耳郭软骨细胞微载体的体外三维动态培养

论文摘要

背景:软骨细胞是软骨组织工程最常用的种子细胞,但是如何在体外扩增的同时又能维持其良好的软骨表型是研究的重点和难点之一。目的:通过微载体动态培养法,明确三维动态培养对耳郭软骨细胞增殖和分化的影响,为建立规模化扩增方法提供技术参考。方法:应用胰酶、胶原酶消化法分离、培养猪耳软骨细胞,并将获得的软骨细胞分为3组:培养皿单层培养、微载体三维静止培养和微载体三维动态培养。应用扫描电镜、荧光倒置显微镜、DIO荧光染色、冰冻切片DAPI染色观察细胞在微球上生长情况,DNA定量检测软骨细胞增殖能力,Real-time PCR检测软骨相关基因表达差异。结果与结论:①第1代软骨细胞可快速贴附于CultispherG多孔微载体表面,微载体动态培养组细胞数量多于微载体静止培养组,而且微载体动态培养组细胞分布更为均匀;②培养皿单层培养时,软骨细胞在4d时进入平台期,微载体动态培养组软骨细胞对数生长期延长为2-10 d,细胞数量在14 d达到高峰,微载体静止培养组细胞增殖速度缓慢;③在长期体外培养中,二维培养和微载体静止培养软骨表型丧失,而微载体三维动态培养在促进细胞增殖的同时,能够维持软骨表型;④结果表明,微载体联合旋转细胞培养系统三维动态培养可以作为耳郭软骨细胞规模化扩增的一种方法。

论文目录

• 文章快速阅读:
• 文题释义:
• 0引言Introduction
• 1 材料和方法Materials and methods
•   1.1 设计
•   1.2 时间及地点
•   1.3 材料
•     1.3.1 实验动物
•     1.3.2 实验试剂和仪器
•     1.3.3 实验仪器
•   1.4 实验方法
•     1.4.1 Cultispher G微载体预处理
•     1.4.2 猪耳郭软骨细胞的分离、培养
•     1.4.3 培养方法
•     1.4.4 DNA定量检测细胞增殖
•     1.4.5 荧光定量PCR
•     1.4.6 扫描电镜观察
•     1.4.7 冰冻切片DAPI染色
•     1.4.8 DIO荧光染色
•   1.5 主要观察指标
•   1.6 统计学分析
• 2 结果Results
•   2.1 荧光倒置显微镜、冰冻切片DAPI染色、扫描电镜观察细胞生长情况
•   2.2 增殖能力
•   2.3 软骨细胞表型相关基因表达
• 3 讨论Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙恒,马世泽,蒋海越,刘霞,滕利

关键词: 软骨细胞,三维培养,三维动态培养,三维静止培养,微载体,旋转细胞培养系统,软骨表型,细胞增殖

来源: 中国组织工程研究 2019年21期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院整形外科医院

基金: 中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2017-I2M-1-007),项目负责人:蒋海越,国家自然科学基金(81471804),项目负责人:刘霞~~

分类号: R329.2;Q813.11

页码: 3336-3341

总页数: 6

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