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞中的mrna表达水平。通过westernblot检测irs-1的蛋白表达水平。通过向糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞中转染人工合成的mir-126类似物或mir-126抑制剂来过表达mir-126或抑制内源性mir-126的表达,并通过real-timepcr检测转染后细胞中mir-126的mrna水平,以验证mir-126类似物及mir-126抑制剂调节细胞中mir-126表达水平的有效性和效率。用生物信息学检索软件targetscan分析预测mir-126的靶基因。采用双荧光素酶报告基因检测系统检测mir-126对irs-1的调控作用。先将含有预测的mir-126结合位点的irs-1基因3’utrdna片段克隆入pgl-3-promotor质粒中,构建报告基因质粒。然后将含有野生型或突变型irs-13’utr的荧光素酶报告载体质粒(pmir-report-irs-1wt和pmir-report-irs-1mut)与mir-126类似物或其对照共转染ec细胞。转染48小时后,检测各组细胞的荧光素酶活性。同时用westernblot的方法检测转染了mir-126类似物或mir-126抑制剂后,糖尿病模型鼠ec细胞及rp细胞中irs-1的蛋白表达水平。用mtt法检测转染了mir-126类似物或mir-126抑制剂后,糖尿病模型鼠ec细胞及rp细胞的增殖率。用transwell小室检测转染了mir-126类似物或mir-126抑制剂后,糖尿病模型鼠ec细胞及rp细胞的侵袭能力。通过westernblot的方法检测过表达或抑制mir-126表达时,糖尿病模型鼠ec细胞中pi3k/akt通路相关分子pi3k、akt以及vegf的蛋白表达水平。最后通过sirna干扰糖尿病模型鼠ec细胞的irs-1基因表达,并用westernblot的方法检测irs-1基因沉默状态下,抑制mir-126内源性表达后,视网膜ec细胞中pi3k、akt以及vegf等蛋白的表达水平,并分别用mtt法和transwell侵袭实验检测上述条件下糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞的增殖和侵袭能力。结果:real-timepcr的检测结果显示糖尿病模型鼠的ec细胞和rp细胞中mir-126表达水平较正常对照降低。转染mir-126类似物或mir-126抑制剂可有效地在糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞中过表达mir-126或抑制其内源性mir-126的表达水平。生物信息学预测irs-1基因为糖尿病模型ec细胞和rp细胞中mir-126的靶基因。在糖尿病模型鼠的ec细胞和rp细胞中,irs-1的mrna及蛋白表达水平均较正常对照升高。通过共转染mir-126类似物或抑制剂与含有irs-13’utr的荧光素酶报告载体并采用双荧光素酶报告基因检测,以及通过转染mir-126类似物或抑制物来过表达或抑制mir-126表达,westernblot的方法检测irs-1的蛋白表达水平,发现过表达mir-126可显着下调irs-1的表达水平,而抑制mir-126的表达可上调irs-1的表达水平。ec细胞和rp细胞分别转染了mir-126类似物或mir-126抑制剂及其对照后,用mtt的方法检测了细胞的增殖率,结果显示,过表达mir-126使ec细胞和rp细胞的增殖率较对照组降低,而抑制mir-126则使ec细胞和rp细胞的增殖率较对照组增加,提示mir-126可抑制糖尿病模型鼠ec细胞和rp细胞的增殖能力。同时,transwell侵袭实验检测转染后ec细胞和rp细胞的侵袭能力,结果显示,通过mir-126类似物转染过表达mir-126,使侵袭细胞的数量较对照组显着减少,而经miR-126抑制剂转染抑制miR-126内源性表达后,侵袭细胞的数量较对照组显着增多,提示miR-126可抑制糖尿病模型鼠EC细胞和RP细胞的侵袭能力。进而,通过Western blot的方法检测了通过转染miR-126类似物或miR-126抑制剂过表达或抑制miR-126表达后,PI3K/AKT通路相关分子PI3K、AKT以及VEGF的蛋白表达水平。结果显示,过表达miR-126可显着下调PI3K,AKT以及VEGF蛋白的表达,而抑制miR-126则可显着上调PI3K,AKT以及VEGF蛋白的表达。为了证实miR-126对PI3K、AKT及VEGF等PI3K/AKT通路蛋白表达水平的调节及对视网膜EC细胞和RP细胞增殖及侵袭能力的抑制作用是通过调控IRS-1基因而实现的,用siRNA干扰IRS-1的表达,将IRS-1-siRNA与miR-126抑制剂或其对照共转染糖尿病模型鼠EC细胞,并用Western blot的方法检测共转染后细胞的PI3K、AKT及VEGF等蛋白表达水平,用MTT法及Transwell侵袭实验分别检测共转染后细胞的增殖能力和侵袭能力。结果表明,IRS-1被干扰后,miR-126抑制剂对糖尿病模型鼠EC细胞的PI3K、AKT及VEGF等蛋白表达水平以及对视网膜EC细胞增殖能力和侵袭能力的作用均被削弱。结论:本课题发现了miR-126在糖尿病模型鼠视网膜毛细血管EC细胞和RP细胞中表达下降。miR-126在糖尿病模型鼠EC细胞和RP细胞中的靶基因为IRS-1。过表达miR-126可通过下调其靶基因IRS-1的表达水平而下调VEGF、PI3K、AKT等通路蛋白的表达水平,且抑制视网膜EC细胞和RP细胞的增殖能力及侵袭能力。通过siRNA干扰IRS-1的表达,可抵消miR-126抑制剂对上述通路蛋白表达的EC细胞增殖及侵袭能力的作用。我们的结果表明,IRS-1是miR-126的靶基因,miR-126通过调控IRS-1参与糖尿病视网膜病变的病理生理过程。本研究的结果有助于我们进一步理解糖尿病视网膜病变的发病机制,为miR-126成为治疗糖尿病视网膜病变的一种潜在的新药提供了理论依据。(本文来源于《大连医科大学》期刊2016-02-01）
崔栋,尚永刚,韩广玮,刘城城,李龙坤[7]（2016）在《前列腺毛细血管内皮细胞屏障功能研究》一文中研究指出目的分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的屏障功能。方法采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴定。免疫组化观察毛细血管内皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,采用跨膜电阻测量仪检测毛细血管内皮细胞的跨膜电阻,用酚红渗漏实验检测其通透性,以大鼠肺毛细血管内皮细胞、脑毛细血管内皮细胞作为阴性与阳性对照。结果成功分离大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,呈铺路石样生长。第Ⅷ因子相关抗原抗体的免疫荧光结果显示:分离培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞胞浆表达绿色荧光,提示分离的细胞为毛细血管内皮细胞;免疫组化结果显示紧密连接蛋白claudin-1在相邻的毛细血管内皮细胞之间表达;体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞,阳性对照组脑毛细血管内皮细胞的跨膜电阻峰值分别可以达到(142.2±3.1)、(43.3±3.5)、(248.2±6.2)Ω/cm2,并稳定保持2~3 d,叁者比较差异有统计学意义(P<0.05)。酚红渗漏实验结果显示前列腺毛细血管内皮细胞、阳性对照组脑毛细血管内皮细胞随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞酚红渗透量随跨膜电阻的改变变化趋势不明显。结论大鼠前列腺毛细血管内皮细胞与脑毛细血管内皮细胞等屏障内皮相比拥有相似的结构功能,体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2016年04期）
谢知兵,余燕青,冯德云,谢建萍,刘菲[8]（2015）在《扶正化瘀方增加毛细血管化肝窦内皮细胞窗孔结构》一文中研究指出目的:体外实验探讨扶正化瘀方对毛细血管化肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)窗孔变化的影响。方法:扶正化瘀方药物粉末以0.46 g/kg大鼠体质量的剂量配制成悬液,给予10只Sprague Dawley(SD)大鼠灌胃,采取二次重复给药方式,1 h后心脏采血提取扶正化瘀方药物血清(扶正化瘀方组,n=10),同法以叁蒸水灌胃10只SD大鼠,提取血清作为对照血清(对照组,n=10)。两组血清均以10%的浓度配成培养基,以其培养体外传代的LSECs,观察不同条件下体外传代的LSECs v WF和CD31的蛋白表达情况,并用电镜观察LSECs窗孔结构的变化。结果:1)免疫细胞化学及Western印迹结果均显示:扶正化瘀方组体外传代的LSECs表达v WF和CD31蛋白均较对照组明显下调,扶正化瘀方组v WF和CD31的灰度值分别为0.548±0.020和0.262±0.010,对照组分别为0.845±0.090和0.383±0.010,两组比较差异均有统计学意义(分别t=5.18,9.61,均P<0.05)。2)扫描电镜显示:对照组LSECs大部分窗孔处于闭塞甚至消失状态,而扶正化瘀方组LSECs表面窗孔的数目明显增多、增大。结论:扶正化瘀方可抑制肝窦内皮细胞v WF和CD31的表达,增加细胞表面的窗孔结构,具有潜在的逆转肝窦毛细血管化的作用。(本文来源于《中南大学学报(医学版)》期刊2015年07期）
潘俊,费燕,夏仲芳,谈定玉,孙家艳[9]（2015）在《血必净对毛细血管渗漏综合征患者血管内皮细胞的作用》一文中研究指出目的观察血必净注射液对毛细血管渗漏综合征(CLS)患者血管内皮细胞的保护作用及临床疗效。方法将CLS患者59例随机分为对照组和血必净组,在相同的常规治疗基础上,血必净组加用血必净注射液100ml静脉滴注。选择健康查体者30例作为正常组,两组患者均在入院时及治疗第2、5、7天检测外周血循环内皮细胞(CEC)及尿微量白蛋白(MAU)。结果 1入院时两组患者CEC和MAU均高于正常组(P<0.01)。血必净组和对照组在治疗第2、5、7天CEC、MAU含量逐渐下降(P<0.05或<0.01);2血必净组治疗后第7天急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分、多器官功能障碍综合征(MODS)发生率和28天病死率均显着低于对照组(均P<0.01);3MAU与CEC、APACHEⅡ评分、MODS发生率及28天病死率均呈正相关(均P<0.01)。结论血必净注射液对CLS患者血管内皮细胞有保护作用,有良好的临床疗效。MAU是早期反映CLS患者血管内皮损伤和病情严重程度的良好指标。(本文来源于《临床荟萃》期刊2015年06期）
李悦,张庆芳,安惠霞,王婧一[10]（2015）在《肾小管周围毛细血管内皮细胞与肾间质纤维化的研究进展》一文中研究指出肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的共同途径和主要病理基础,以往针对肾间质纤维化的研究大多集中于一些细胞外基质的代谢失衡、肾小管上皮细胞凋亡、炎症、氧化应激、细胞因子紊乱等方面。而近几年,随着对肾小管周围毛细血管内皮细胞的不断深入研究,发现其分泌的生物活性物质:一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ等在肾间质纤维化的发生发展中起着重要的作用,并通过不同途径诱导肾间质纤维化的发生与发展。(本文来源于《临床荟萃》期刊2015年01期）
毛细血管内皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察西医联合真武汤加减对毛细血管渗漏综合征(CLS)患者血管内皮细胞的保护作用。方法:选取46例CLS证属肾阳衰微患者,按随机数字表法分成观察组和对照组各23例。对照组行西医治疗,观察组在对照组的治疗基础上加用真武汤加减治疗。对比两组治疗前、后的外周血循环内皮细胞(CEC)、尿微量蛋白(U-MALB)、急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)及多器官功能衰竭综合征(MODS)发生率。结果:两组治疗前CEC、U-MALB及APACHE Ⅱ得分均无统计学差异(P>0.05);观察组治疗后第4天、第7天及第14天CEC、UMALB及治疗结束后APACHE Ⅱ得分均明显低于对照组(P<0.05);观察组MODS发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论 :西医联合真武汤加减对CLS患者血管内皮细胞具有较好的保护作用,可有效的改善患者预后,值得临床推广。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毛细血管内皮细胞论文参考文献
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[10].李悦,张庆芳,安惠霞,王婧一.肾小管周围毛细血管内皮细胞与肾间质纤维化的研究进展[J].临床荟萃.2015
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