导读:本文包含了平滑肌细胞肌动蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:平滑肌,蛋白,细胞,生长因子,基质,羟色胺,纤维。
平滑肌细胞肌动蛋白论文文献综述
孙林清,周倩文,王发选[1]（2019）在《转化生长因子β1对肺成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白表达的影响》一文中研究指出目的观察不同浓度转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后对细胞内平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响。方法以浓度为0、2.5、5.0和10.0ng·mL~(-1)的TGF-β1刺激后收集细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)检测MRC-5细胞内α-SMA基因的相对表达水平,Western blot法测定MRC-5细胞内α-SMA蛋白的相对表达水平,采用Spearman秩相关分析TGF-β1剂量与MRC-5细胞中α-SMA基因和蛋白的相对表达量之间的相关性。结果随着TGF-β1剂量的增加,各组MRC-5细胞中α-SMA基因表达水平增高,5.0ng·mL~(-1)和10.0ng·mL~(-1)剂量组高于0ng·mL~(-1)组和2.5ng·mL~(-1)组(P均<0.05);10.0ng·mL~(-1)剂量组高于5.0ng·mL~(-1)(P=0.004)。5.0ng·mL~(-1)组和10.0ng·mL~(-1)组MRC-5细胞中的α-SMA蛋白相对表达量高于0ng·mL~(-1)组(P均<0.05)。TGF-β1剂量与α-SMA基因和蛋白间均呈正相关关系(r基因=0.972,r蛋白=0.878;P基因=0. 000,P蛋白=0.042)。结论 TGF-β1能影响肺成纤维细胞中α-SMA的表达情况。(本文来源于《宁夏医科大学学报》期刊2019年05期）
刘升阳,叶犇[2]（2018）在《兔声带瘢痕的建立及其细胞外基质中转化生长因子-β1和α-平滑肌肌动蛋白表达的研究》一文中研究指出目的:分析声带损伤后各时间段内声带固有层的形态、病理学及细胞外基质内相关影响瘢痕形成因子的变化情况。方法:4~6个月SPF级新西兰兔共12只,雌雄不限,平均体重约2.5kg。随机分组:12只新西兰兔分为A、B、C叁组,A组新西兰兔为正常对照组(2只),B组为声带急性损伤6h组(5只),C组为声带损伤3个月组(5只),A组不做处理,B、C组行内镜下双侧声带前中部组织(未达肌层)钳夹术(术后均健康存活)。在术后6h及术后3月后,处死取材。通过伊红染色、用免疫组化染色及Real-time-PCR方法,监测其中固有层中TGF-β1、α-SMA的mRNA表达及分布变化规律,与正常声带比较。结果:(1)正常声带组与其余各损伤组之间TGF-β1和α-SMA阳性表达率及mRNA表达有显着的统计学意义。两基因中(P<0.01)。(2)急性损伤组与损伤3月组α-SMA、TGF-β1阳性表达率mRNA表达均有明显变化,差异有统计学意义(P<0.01)。急性损伤组与损伤3月组α-SMA、TGF-β1阳性表达率均有明显变化,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)统计所有组α-SMA和TGF-β1 mRNA相对含量,经Spearman′s rho检验示秩和相关系数为0.981(P<0.01),具有统计学意义。结论:α-SMA与TGF-β1在损伤后声带高表达,表明参与了声带瘢痕的形成,而且在瘢痕形成的不同时期发挥着不同的作用,可以作为声带瘢痕修复预后的重要指标~[1]。(本文来源于《影像研究与医学应用》期刊2018年06期）
高晓平[3]（2018）在《孟鲁司特钠治疗支气管哮喘的效果及对气道上皮细胞白介素-25和α-平滑肌肌动蛋白的影响》一文中研究指出目的评价孟鲁司特钠治疗支气管哮喘(BA)的疗效及对气道上皮细胞白介素-25(IL-25)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。方法将我院2014年4月至2017年4月收治的BA患者114例随机分为对照组和观察组,各57例。两组均予以常规治疗,观察组加服孟鲁司特钠。比较两组的治疗效果。结果治疗后,两组的FEV_1、FEV_1/FVC、PEF水平,以及气道上皮细胞IL-25和α-SMA mRNA水平均显着优于治疗前,且观察组优于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组均未出现不良反应。观察组治疗愈显率明显高于对照组(P<0.05)。结论孟鲁司特钠可有效改善BA患者临床症状,疗效明确,安全性高。(本文来源于《临床医学研究与实践》期刊2018年06期）
宋坤岭,覃远汉,蒋玲,龚玲,江星伯[4]（2017）在《系膜细胞缺氧损伤后抗增殖蛋白、转化生长因子-β_1、α-平滑肌肌动蛋白表达变化》一文中研究指出目的观察系膜细胞(MCs)缺氧损伤后抗增殖蛋白(PHB)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。方法将体外培养的大鼠MCs随机分为模型组和正常组。正常组在常规条件下培养,不做任何处理;模型组置于缺氧小室中(充缺氧气体950 m L/L N2和50 m L/L CO2)密封48 h建立MCs缺氧损伤模型。RT-PCR法检测两组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA,Western blotting法检测PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)蛋白。结果模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA相对表达量分别为0.56±0.04、0.51±0.06、1.45±0.11、7.39±1.72,正常组分别为1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白相对表达量分别为0.47±0.04、0.25±0.02、1.12±0.06、1.35±0.12、0.89±0.07,正常组分别为0.91±0.04、0.56±0.07、0.75±0.05、0.79±0.09、0.52±0.03,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.924、-0.871、-0.840,P均<0.05),PHB2蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.928、-0.901、-0.821,P均<0.05)。结论系膜细胞缺氧损伤后PHB表达降低,TGF-β_1、α-SMA表达升高,PHB1表达与TGF-β_1、α-SMA表达均呈负相关。(本文来源于《山东医药》期刊2017年47期）
刘伟,孔海霞,陈娟娟,魏茂提,王世鑫[5]（2017）在《补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞合成α-平滑肌肌动蛋白的影响》一文中研究指出目的观察补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)合成α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。方法将低中高3个不同质量浓度(15.6,62.5,250 ng·mL-1)人工合成的补体片段C3f(实验组)加入培养基中,以刺激MRC-5细胞,以细胞免疫组化法检测α-SMA在MRC-5细胞质中的表达情况。同时,设立对照组:10 ng·mL~(-1)转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和空白组(浓度为0的C3f),进行对比研究。结果中剂量实验组与对照组(TGF-β_1)刺激MRC-5细胞合成α-SMA量分别为7.46±0.66,7.54±0.51,差异无统计学意义(P>0.05),说明2组的量相当,表明C3f具有刺激MRC-5合成α-SMA的功能。低中高3个不同质量浓度的细胞内α-SMA表达量分别为4.95±0.78,7.46±0.66和9.23±0.21,显示C3f的浓度与α-SMA的表达量呈正相关(P<0.05),表明C3f具有促进MRC-5表达α-SMA的功能。结论补体片段C3f能够刺激MRC-5细胞内α-SMA的合成增加。(本文来源于《中国临床药理学杂志》期刊2017年22期）
索艳,谷优优,王肃[6]（2017）在《α-平滑肌肌动蛋白对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法培养人肾小管上皮细胞,分为低糖组、高糖组和干扰组。干扰组将α-SMA siRNA转染至肾小管上皮细胞中,高糖组、低糖组细胞均不进行α-SMA转染。转染完成后,高糖组、干扰组细胞用高糖DMEM细胞培养液培养,低糖组细胞用低糖DMEM细胞培养液培养,均培养48 h。采用MTT法检测细胞增殖情况。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率。采用Western blotting法检测细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达,采用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中ROS水平,采用ELISA法检测上清液TNF-α、IL-8水平。结果高糖组、干扰组细胞增殖能力均低于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞增殖能力高于高糖组(P<0.01)。高糖组、干扰组细胞凋亡率均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞凋亡率低于高糖组(P<0.01)。高糖组、干扰组细胞Caspase-3、Bax、TLR4、NF-κB蛋白表达均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞Caspase-3、Bax、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于高糖组(P均<0.01)。高糖组、干扰组细胞中ROS水平及上清液TNF-α、IL-8水平均高于低糖组(P均<0.01),干扰组细胞中ROS水平及上清液TNF-α、IL-8水平均低于高糖组(P均<0.01)。结论干扰α-SMA后能够逆转高糖对肾小管上皮细胞的增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与降低细胞内ROS水平及抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。(本文来源于《山东医药》期刊2017年30期）
韩新源,陈春燕,范粉灵,解翠,李秀红[7]（2017）在《5-羟色胺对大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响》一文中研究指出目的探讨5-羟色胺(5-HT)对大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法分离并培养大鼠肺动脉外膜成纤维细胞。将体外培养的大鼠肺动脉外膜成纤维细胞分为1~6组,2~6组分别加入10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol/L 5-HT,1组加等量DMEM培养基,继续培养24 h。采用MTT法观察各组细胞增殖情况(OD490值),采用Transwell小室实验观察各组细胞迁移能力(穿膜细胞数),采用Western blotting法检测各组细胞α-SMA表达。结果 1~6组细胞OD490值分别为0.72±0.04、0.79±0.04、0.84±0.05、0.87±0.04、0.93±0.03、0.94±0.03,穿膜细胞数分别为(9.2±1.6)、(17.2±1.7)、(26.0±2.9)、(34.4±2.5)、(63.6±6.0)、(50.4±6.0)个。OD490值、穿膜细胞数:5组>4组>3组>2组>1组,P均<0.05;5、6组OD490值、穿膜细胞数比较,P均>0.05。1~6组细胞α-SMA相对表达量分别为1.01±0.21、1.18±0.35、1.91±0.28、2.37±0.42、2.78±0.33、2.13±0.40。细胞α-SMA相对表达量:5组>4组>3组>2组>1组,P均<0.05;6组低于5组,P<0.05。结论 10-9~10-6mol/L 5-HT可呈剂量依赖性促进大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移和α-SMA表达。(本文来源于《山东医药》期刊2017年24期）
孙艳[8]（2017）在《NRG-1调节α-肌动蛋白表达及平滑肌细胞收缩功能的分子机制》一文中研究指出在成年的血管中,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的主要功能是通过收缩来调节血管的张力和直径,进而调节由血压和血液的分布。VSMCs存在增殖型和收缩型两种表型。收缩型VSMCs可以表达多种平滑肌分化标志基因,例如α-肌动蛋白(smooth muscleα-actin,α-SMA)、肌球蛋白重链(SM-myosin heavy chain,MHC)、平滑肌蛋白22-α(smooth muscle protein 22-α,SM22α)。血清反应因子(serum response factor,SRF)通过募集myocardin、MRTF-A/B等辅助因子来调控平滑肌标志基因的的表达。已经证明,转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)是调节平滑肌标志基因表达的重要细胞因子。神经调节蛋白1(neuregulin-1,NRG-1)是含有表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)样结构域的神经调节蛋白家族成员之一,由NRG基因通过选择性地拼接所产生。NRG-1蛋白含有EGF样的胞外结构域和高度保守的胞内结构域(intracellular domain,NRG-1-ICD)。NRG-1被基质金属蛋白酶水解后释放出具有生物活性的可溶性EGF片段,而NRG-1-ICD进入细胞核,通过与一些转录因子相互作用而调节基因表达。此外,NRG-1-ICD含有的LIM结构域可以与和胞浆蛋白相互作用。许多研究表明,NRG-1在心血管生理及病理过程中都发挥重要作用。首先,NRG-1在血管内皮细胞中表达,而它的受体位于毗邻的平滑肌细胞上。其次,在VSMCs中,NRG-1可以抑制由血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)引起的细胞增殖和迁移。再次,NRG-1可以调节心肌细胞功能和参与对血流动力学稳态的调节。但是,TGF-β1诱导的VSMC分化是否需要NRG-1-ICD参与以及NRG-1-ICD如何调节VSMCs的功能目前尚无报道。环状RNA(circular RNA,circ RNA)是最近被发现的对真核基因表达具有调节功能的非编码RNA。circ RNA可以作为微小RNA(micro RNA,mi RNA)的“海绵”竞争性结合胞内mi RNA,阻断mi RNA对其靶基因的抑制作用,从而上调mi RNA靶基因的表达。除此以外,circ RNA也可通过与RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)结合,或者与其他RNA通过碱基互补结合而对特定基因发挥调节作用。已经证明,在血管组织中,circ RNA c ZNF292可以通过调节E2FI、NF-k B、Sp1、Ap1等转录因子的活性而调节血管的生成。在人的动脉粥样硬化斑块中,circ ANRIL在VSMCs和巨噬细胞中都有表达,其通过调节核糖体的合成而发挥抗动脉粥样硬化作用。然而在VSMCs中是否存在circ RNAs及circ RNAs对VSMCs的调节功能尚不清楚。因此,本研究以TGF-β1作为VSMC分化的诱导因素,探索NRG-1-ICD和circ RNA对VSMC功能的调节及作用机制。第一部分TGF-β1诱导合成的NRG-1-ICD参与VSMC细胞骨架的组构目的:探讨NRG-1是否在VSMC中进行表达以及NRG-1-ICD在VSMC中的作用。方法:1免疫荧光检查NRG-1在小鼠血管组织中的表达,Western blot和RT-PCR检测NRG-1在不同种属VSMC中的表达。2在VSMC中过表达NRG-1后,鬼笔环肽染色观察细胞骨架及肌丝的变化。3细胞形态学观察NRG-1过表达对乙酰胆碱诱导的细胞收缩的影响。4细胞免疫荧光检测NRG-1-ICD和α-SMA的共定位。5免疫共沉淀检测NRG-1、NRG-1-ICD与α-SMA的相互作用。6 GST pull-down在体外验证NRG-1/NRG-1-ICD与α-SMA的相互作用。7 PLA实验在体内观察NRG-1与α-SMA的作用。结果:1在人主动脉血管平滑肌细胞(human artery smooth muscle cell,HASMC)中,TGF-β1上调NRG-1的表达为了确定NRG-1是否在VSMC中表达,我们用NRG-1抗体对野生型C57BL/6小鼠的主动脉血管进行免疫荧光染色。结果显示,NRG-1与平滑肌细胞的标志蛋白α-SMA共定位。Western blot和RT-PCR结果显示,NRG-1的m RNA和蛋白在大鼠VSMC,HASMC以及人血管内皮细胞中都有表达。已知TGF-β1和PDGF-BB调节VSMC标志基因的表达,但它们是否影响NRG-1的表达目前尚不清楚。分别用10 ng/m L的PDGF-BB和2ng/m L的TGF-β1刺激细胞不同时间(0、6、12、24 h)。提取总RNA和总蛋白进行Real-time PCR和Western blot分析。结果显示,随着PDGF-BB刺激时间的延长,NRG-1的表达逐渐降低。相反,随着TGF-β1刺激时间的延长,NRG-1的表达逐渐增加。2 NRG-1-ICD参与细胞骨架的组构为了研究NRG-1在VSMC中的作用,用携带NRG-1基因的腺病毒感染细胞24 h后,观察细胞骨架的变化。鬼笔环肽染色结果显示,过表达NRG-1可以促进肌丝成束,使应力纤维增粗。因为NRG-1含有EGF样的胞外结构域(ECD)和胞内结构域(ICD),我们进一步检查NRG-1的哪个结构域对细胞骨架发挥调节作用。结果发现,用HRG-β1(可溶性活性成分)处理细胞时,细胞骨架不发生明显的变化。然而,过表达NRG-1-ICD后,细胞骨架出现束状排列。这些结果表明,NRG-1对细胞骨架的组构主要是通过NRG-1-ICD实现的。我们还发现,过表达NRG-1可以促进乙酰胆碱诱导的细胞收缩3 TGF-β1促进NRG-1/NRG-1-ICD与α-SMA的相互作用为了进一步检查NRG-1-ICD参与细胞骨架的组构是否和其与α-SMA相互作用有关,我们用检测蛋白质相互作用的实验检查二者的结合。细胞免疫荧光结果显示,在未经TGF-β1处理的HASMC中,NRG-1-ICD和α-SMA表达水平较低。TGF-β1刺激12 h后,二者的表达明显增加,而且二者在细胞浆中共定位。从被TGF-β1刺激后的HASMC中提取蛋白质,经抗α-SMA抗体免疫沉淀后,用抗NRG-1和抗NRG-1-ICD的抗体进行Western blot分析。结果显示,在基础水平时,NRG-1/NRG-1-ICD均与α-SMA结合,TGF-β1刺激12 h后,二者之间的结合明显增加。GST pull-down实验进一步证实,在TGF-β1可以直接增强NRG-1/NRG-1-ICD与α-SMA的相互作用,与免疫共沉淀的结果相一致。PLA实验结果也显示,NRG-1与α-SMA存在相互作用。这些结果表明,NRG-1-ICD通过与α-SMA的相互作用而调节细胞骨架的组构。小结:综上所述,TGF-β1可在转录和翻译水平上上调NRG-1表达;NRG-1的ICD结构域通过与α-SMA相互作用调节细胞骨架组构,参与细胞收缩;TGF-β1促进NRG-1/NRG-1-ICD与α-SMA的相互作用。第二部分circ ACTA2介导NRG-1-ICD对α-SMA表达的调节目的:揭示NRG-1-ICD调节α-SMA表达的作用机制。方法:1细胞免疫荧光检测NRG-1-ICD的细胞定位。2 Ch IP法检测NRG-1-ICD在α-SMA基因第一内含子上的富集。3荧光素酶报告基因分析鉴定NRG-1-ICD在α-SMA基因第一内含子上的结合位点。4分别在HASMC中过表达或敲低NRG-1-ICD,Western blot检测α-SMA的表达变化。5 q RT-PCR检测过表达NRG-1-ICD后α-SMA m RNA表达变化。6 RT-PCR和RNase R处理后,q RT-PCR检测线性和环状RNA。7 CRISPRi封闭NRG-1-ICD结合位点,q RT-PCR检测circ ACTA2和α-SMA m RNA的变化。8过表达NRG-1-ICD后再给与TGF-β1刺激,q RT-PCR检测circ ACTA2的表达。9 Western blot检测过表达或敲低circ ACTA2对α-SMA表达的影响。结果:1在HASMC中,NRG-1-ICD上调α-SMA的表达细胞免疫荧光染色显示,在静止的HASMC中,NRG-1-ICD在胞浆和胞核均有分布,但以胞浆居多。TGF-β1刺激12 h后,NRG-1-ICD在胞浆和胞核中都增多,胞核中增加更为明显。为了确定NRG-1-ICD的作用位点,我们进行了Chromatin Immunoprecipitation Sequencing(Ch IP-Seq)分析。在TGF-β1刺激细胞12 h后,用NRG-1-ICD抗体沉淀染色质片段。高通量测序与数据分析的结果显示,TGF-β1刺激后,α-SMA基因第一内含子(+5642 bp/+5787 bp区域)的DNA片段被NRG-1-ICD抗体所沉淀。我们进一步用Ch IP-q PCR实验对Ch IP-Seq结果进行验证,发现TGF-β1刺激后,NRG-1-ICD与α-SMA基因第一内含子+5642 bp/+5787bp的相互作用增强。构建NRG-1-ICD-binding site和NRG-1-ICD-binding site mut荧光素酶报告基因载体,与NRG-1-ICD表达质粒共转染293A细胞后,观察NRG-1-ICD过表达对报告基因表达的影响。结果显示,过表达NRG-1-ICD后,野生型NRG-1-ICD-binding site指导报告基因表达的活性明显升高,但是突变位点对荧光素酶表达没有明显影响。这些结果说明,NRG-1-ICD通过与α-SMA基因第一内含子区+5642 bp/+5787 bp的相互作用上调α-SMA表达。为了进一步明确NRG-1-ICD在TGF-β1促进α-SMA表达中的作用,我们用携带NRG-1-ICD基因的腺病毒感染细胞后,再给予TGF-β1刺激24 h,观察α-SMA的表达。Western blot结果显示,TGF-β1可以诱导α-SMA的表达,NRG-1-ICD过表达可进一步增加α-SMA的表达水平。利用靶向NRG-1-ICD的si RNA转染HASMC 24 h,检测TGF-β1对α-SMA的影响。结果显示,敲低NRG-1-ICD后,α-SMA表达水平明显降低,即使再给予TGF-β1处理仍不能恢复α-SMA的表达水平。此外,我们还发现,过表达NRG-1-ICD不影响α-SMA m RNA水平。2 NRG-1-ICD诱导circ ACTA2的形成上述实验结果表明,NRG-1可以上调α-SMA的蛋白水平,但不影响其m RNA。由此,我们推测,NRG-1可能在转录后水平上通过mi RNA或者是circ RNA对α-SMA表达起调控作用。为了验证这个假说,我们设计针对circ ACTA2反向连接处的引物,以互补DNA(c DNA)和基因组DNA(g DNA)为模板进行RT-PCR。结果显示,以c DNA为模板可以扩增出circ ACTA2连接处的DNA片段,而以g DNA为模板却不能扩增出此片段。由于circ RNA的环状结构对核糖核酸酶R(RNase R)不敏感,线性RNA则不然,所以利用RNase R处理可以区别circ RNA与线性RNA。结果发现,RNase R处理使线性ACTA2(α-SMA m RNA)降低90%,而circ ACTA2只降低40%。我们用针对全长circ ACTA2的引物进行RT-PCR,结果显示,全长circ ACTA2的长度约为730 bp。这些结果说明,HASMC中存在circ ACTA2。为了研究NRG-1-ICD是否可以影响circ ACTA2的形成,我们用CRISPR interference(CRISPRi)封闭技术,即用d Cas9+g RNA阻断RNA聚合酶II与NRG-1-ICD结合位点结合后,观察circ ACTA2表达变化。合成一段与NRG-1-ICD结合位点互补的单链g RNA,它通过介导Cas9酶与α-SMA基因第一内含子结合而阻断转录的起始及延伸。q RT-PCR结果显示,封闭NRG-1-ICD结合位点后circ ACTA2表达降低,而α-SMA m RNA没有变化。并且我们还发现,单独给予TGF-β1刺激或者过表达NRG-1-ICD均可以使circ ACTA2的表达增高,同时给予二者时,会进一步增加circ ACTA2的表达水平。3 circ ACTA2介导TGF-β1对α-SMA表达的诱导作用我们设计两个si RNA,一个特异性敲低circ ACTA2(si-circ ACTA2),另一个是同时敲低环状和线状ACTA2(si-both)。结果发现,单独敲低circ ACTA2不影响α-SMA m RNA水平;同时敲低环状和线状RNA时,会使circ ACTA2和α-SMA m RNA的水平均下降。Western blot结果显示,过表达或者敲低circ ACTA2分别增加或降低α-SMA蛋白水平。为了进一步验证circ ACTA2是否介导TGF-β1对α-SMA蛋白表达的影响,我们过表达circ ACTA2后再给予TGF-β1处理,结果发现,过表达circ ACTA2可以进一步增强TGF-β1对α-SMA表达的上调作用。反之,敲低circ ACTA2则降低TGF-β1对α-SMA表达的诱导。小结:综上所述,circ ACTA2介导TGF-β1和NRG-1-ICD对α-SMA表达的调节。第叁部分circ ACTA2通过吸附mi R-548f-5p上调α-SMA表达及调节HASMC功能目的:揭示circ ACTA2调节α-SMA表达及VSMC功能的分子机制。方法:1构建带有荧光素酶活性的野生型pmir GLO-circ ACTA2和突变型pmir GLO-circ ACTA2 mut质粒,转染293A细胞后进行双荧光素报告基因分析。2生物素标记circ ACTA2和mi R-548f-5p,经oligo-pull down和q RT-PCR检测被富集的mi R-548f-5p和circ ACTA2。3原位杂交检查mi R-548f-5p和circ ACTA2在细胞中的共定位。4合成α-SMA 3’UTR及其突变体DNA片段,克隆进pmir-GLO载体质粒,转染293A细胞后进行报告基因分析。5过表达或敲低mi R-548f-5p,Western blot观察α-SMA蛋白的表达水平。6分别过表达NRG-1-ICD敲低circ ACTA2或mi R-548f-5p后,western blot检测α-SMA蛋白的表达。7观察NRG-1-ICD、circ ACTA2、mi R-548f-5p对乙酰胆碱诱导的细胞收缩的影响。结果:1 circ ACTA2作为分子“海绵”吸附mi R-548f-5p用生物信息学技术预测circ ACTA2上micro RNA的结合位点,发现circ ACTA2上存在1个mi R-548f-5p的潜在结合位点,暗示circ ACTA2可能与mi R-548f-5p相互作用。我们构建带有荧光素酶基因的野生型pmir GLO-circ ACTA2和突变型pmir GLO-circ ACTA2 mut质粒,将其与mi R-548f-5p模拟物共转染293A细胞。报告基因分析结果显示,野生型pmir GLO-circ ACTA2指导的荧光素酶活性能被mi R-548f-5p模拟物所抑制,但mi R-548f-5p模拟物对突变型pmir GLO-circ ACTA2 mut指导的荧光素酶活性没有影响。用生物素标记的circ ACTA2对RNA提取物进行oligo-pull down,q RT-PCR分析其富集的mi RNAs。结果显示,与对照探针组相比,circ ACTA2探针组的mi R-548f-5p富集量明显增加。反之,用标记生物素的mi R-548f-5p作为探针,经oligo-pull down和q RT-PCR分析被mi R-548f-5p富集的circ RNAs。结果表明,与对照探针组相比,mi R-548f-5p探针组的circ ACTA2富集量也有所增加。原位杂交实验也证实circ ACTA2在细胞内与mi R-548f-5p共定位。此外,TGF-β1刺激和NRG-1-ICD过表达都可以使mi R-548f-5p的表达水平降低,二者联合时降低更为显着。这些结果表明,circ ACTA2可以作为分子“海绵”吸附mi R-548f-5p。2在VSMC中,mi R-548f-5p通过靶向α-SMA 3’UTR而抑制其蛋白表达我们发现,α-SMA 3’非编码区(UTR序列)含有mi R-548f-5p的结合位点。将含有mi R-548f-5p结合位点的α-SMA及其突变体3’UTR克隆到携带荧光素酶基因的pmir-GLO质粒上,转染293A细胞后进行荧光素酶活性分析。结果显示,含有野生型mi R-548f-5p结合位点的报告基因的表达活性能被mi R-548f-5p模拟物所抑制,而其突变体不能被模拟物所抑制。分别用mi R-548f-5p的模拟物和抑制物转染HASMC,q RT-PCR证实mi R-548f-5p在细胞中得到过表达和敲低。Western blot结果显示,mi R-548f-5p mimic能使α-SMA蛋白表达水平显着降低,而anti-mi R-548f-5p对α-SMA蛋白表达影响不大。以上结果表明,在HASMC中,mi R-548f-5p通过直接与α-SMA 3'UTR结合来抑制其蛋白的表达。3 NRG-1/circ ACTA2/mi R-548f-5p形成调节轴共同调节VSMC的收缩功能在HASMC中,用si RNA靶向敲低circ ACTA2后再用腺病毒过表达NRG-1-ICD,检查其对α-SMA表达的影响。结果表明,敲低circ ACTA2能显着抑制NRG-1-ICD过表达对α-SMA表达的上调。相反,过表达circ ACTA2则进一步增加NRG-1-ICD过表达对α-SMA表达的上调。这些结果表明,circ ACTA2介导NRG-1-ICD对α-SMA表达的上调作用。共表达circ ACTA2和NRG-1-ICD可以显着增加乙酰胆碱诱导的细胞收缩。我们进一步用mi R-548f-5p的抑制物和靶向circ ACTA2的si RNA转染细胞,检查其对α-SMA表达的影响。结果显示,用anti-mi R-548f-5p拮抗mi R-548f-5p的作用后,α-SMA蛋白表达水平明显增加。然而,敲低circ ACTA2则明显抑制α-SMA的表达。相反,circ ACTA2过表达增加α-SMA的表达,并且过表达circ ACTA2和抑制mi R-548f-5p可进一步增加α-SMA的表达水平。这些结果表明,circ ACTA2可以作为分子“海绵”吸附mi R-548f-5p,解除其对靶基因α-SMA的抑制。我们还发现,过表达circ ACTA2和抑制mi R-548f-5p可以增加乙酰胆碱诱导的细胞收缩。这些结果提示,NRG-1、circ ACTA2和mi R-548f-5p形成调节轴共同对α-SMA表达和VSMC功能发挥调节作用。小结:circ ACTA2作为分子“海绵”吸附mi R-548f-5p,解除其对靶基因α-SMA的抑制作用;NRG-1、circ ACTA2和mi R-548f-5p形成调节轴共同调节α-SMA表达及VSMC的收缩功能。结论:1 TGF-β1可在转录和翻译水平上上调NRG-1表达,NRG-1的ICD结构域通过与α-SMA相互作用调节细胞骨架组构,参与细胞收缩。2 circ-ACTA2介导TGF-β1和NRG-1-ICD对α-SMA表达的调节。3 circ ACTA2作为分子“海绵”吸附mi R-548f-5p,解除其对靶基因α-SMA的抑制作用。4 NRG-1、circ ACTA2和mi R-548f-5p形成调节轴共同调节α-SMA表达及VSMC的收缩功能。(本文来源于《河北医科大学》期刊2017-04-01）
郭业兵,张廷国[9]（2017）在《宫颈微小浸润癌上皮及间质细胞基质金属蛋白酶-2、α-平滑肌肌动蛋白的表达及意义》一文中研究指出目的观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在宫颈高级别上皮内瘤变(CINⅢ)、宫颈微小浸润癌(MIC)上皮及间质细胞的表达情况,探讨二者对MIC鉴别诊断的临床意义。方法选取正常宫颈组织20例(对照组)、CINⅢ50例、MIC 30例的石蜡标本,采用免疫组化通用二步法检测叁种组织上皮及间质细胞中的MMP-2、α-SMA表达,并分析MMP-2与α-SMA表达的关系。结果对照组、CINⅢ组、MIC组上皮、间质细胞MMP-2表达差异有统计学意义(P均<0.01)。叁组上皮细胞均无α-SMA表达,叁组间质细胞α-SMA表达差异有统计学意义(P<0.01)。叁组上皮及间质细胞中MMP-2与α-SMA表达呈正相关(P均<0.05)。结论联合检测宫颈上皮、间质细胞MMP-2、α-SMA表达能有效鉴别CINⅢ与MIC,对指导MIC的临床治疗有重要意义。(本文来源于《山东医药》期刊2017年01期）
张兰兰,刘琼,于健,唐晓娟,徐静[10]（2016）在《转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究》一文中研究指出目的本研究探讨转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。方法原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20 ng·m L-1TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12 h、24 h、48 h、72 h,Real-time PCR检测α-SMA mRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。(本文来源于《眼科新进展》期刊2016年11期）
平滑肌细胞肌动蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:分析声带损伤后各时间段内声带固有层的形态、病理学及细胞外基质内相关影响瘢痕形成因子的变化情况。方法:4~6个月SPF级新西兰兔共12只,雌雄不限,平均体重约2.5kg。随机分组:12只新西兰兔分为A、B、C叁组,A组新西兰兔为正常对照组(2只),B组为声带急性损伤6h组(5只),C组为声带损伤3个月组(5只),A组不做处理,B、C组行内镜下双侧声带前中部组织(未达肌层)钳夹术(术后均健康存活)。在术后6h及术后3月后,处死取材。通过伊红染色、用免疫组化染色及Real-time-PCR方法,监测其中固有层中TGF-β1、α-SMA的mRNA表达及分布变化规律,与正常声带比较。结果:(1)正常声带组与其余各损伤组之间TGF-β1和α-SMA阳性表达率及mRNA表达有显着的统计学意义。两基因中(P<0.01)。(2)急性损伤组与损伤3月组α-SMA、TGF-β1阳性表达率mRNA表达均有明显变化,差异有统计学意义(P<0.01)。急性损伤组与损伤3月组α-SMA、TGF-β1阳性表达率均有明显变化,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)统计所有组α-SMA和TGF-β1 mRNA相对含量,经Spearman′s rho检验示秩和相关系数为0.981(P<0.01),具有统计学意义。结论:α-SMA与TGF-β1在损伤后声带高表达,表明参与了声带瘢痕的形成,而且在瘢痕形成的不同时期发挥着不同的作用,可以作为声带瘢痕修复预后的重要指标~[1]。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
平滑肌细胞肌动蛋白论文参考文献
[1].孙林清,周倩文,王发选.转化生长因子β1对肺成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白表达的影响[J].宁夏医科大学学报.2019
[2].刘升阳,叶犇.兔声带瘢痕的建立及其细胞外基质中转化生长因子-β1和α-平滑肌肌动蛋白表达的研究[J].影像研究与医学应用.2018
[3].高晓平.孟鲁司特钠治疗支气管哮喘的效果及对气道上皮细胞白介素-25和α-平滑肌肌动蛋白的影响[J].临床医学研究与实践.2018
[4].宋坤岭,覃远汉,蒋玲,龚玲,江星伯.系膜细胞缺氧损伤后抗增殖蛋白、转化生长因子-β_1、α-平滑肌肌动蛋白表达变化[J].山东医药.2017
[5].刘伟,孔海霞,陈娟娟,魏茂提,王世鑫.补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞合成α-平滑肌肌动蛋白的影响[J].中国临床药理学杂志.2017
[6].索艳,谷优优,王肃.α-平滑肌肌动蛋白对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响[J].山东医药.2017
[7].韩新源,陈春燕,范粉灵,解翠,李秀红.5-羟色胺对大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响[J].山东医药.2017
[8].孙艳.NRG-1调节α-肌动蛋白表达及平滑肌细胞收缩功能的分子机制[D].河北医科大学.2017
[9].郭业兵,张廷国.宫颈微小浸润癌上皮及间质细胞基质金属蛋白酶-2、α-平滑肌肌动蛋白的表达及意义[J].山东医药.2017
[10].张兰兰,刘琼,于健,唐晓娟,徐静.转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究[J].眼科新进展.2016
论文知识图
