黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040
【摘要】目的：建立一种理想的阴黄证动物模型。方法：通过分析阴黄证的形成机理，采用大黄灌胃的方法，先造成大鼠素体阳虚的背景，再分别以四氯化碳、氨基半乳糖、α-萘异硫氰酸酯、乙醇诱导大鼠肝损伤。通过对大鼠一般生物学状态的观察、生化指标、放免指标的综合分析，对以上几种肝损伤造模药物进行筛选，选择最符合阴黄证形成机理的几种造模因素优化组合，从而建立符合阴黄证症候特点的动物模型。结论：选取大黄、乙醇、α-异硫氰酸萘酯作为阴黄证动物模型的造模药物。
【关键词】阴黄证；动物模型；大黄；四氯化碳；氨基半乳糖；α-萘异硫氰酸酯；乙醇
【中图分类号】R965.1【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）9-0820-02
中医学将黄疸分为阳黄与阴黄两大类。但阳黄易识,阴黄难辨。由于没有理想的中医阴黄证动物模型，治疗阴黄证有效药物的研发受到了限制。本研究依据阴黄的成因，在原有寒证模型和肝损伤模型的基础上将造模因素进行优化组合,建立一种符合传统中医学阴黄证病因病机的阴黄证动物模型。
1实验材料
大黄；四氯化碳（分析纯）；D-氨基半乳糖；α-异硫氰酸萘酯(ANIT);无水乙醇(分析纯)；戊巴比妥钠；橄榄油；AST试剂盒；ALT试剂盒；ALP试剂盒；TBIL试剂盒；DBIL试剂盒；IL-2试剂盒；cAMP试剂盒；cGMP试剂盒。雄性Wistar大鼠,体重180±20g。
2实验方法
2.1大黄供试品溶液的制备
取大黄2000g,冷水浸泡后煎煮，所得药液为供试液。
2.2CCL4的配置与剂量
取4ml橄榄油置于容量瓶中，加入2mlCCL4，再加入4ml橄榄油，超声混匀，配制20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为1ml/kg。
2.3氨基半乳糖的配置与剂量
精密称量2.0g氨基半乳糖粉末，溶于20ml生理盐水，超声混匀，配制100g/l的氨基半乳糖溶液。
2.4α-萘异硫氰酸酯(ANIT)橄榄油溶液的配置与剂量
3.2gα-萘异硫氰酸酯(ANIT)粉末，溶于80ml橄榄油中,作为供试液。
2.5乙醇溶液的配置与剂量
将等体积无水乙醇溶于等体积纯净水中，配制50%（v/v）乙醇溶液。
2.6造模方法
50只Wistar大鼠随机分为5组，空白组、大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组。
空白组：每天灌胃0.9%生理盐水1ml/100g，连续14天。
大黄四氯化碳组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第14天灌胃给予20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为1ml/kg。
大黄氨基半乳糖组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第14天腹腔注射氨基半乳糖600mg/kg。
大黄α-萘异硫氰酸酯组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第12天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液150mg/kg，第13天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液50mg/kg。
大黄乙醇组:每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。于第10天起每天灌胃给予乙醇50%(v/v)连续5天(5g/kg)。
各组动物于第15天称重后取材。
2.7数据处理
所有数据均以p<0.05判定具有统计学意义。
3结果
3.1大鼠一般生物学状态观察
大鼠灌服大黄供试液后，出现便溏、蜷缩、倦怠、活动减少等脾阳虚症状。分别给予四氯化碳、D-氨基半乳糖、α-异硫氰酸萘酯、乙醇后各模型组大鼠均出现毛竖起、拱背、毛发枯而蓬乱不泽的症状。大黄α-异硫氰酸萘酯组大鼠症状最明显，且排尿明显增多，尿液呈深黄色。
3.2血清中IL-2及cAMP/cGMP的测定
与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清IL-2明显升高，有显著性差异（P<0.01），表明机体免疫功能受到抑制，其中大黄乙醇组血清IL-2升高幅度最大。与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清cAMP/cGMP值明显降低，有显著性差异（P<0.01），其中大黄乙醇组血清cAMP/cGMP值降低幅度最大
3.3血清中AST、ALT、ALP活性的测定
与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组血清AST、ALT、ALP活性明显升高，有显著性差异（P<0.01），表明造成了大鼠的肝损伤，其中大黄四氯化碳组血清AST值升高幅度最大，大黄ANIT组血清ALT、ALP值升高幅度最大。
3.4血清中DBIL、TBIL含量的测定
与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄α-萘异硫氰酸酯组血清TBIL、DBIL含量明显升高，有显著性差异（P<0.01），表明造成胆汁淤积，其中大黄α-萘异硫氰酸酯组血清TBIL、DBIL含量升高幅度最大。
4讨论及结论
从实验结果看，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组血清AST、ALT、、ALP活性明显升高，与正常对照组相比有显著性差异（P<0.01），表明造成了大鼠的肝损伤，其中大黄四氯化碳组血清AST值升高幅度最大，大黄α-萘异硫氰酸酯组血清ALT、ALP值升高幅度最大。大黄四氯化碳组、大黄α-萘异硫氰酸酯组血清TBIL、DBIL含量明显升高，与正常对照组相比有显著性差异（P<0.01），表明造成胆汁淤积，其中大黄α-萘异硫氰酸酯组血清TBIL、DBIL含量升高幅度最大。大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清IL-2明显升高，与正常对照组相比有显著性差异（P<0.01），表明机体免疫功能受到抑制，其中大黄乙醇组血清IL-2升高幅度最大。大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄α-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清cAMP/cGMP值明显降低，与正常对照组相比有显著性差异（P<0.01），其中大黄乙醇组血清cAMP/cGMP值降低幅度最大。《扁鹊心书》中说:“黑疸(阴黄)由于脾肾两经，纵酒贪色则伤肾，寒饮则伤脾”。我们从中医的病因病机入手,通过对给予不同肝损伤造模药物的大鼠进行一般生物学状态观察及实验室指标的检测，最后选取多因素复合的方法造成阴黄证实验动物模型，并将进一步对造模因素进行优化，对阴黄证动物模型进行评价。
参考文献：
[1]王禾,吉惠敏,韩立军.环磷酰胺模型中医证型属性和实验研究[J].中国中医基础学杂志,1996,(5):46.
[2]曲长江,刘劲,林庶如.不同造模方法脾虚小鼠免疫学改变的比较研究[J].中国中医基础医学杂志,1999,(4):66.
[3]王喜军,孙文军.CCL4诱导大鼠肝损伤模型的代谢组学及茵陈蒿汤的干预作用研究[J].世界科学技术一中医药现代化杂志，2006,8(6).
课题来源：
黑龙江省青年科学基金项目（QC2012C095）、黑龙江省博士后资助经费项目（LBH-Z11013）、黑龙江中医药大学校科研基金资助项目（201110）、黑龙江中医药大学“优秀创新人才支持计划”科研项目