导读:本文包含了同种异体气管移植论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:组织工程,肺通气,气管,上皮
同种异体气管移植论文文献综述
张运曾,王成,金锋,陈昶,高文[1]（2015）在《同种异体气管原位移植模型的改良与观察》一文中研究指出背景:气管上皮的再生能有效抑制黏膜下组织增生和管腔闭塞的发生,有研究表明通气能够加快气管上皮的再生。目的:建立并改良同种异体小鼠原位气管移植模型,进一步观察通气对供体气管的影响。方法:C57BL/6小鼠的气管作为供体,BALB/c小鼠作为受体。实验分2组,实验组取2个供体气管膜部纵行剖开,缝合成一扩大管腔的气管原位植入受体气管;对照组供体气管原位植入受体气管,28 d后获取标本进行检测。结果与结论:苏木精-伊红染色显示,与对照组相比,实验组气管管腔内上皮层可见分化良好的纤毛上皮,亦可见少量无纤毛的单层或复层扁平上皮,黏膜下轻度纤维组织增生和炎细胞浸润。形态学定量分析结果示,实验组在气管上皮中纤毛上皮的比例高于对照组(P<0.05),实验组固有层与软骨的比值,固有膜纤维组织的面积、淋巴细胞浸润度均低于对照组(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,两组移植气管上皮均为为受体上皮表型。结果证实,实验成功建立了改良的小鼠原位气管移植模型,移植段气管通气量增加能够加快气管上皮分化,分化良好的气管上皮可以更好的抑制成纤维细胞的增殖。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年20期）
黄勋[2]（2015）在《受体源性气管上皮细胞植入对同种异体气管移植体狭窄的作用及机制研究》一文中研究指出研究背景近年来随着医源性气管狭窄、复杂性气管损伤、原发和继发性气管肿瘤发病率的增加,临床上需要进行气管重建的病人也随之增多。目前气管重建的方法有很多,但均存在各种问题。其中同种异体气管移植可以在气管组织结构和功能方面进行重建,能克服气管重建过程中的大部分问题,因此具有较好的临床应用前景。而由闭塞性气道疾病(Obliterative Airway Disease,OAD)引起的气管移植体纤维瘢痕狭窄是同种异体气管移植手术的主要术后并发症,也是制约气管移植在临床上广泛应用的主要原因。上皮间质转化(Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT)指上皮细胞在细胞生物学上表现为失去其自身的上皮细胞特性而获得间质细胞的表型,在分子生物学上表现为上皮细胞固有的标志物表达水平降低,间质细胞相关的标志物表达水平增高,以及与EMT有关的转录因子发生了激活。根据文献报道,EMT这一现象在生物组织的胚胎发育、恶性肿瘤的侵袭以及组织的纤维化过程中广泛存在。由于同种异体气管移植后,其典型的特征就是狭窄的移植体管腔内有大量的纤维结缔组织生成,而且也有研究表明,人原代支气管上皮细胞在转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)作用下,可以发生EMT,据此我们推断,EMT很有可能是导致气管同种异体移植体发生狭窄的一个重要因素。此外还有研究表明,气管内上皮组织的完整程度与气管管腔狭窄程度呈负相关,即气管内上皮组织的完整程度越低,移植后气管移植体的狭窄程度也越高,这说明供体气管上皮细胞的损伤,可以最终导致气管移植体的狭窄。但对于气管上皮细胞的损伤,是否可以通过诱导EMT从而导致移植体狭窄,目前所知甚少;而植入受体源性的气管上皮细胞,是否能抑制EMT从而缓解移植体狭窄,也仍然未知。目的本研究课题的目的在于明确气管上皮细胞在同种异体气管移植体狭窄中扮演的角色,以及阐明气管上皮细胞植入抑制同种异体气管移植体发生狭窄的可能分子生物学机制,为临床上预防和治疗同种异体气管移植体狭窄提供新的思路。方法(1)采用Accutase酶消法分离Wistar大鼠原代气管上皮细胞并加以培养。(2)建立SD-Wistar大鼠同种异体皮下异位移植模型,SD-SD大鼠同系异体皮下异位移植模型,以及SD-Wistar大鼠受体源性上皮细胞植入同种异体皮下异位移植模型(在移植后第6天植入Wistar大鼠原代气管上皮细胞)。然后在移植后第7、14、30天,处死各组实验大鼠,取出气管移植体,一部分用于石蜡包埋,另一部分提取总RNA和提纯总蛋白。然后石蜡切片后行苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,H&E)染色,用病理图像分析系统检测移植体气管上皮细胞覆盖比率、气管管腔狭窄和炎性细胞浸润程度。(3)石蜡切片后行免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色,检测上皮细胞标志物E-cadherin以及间质细胞标志物vimentin的表达以及定位。提取总蛋白后行Western Blot检测,半定量分析E-cadherin和vimentin的表达。(4)提取总RNA,并反转录成c DNA,实时定量聚合酶链反应(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)检测EMT相关转录因子ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Twist1的m RNA表达水平,并进一步实施Western Blot以检测ZEB1的蛋白表达水平。(5)q RT-PCR检测TGF-β信号通路相关分子的表达水平,包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3以及转化生长因子β1受体(Transforming Growth Factor-βReceptor1,TGFBR1)的m RNA表达,以及Western Blot检测smad3和p-smad3的蛋白表达。结果(1)摸索出Accutase酶消法分离大鼠气管上皮细胞的最佳培养条件,成功地培养了Wistar大鼠原代气管上皮细胞。(2)成功建立了大鼠气管背部皮下异位移植模型。组织病理学检测发现,同系异体移植物组织病理结构基本接近正常,而同种异体移植物气管纤毛上皮细胞数量逐渐减少,管腔狭窄和炎性细胞浸润程度也逐渐加重。当植入受体源性的气管上皮细胞后,气管纤毛上皮细胞数量得到了恢复,管腔狭窄和炎性细胞浸润程度也得到了缓解。(3)IHC检测发现E-cadherin主要在上皮细胞中表达,而vimentin主要在间质细胞中表达。同系异体移植物E-cadherin表达量很高,而同种异体移植物E-cadherin表达量逐渐降低,植入受体源性的气管上皮细胞后,E-cadherin的表达量有所回升。而vimentin的表达刚好和E-cadherin的表达相反,这一表达趋势在Western Blot检测中得到了验证。(4)q RT-PCR检测EMT相关转录因子的表达改变情况,与同系异体移植物相比,同种异体移植物中EMT相关转录因子(ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Twist1)表达水平都有所增高,其中ZEB1的增高最为明显。而植入受体源性的气管上皮细胞后,可以抑制EMT相关转录因子的表达,其中对ZEB1抑制作用最为明显,这一结论也在Western Blot检测中得到了验证。(5)检测了TGF-β信号通路相关分子的表达情况,与同系异体移植物相比,在同种异体气管移植物中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达均增高(其中TGF-β1的表达增高最为明显),TGFBR1表达水平也相应增高,而且smad3的磷酸化水平也有所增高。当植入受体源性的气管上皮细胞后,TGF-β1和TGFBR1的表达水平降低,smad3的磷酸化水平也相应降低。结论(1)建立同种异体气管异位移植动物模型后,供体气管上皮细胞会发生损伤,气管管腔会发生狭窄和梗阻;(2)受体源性的气管上皮细胞植入,可以抑制大鼠同种异体气管移植体发生狭窄;(3)气管上皮细胞损伤激活的TGF-β-Smad信号通路可能是导致其发生EMT以及移植体发生狭窄的重要分子学机制;(4)受体源性的气管上皮细胞植入,可以通过抑制TGF-β-Smad信号通路来缓解EMT,从而减轻大鼠同种异体气管异位移植后管腔狭窄程度。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
陈万生,何海燕,焦英华,赵轶峰,李彦明[3]（2014）在《同种异体气管移植的病理学研究》一文中研究指出目的探讨同种异体气管移植的临床效果及吻合口病理学变化。方法异体羊新鲜心包经过0.625%戊二醛处理后,包绕6cm Sigma不锈钢丝网支架,制成人工气管。切除实验用羊颈段气管5cm,人工气管与实验羊断端气管头尾端吻合。手术后60、120、180d行支气管镜检查、X线片检查,定期处死实验羊行人工气管病理学检查,观察人工气管、吻合口愈合、血运及肉芽组织情况。结果人工气管可以诱导受体羊气管周围组织生成气管样组织,填充缺损区。60d,移植区上皮组织不明显;120d,移植区覆盖有部分纤毛柱状上皮,气管各层次比较完整;180d,黏膜层有纤毛柱状上皮覆盖,黏膜下层、外膜等小血管丰富,移植区气管各层次完整。结论人工气管可以诱导受体羊气管周围组织生成完整的气管样组织,气管各层次比较完整,实验动物有望长期存活。(本文来源于《河北北方学院学报(自然科学版)》期刊2014年01期）
高立春[4]（2013）在《光氧化反应深低温处理同种异体气管移植的上皮细胞和软骨细胞研究》一文中研究指出研究背景气管疾病以及创伤导致的气管狭窄及缺损，在临床上较为常见。1881年Gluck等首次成功进行的气管切断再吻合手术,标志着气管外科的开始。而经手术治疗中，气管切除过长，超过约成人气管长度的二分之一，儿童气管的叁分之一，则需要气管重建。而理想的气管替代材料需要具备以下几种特质：1、封密的管腔结构；2、质地柔韧；3、良好的生物相容性；4、低炎性反应；5、低免疫性；6、有助于气管上皮细胞在管内壁生长。随着研究人员在气管重建上的研究的深入，气管重建替代物的选择越来越多，也逐渐成熟。由于免疫抑制剂应用于器官移植抗排斥反应中,为同种异体气管移植进一步创造了条件，但免疫抑制剂的使用会促使肿瘤的复发，这对于气管恶性肿瘤患者的异体气管移植将增加其肿瘤复发的几率。如何控制免疫排斥反应，降低移植物自身的抗原？目前国内外研究的降低异体气管抗原性的主要处理方法包括移植物的放疗、低温保存及脱细胞等。近几年有关研究提出经光氧化反应处理生物材料后，有无细胞毒性、低钙化性、弱免疫原性和良好生物相容性等优势。本实验采用光氧化反应处理后深低温保存兔气管移植，对移植后气管的上皮细胞和软骨细胞进行观察，评价此项光氧化反应处理技术的可行性、有效性，为解决同种异体气管移植的处理方式提供一条新途径。目的光氧化反应处理深低温保存兔异体气管，建立同种异体气管移植的兔模型，观察兔气管上皮细胞及气管软骨细胞的情况，研究光氧化反应处理兔异体气管的可行性、有效性。方法36只实验用兔(雌雄不限,体重2.5-3kg)，随机分为供体组（n=18）和受体组（n=18），受体组随机分为深低温移植对照组（A组，n=9）和光氧化反应深低温移植组（B组，n=9）。B组为光氧化反应处理后,经液氮深低温保存6周异体气管移植组。A组为未经光氧化反应处理，经液氮深低温保存6周异体气管移植组。A组、B组经一期手术将移植气管包埋在受体兔腹腔大网膜内再血管化14天，二期手术经原切口分离大网膜,保留血管蒂，清理移植段气管二端,原位移植于受体兔颈部。二期手术术后8周处死受体兔取移植气管标本，HE染色后显微镜下观察病理改变，计算标本上皮积分和软骨积分。结果经光氧化方法处理后的B组材料呈浅蓝色，组织结构完好，质地柔韧性等方面与新鲜组织相似。A组、B组经液氮深低温保存后的组织结构完好，与新鲜组织相比无明显区别。实验兔在一期手术，术中术后死亡率0%，术后14d实验兔生存状态良好；实验兔在二期手术，术中死亡率0%。A组、B组均有一例大网膜包埋后异体气管稍有变形，其余异体气管的组织形态均完好。二期手术后8周，取移植气管标本。A组、B组HE染色观察气管壁有淋巴细胞，中性粒细胞浸润，部分可见动脉内膜局部增厚，向腔内突起，其内见泡沫细胞聚集，少量淋巴浸润，粥样斑块形成。B组的上皮积分明显高于A组的上皮积分有显着差异（p<0.05）。B组的软骨积分均值较A组的软骨积分均值低，但A组、B组的软骨积分没有显着差异（p>0.05）。结论1、应用光氧化反应深低温保存处理的同种异体气管能够促使移植气管上皮细胞粘附再生长，明显优于单独冰冻深低温保存处理的同种异体气管。2、应用光氧化反应深低温保存处理的同种异体气管较单独深低温保存处理的同种异体气管在气管移植后对软骨细胞的保存和再生没有显着差异。(本文来源于《南华大学》期刊2013-05-01）
马薇,张金玲[5]（2012）在《胸腔内同种异体气管移植手术配合及护理》一文中研究指出临床上多种原因所致的气管狭窄,原发或临近组织的恶性肿瘤侵害,都需要进行气管切除重建手术,然而当气管环形切除超过成人气管的1/2(约6cm),婴幼儿气管的1/3时,造成端端吻合困难,面临着进行气管移植手术。方法有人工气管替代、自体组织再造气管、同种异体气管重建、生物医学与组织工程重建气管。以上各个领域的研究都取得了可喜的进展与突破,但同种异体气管移植仍然是器官移植外科领域中的热点与前沿。我院于2011年11月、12月(本文来源于《中华护理学会第16届全国手术室护理学术交流会议论文汇编（上册）》期刊2012-04-01）
韩云,刘军,蓝妮,石文君[6]（2011）在《大鼠深低温冻储同种异体气管移植的实验研究》一文中研究指出目的探讨深低温冻储对大鼠同种异体移植气管上皮再生的影响。方法用深低温冻储2周和6周的大鼠气管进行同种异体气管移植,以自体和异体新鲜气管作为对照,通过观察供体气管的组织学、上皮爬行和再生情况,评价深低温冻储不同时长对移植气管的存活和新生上皮再生的作用。结果深低温冻储6周后实验组的移植气管复层上皮比自体气管移植组厚度明显变薄或成单层,软骨无变性坏死,未见有单核细胞浸润,最长存活达35 d,而深低温冻储2周气管移植大鼠为10 d。结论深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减供体气管的抗原性。冻储6周的移植气管上皮再生和受体的存活率要优于冻储2周组。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2011年12期）
韩云,纪子钊,蓝妮,庞超见,佟晓杰[7]（2011）在《深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达》一文中研究指出背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法:用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2011年18期）
王林毛[8]（2011）在《同种异体气管移植再上皮化的实验研究》一文中研究指出目的:探讨在异位气管移植中,大鼠气管上皮细胞再生形成分化和功能良好上皮的动态过程。方法:实验分实验组和对照组,胰酶消化法去除气管上皮细胞,实验组灌注气管上皮细胞,对照组灌注生理盐水,再将两组气管异位移植到SD大鼠背部皮下,全程环孢菌素A腹腔注射处理。移植后1、2、3、4周杀死大鼠,取出气管。形态学评价气道上皮的完整性、分化程度、粘膜下炎症细胞浸润、纤维组织增生和管腔闭塞情况。免疫组化CK14、CK18和CFTR鉴定气道上皮细胞分化;Ki-67鉴定上皮细胞增殖情况。扫描电镜和透射电镜观察超微结构改变。结果:形态学:移植后1周,气管壁大部分可见不连续扁平上皮覆盖,局部无上皮,无纤毛结构;移植后2周,气管壁全层可见较连续的扁平上皮覆盖,局部可见柱状上皮,无纤毛结构;移植后3周,气管壁全层可见较连续的柱状上皮覆盖,局部可见纤毛结构;移植后4周,气管壁全层可见连续的纤毛柱状上皮覆盖。对照组气管壁无上皮细胞覆盖,管腔中大量炎症细胞浸润。CK14和CK18于术后第1、2、3、4周4个时间点的气管上均有表达;CFTR只在第4周气管上表达。术后第1周Ki-67表达最强,后表达逐渐下降。扫描电镜:从术后第1周上皮覆盖大部分气管壁到第4周形成分化完全的假复层纤毛柱状上皮;透射电镜第1周可见扁平上皮,第4周可见纤毛上皮结构完整,细胞连接紧密。结论:大鼠气管上皮细胞灌注到裸气管异位移植到大鼠背部皮下,可再生成分化完全和有功能的气道上皮;气管上皮再生过程包括:细胞附壁、细胞增殖、细胞分化、成熟上皮形成。(本文来源于《苏州大学》期刊2011-04-01）
王成,金锋,张延安,张洪福,张强[9]（2009）在《同种异体气管移植后长段气管的再血管化》一文中研究指出背景:移植气管再血管化是气管移植外科需要解决的首要问题。目的:观察同种异体气管移植后长段气管再血管化过程中气管软骨支架的生长情况,以实现长段气管的在血管化。设计、时间及地点:动物实验观察,于2007-06/2008-06在山东省胸科医院胸外科完成。材料:健康新西兰兔20只,由山东大学医学院实验动物中心提供,随机抽取10只家兔做供体,剩余10只家兔作为受体。方法:将同种异体供体家兔气管去除气管黏膜及膜部平滑肌,形成仅余气管软骨及部分环状韧带的气管支架,在气管软骨环之间将环状韧带剪开或密集打孔,使气管软骨支架裂隙化或网孔化,但要保留气管软骨环两端及正中部环状韧带,以保持气管软骨支架的完整连接状态。受体游离并切取带血管蒂的空肠,其长度略长于备用供体的软骨支架的长度,将大网膜环绕贴附于备用供体的气管软骨环外面充当外膜。将构建好的模拟气管置于腹腔中。主要观察指标:气管外膜的网膜及气管软骨的生长情况。结果:2周后打开腹腔,大体及病理切片观察:重建的气管替代物管腔无塌陷,按压管壁弹性良好,夹裹气管软骨的肠黏膜与大网膜血运好,异体气管软骨无坏死及吸收。结论:实验在受体腹腔内成功完成了一期气管替代物重建,实现了同种异体气管移植长段气管的再血管化。受体带蒂肠黏膜、大网膜夹裹供体网孔化或裂隙化的气管支架使移植体不再受长度的限制,是实现长段气管再血管化的关键。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2009年53期）
梁志波,李小飞,赵晋波,李靖华,王晓春[10]（2008）在《环孢素聚乳酸微球在同种异体气管移植中的应用》一文中研究指出背景:前期实验已获得了最优的环孢素聚乳酸微球制备工艺,且证实微球具有明显的缓释性能,无明显毒、副作用。目的:观察同种异体原位气管移植后,局部置入环孢素聚乳酸微球对免疫排斥的抑制作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-02/04在解放军第二五二医院医院动物实验中心完成。材料:选取SD大鼠60只,按体质量配对后行同种异体气管原位移植。移植后按随机数字表法分为3组,即空白对照组、环孢素注射组及环孢素聚乳酸微球局部应用组,每组10只。方法:空白对照组不做特殊处理;环孢素注射组于气管原位移植后给予环孢素肌肉注射;环孢素聚乳酸微球局部应用组于气管原位移植后分别将10,30mg环孢素聚乳酸微球埋植于气管周围肌肉层内、外。主要观察指标:移植后4周麻醉后处死动物,对移植气管标本进行大体及病理学评估,计算上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞比值等指标,并进行组间比较。结果:①环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组大鼠全部存活至预杀期,空白对照组大鼠死亡1只。②移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组的上皮积分均高于空白对照组(P<0.01);环孢素聚乳酸微球局部应用组高于环孢素注射组(P<0.01)。③移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组的淋巴细胞计数均低于空白对照组(P<0.05,0.01);环孢素聚乳酸微球局部应用组低于环孢素注射组(P<0.05)。④移植后4周环孢素注射组、环孢素聚乳酸微球局部应用组无核软骨细胞与所有软骨细胞比值均低于空白对照组(P<0.05)。结论:同种异体气管原位移植后局部置入环孢素聚乳酸微球可以有效降低免疫排斥反应,对移植体的保护作用优于肌肉注射环孢素。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2008年49期）
同种异体气管移植论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景近年来随着医源性气管狭窄、复杂性气管损伤、原发和继发性气管肿瘤发病率的增加,临床上需要进行气管重建的病人也随之增多。目前气管重建的方法有很多,但均存在各种问题。其中同种异体气管移植可以在气管组织结构和功能方面进行重建,能克服气管重建过程中的大部分问题,因此具有较好的临床应用前景。而由闭塞性气道疾病(Obliterative Airway Disease,OAD)引起的气管移植体纤维瘢痕狭窄是同种异体气管移植手术的主要术后并发症,也是制约气管移植在临床上广泛应用的主要原因。上皮间质转化(Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT)指上皮细胞在细胞生物学上表现为失去其自身的上皮细胞特性而获得间质细胞的表型,在分子生物学上表现为上皮细胞固有的标志物表达水平降低,间质细胞相关的标志物表达水平增高,以及与EMT有关的转录因子发生了激活。根据文献报道,EMT这一现象在生物组织的胚胎发育、恶性肿瘤的侵袭以及组织的纤维化过程中广泛存在。由于同种异体气管移植后,其典型的特征就是狭窄的移植体管腔内有大量的纤维结缔组织生成,而且也有研究表明,人原代支气管上皮细胞在转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)作用下,可以发生EMT,据此我们推断,EMT很有可能是导致气管同种异体移植体发生狭窄的一个重要因素。此外还有研究表明,气管内上皮组织的完整程度与气管管腔狭窄程度呈负相关,即气管内上皮组织的完整程度越低,移植后气管移植体的狭窄程度也越高,这说明供体气管上皮细胞的损伤,可以最终导致气管移植体的狭窄。但对于气管上皮细胞的损伤,是否可以通过诱导EMT从而导致移植体狭窄,目前所知甚少;而植入受体源性的气管上皮细胞,是否能抑制EMT从而缓解移植体狭窄,也仍然未知。目的本研究课题的目的在于明确气管上皮细胞在同种异体气管移植体狭窄中扮演的角色,以及阐明气管上皮细胞植入抑制同种异体气管移植体发生狭窄的可能分子生物学机制,为临床上预防和治疗同种异体气管移植体狭窄提供新的思路。方法(1)采用Accutase酶消法分离Wistar大鼠原代气管上皮细胞并加以培养。(2)建立SD-Wistar大鼠同种异体皮下异位移植模型,SD-SD大鼠同系异体皮下异位移植模型,以及SD-Wistar大鼠受体源性上皮细胞植入同种异体皮下异位移植模型(在移植后第6天植入Wistar大鼠原代气管上皮细胞)。然后在移植后第7、14、30天,处死各组实验大鼠,取出气管移植体,一部分用于石蜡包埋,另一部分提取总RNA和提纯总蛋白。然后石蜡切片后行苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,H&E)染色,用病理图像分析系统检测移植体气管上皮细胞覆盖比率、气管管腔狭窄和炎性细胞浸润程度。(3)石蜡切片后行免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色,检测上皮细胞标志物E-cadherin以及间质细胞标志物vimentin的表达以及定位。提取总蛋白后行Western Blot检测,半定量分析E-cadherin和vimentin的表达。(4)提取总RNA,并反转录成c DNA,实时定量聚合酶链反应(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)检测EMT相关转录因子ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Twist1的m RNA表达水平,并进一步实施Western Blot以检测ZEB1的蛋白表达水平。(5)q RT-PCR检测TGF-β信号通路相关分子的表达水平,包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3以及转化生长因子β1受体(Transforming Growth Factor-βReceptor1,TGFBR1)的m RNA表达,以及Western Blot检测smad3和p-smad3的蛋白表达。结果(1)摸索出Accutase酶消法分离大鼠气管上皮细胞的最佳培养条件,成功地培养了Wistar大鼠原代气管上皮细胞。(2)成功建立了大鼠气管背部皮下异位移植模型。组织病理学检测发现,同系异体移植物组织病理结构基本接近正常,而同种异体移植物气管纤毛上皮细胞数量逐渐减少,管腔狭窄和炎性细胞浸润程度也逐渐加重。当植入受体源性的气管上皮细胞后,气管纤毛上皮细胞数量得到了恢复,管腔狭窄和炎性细胞浸润程度也得到了缓解。(3)IHC检测发现E-cadherin主要在上皮细胞中表达,而vimentin主要在间质细胞中表达。同系异体移植物E-cadherin表达量很高,而同种异体移植物E-cadherin表达量逐渐降低,植入受体源性的气管上皮细胞后,E-cadherin的表达量有所回升。而vimentin的表达刚好和E-cadherin的表达相反,这一表达趋势在Western Blot检测中得到了验证。(4)q RT-PCR检测EMT相关转录因子的表达改变情况,与同系异体移植物相比,同种异体移植物中EMT相关转录因子(ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Twist1)表达水平都有所增高,其中ZEB1的增高最为明显。而植入受体源性的气管上皮细胞后,可以抑制EMT相关转录因子的表达,其中对ZEB1抑制作用最为明显,这一结论也在Western Blot检测中得到了验证。(5)检测了TGF-β信号通路相关分子的表达情况,与同系异体移植物相比,在同种异体气管移植物中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达均增高(其中TGF-β1的表达增高最为明显),TGFBR1表达水平也相应增高,而且smad3的磷酸化水平也有所增高。当植入受体源性的气管上皮细胞后,TGF-β1和TGFBR1的表达水平降低,smad3的磷酸化水平也相应降低。结论(1)建立同种异体气管异位移植动物模型后,供体气管上皮细胞会发生损伤,气管管腔会发生狭窄和梗阻;(2)受体源性的气管上皮细胞植入,可以抑制大鼠同种异体气管移植体发生狭窄;(3)气管上皮细胞损伤激活的TGF-β-Smad信号通路可能是导致其发生EMT以及移植体发生狭窄的重要分子学机制;(4)受体源性的气管上皮细胞植入,可以通过抑制TGF-β-Smad信号通路来缓解EMT,从而减轻大鼠同种异体气管异位移植后管腔狭窄程度。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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