张海燕
（泗阳县中医院神经内科江苏泗阳223700）
摘要目的：建立合适的动脉粥样硬化的基础上制作血管性痴呆（VaD）动物模型。方法：高脂饲料喂养大鼠，造成动脉粥样硬化的模型，之后采用反复夹闭大鼠双侧颈总动脉方法制备血管性痴呆大鼠模型。结果：水迷宫行为学检测结果表明，血管性痴呆大鼠有明显的学习、记忆障碍，且该组大鼠海马组织神经元明显减少、缺血坏死明显。结论：本方法制备的动脉粥样硬化血管性痴呆动物模型，较为接近人类血管性痴呆的发病原理，动物模型较为理想，可用于基础研究及药物疗效评价。
关键词：动脉粥样硬化，血管性痴呆，动物模型，基础研究
动脉粥样硬化（(Atherosclerosis，AS）在血管性痴呆的发病中起着重要的作用，预防和治疗脑血管动脉粥样化对于防治血管性痴呆（VD）有着关键性的作用。由于动脉硬化斑块的形成导致供养脑组织的血管出现狭窄，造成局部脑组织缺血缺氧，导致大脑神经元损伤，致使神经元丢失而发生痴呆[1]。
材料与方法
1.1实验大鼠SPF级SD大鼠46只，雌雄各半，体重220-270g，由湖南中医药大学动物中心提供，动物编号：合格证书:HNASLKJ20113616。将大鼠随机分为实验组和对照组，每组23只。
1.2主要试剂及仪器
水合氯醛（国产分析纯）。Morris水迷宫视频跟踪分析系统MT-200水迷宫
（成都泰盟科技有限公司）。
1.3方法
1.3.1大鼠动脉粥样硬化模型的建立实验组喂食高脂饲料,即3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81.3%基础饲料。同时在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D70万IU/kg,对照组喂食基础饲料，给予同等体积的生理盐水。对照组、实验组分别于12周后各处死5只大鼠，剥离主动脉进行病理观察[2]。
正常对照组大鼠主动脉壁各层结构正常，动脉平滑肌排列规律整齐，内膜光滑，无增生，未见粥样硬化斑块。与正常对照组相比，模型组大鼠主动脉血管内膜明显增厚，内膜下大量平滑肌细胞增生，斑块底部泡沫细胞发生变性坏死，内弹力层和中弹力板发生变性、断裂和崩解，部分可见坏死的平滑肌细胞，平滑肌细胞核固缩，核染色变深，在内膜和中膜均出现了大量的斑块和炎细胞浸润。证明动脉粥样硬化模型制作成功。
1.3.2动脉粥样硬化型血管性痴呆模型制作：动脉粥样硬化模型制作成功之后，在动脉粥样硬化模型的基础上，采用双侧颈总动脉夹闭再灌注方法制备大鼠血管性痴呆模型。
方法：用10％水合氯醛，按3mL/kg体重，腹腔麻醉，无菌取颈正中切口，切开皮肤，钝性分离各层组织，找出双侧颈总动脉并将其与迷走神经分离，穿线备用。用小动脉夹夹闭大鼠双侧颈总动脉。每次夹闭时间5min，再放开10min。这样重复3次。在手术过程中大鼠体温保持在37℃左右，之后缝合伤口并注射庆大霉素0.2万U，放回笼中，术后肌注青霉素0.2万U/d，连续3d，并继续以高脂饲料喂养。假手术组只切开而不做缺血手术[3]。
1.4指标检测行为学检测大鼠的学习记忆能力。由MorriS水迷宫进行实验测试。主要包括：定位航行测试及空间搜索测试。MoriS水迷宫实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和处理分析系统组成。
1.5统计学处理采用SPSS统计软件处理,实验数据以±S,两组间的比较用独立样本t检验，多组间比较用单因素方差分析。检验水准取A=0.05。
2.结果
2.1如表1-3所示，定位航行实验中与空白对照组或假手术组比较，模型组大鼠前两天潜伏期无明显变化（P>0.05）,从第三天开始模型组潜伏期显著延长（P<0.01），空间搜索实验中模型组大鼠有效停留时间和有效停留距离明显下降。表明模型组大鼠学习记忆和空间搜索能力明显下降。
模型组与空白对照组比较，P<0.01，与假手术组比较P<0.01；有统计学意义。空白组与假手术组比较，P>0.05，没有显著差别。
2.2海马组织病理切片
染色结果：
空白组和假手术组大鼠海马组织无明显损伤,CA2区锥体细胞轮廓清楚，锥体细胞排列整齐致密,形态完整,边界整齐，胞核饱满,核仁清晰,核仁清晰，胞浆清亮，神经纤维密集。模型组大鼠海马CA2区可见胞核浓染，大量锥体细胞缺失，结构不清，部分细胞出现凝固性坏死，残留的锥体细胞排列松散不规则,多数细胞胞核固缩,核仁欠清晰，基质疏松伴明显微空泡形成。
3.讨论
该实验研究表明，在建立动脉粥样硬化的基础上，对大鼠进行双侧颈总动脉夹闭再灌注制作血管性痴呆的造模方法比较成功，可复制性强。虽然造模时间较长，但模拟了人类衰老的过程。MorriS水迷宫显示模型组大鼠和空白组、假手术组大鼠的行为学改变有显著差异（P<0.01）。HE染色病理显示模型组大鼠海马CA2区细胞损伤较显著。空白组，假手术组大鼠没有明显损伤。表明用该方法制作的血管性痴呆大鼠模型是成功的。
参考文献
[1]ForetteF,SeuxML,StaessenJA,eta.lPreventionofdementiainrandomiseddouble-blindplacebo-controlledSystolicHypertensioninEurope(Syst-Eur)trial[J].Lancet,1998,352(9137):1347-135
[2]杨鹏远等动脉粥样硬化大鼠实验模型的建立.第二军医大学学报,2003,24(7):802-804）
[3]唐启盛，黄启福，郭建文.高脂血症大鼠缺血再灌注诱发行为学障碍模型的实验研究[J].北京中医药大学学报，1997，20(5):34.