Cbl- b通过HOXA10调控miR-99a和miR-125b参与CD4+T细胞活化的机制研究

论文摘要

目的:探讨卡西塔斯B细胞淋巴瘤谱系b（Cbl-b）调控CD4+T细胞活化的机制。方法:用CCK8试剂盒检测过表达微小RNA（miR）-99a和miR-125b的小鼠淋巴瘤细胞（EL4）细胞增殖活性。取抗CD3和抗CD28抗体活化野生型（WT）和Cbl-b缺失型(Cbl-b-/-)CD4+T细胞,激光共聚焦观察WT和Cbl-b-/-CD4+T细胞中同源异型盒蛋白A10（HOXA10）的入核情况。用双荧光素酶报告系统检测HOXA10对miR-99a和miR-125b的表达调控作用。用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告系统检测miR-99a和miR-125b对靶基因的表达水平影响。结果:在Cbl-b-/-CD4+T细胞中,HOXA10在抗CD3抗体单独刺激时即可入核。HOXA10入核后促进miR-99a和miR-125b表达,而过表达miR-99a和miR-125b则抑制蛋白激酶B2和3（AKT2、AKT3）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基A和D（PIK3CA、PIK3CD）的表达。结论:Cbl-b通过阻止HOXA10核转位来抑制miR-99a和miR-125b表达,导致AKT2、AKT3、PIK3CA、PIK3CD（AKT/PI3K）表达增加,最终抑制CD4+T细胞活化。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 细胞来源
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 双荧光素酶报告系统检测基因表达
•     1.3.2 免疫磁珠分选细胞
•     1.3.3 CD4+T细胞活化
•     1.3.4 蛋白质印迹法检测蛋白表达
•     1.3.5 慢病毒制备和感染细胞分组
•     1.3.6 CCK8细胞增殖能力检测
•   1.4 统计学处理
• 2 结 果
•   2.1 miR- 99a和miR- 125b对CD4+ T细胞增殖的影响
•   2.2 HOXA10对miR- 99a和miR- 125b的调节作用
•   2.3 miR- 99a和miR- 125b靶分子鉴定
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 唐玉旭,杨燚,张进平

关键词: 细胞,卡西塔斯细胞淋巴瘤谱系,同源异型盒蛋白,微小

来源: 东南大学学报(医学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 肿瘤学

单位: 苏州大学生物医学研究院张进平教授课题组

基金: 国家自然科学基金面上项目(31270939,81471526,81771667),国家自然科学基金青年项目(31800736),组织器官区域免疫特性与疾病重大研究计划培育项目(91442110),江苏省自然科学基金青年项目(BK20170349)

分类号: R733.1

页码: 954-959

总页数: 6

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