IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究

论文摘要

为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 病毒和细胞
•   1.2 试验试剂
•   1.3 试验仪器
•   1.4 Marc-145细胞培养和PRRSV感染增殖
•   1.5 PRRSV的IPMA效价测定
•   1.6 IPMA反应板的制备
•   1.7 IPMA法筛选PRRSV单克隆抗体
•   1.8 PRRSV单克隆抗体的稳定性试验
•   1.9 PRRSV单克隆抗体的交叉反应试验
•   1.10 PRRSV的HN07-1毒株单克隆抗体免疫印迹试验
•   1.11 单克隆抗体与PRRSV重组N蛋白ELISA试验
• 2 结果与分析
•   2.1 不同PRRSV感染时间Marc-145细胞的状态和上清中的病毒增殖效价
•   2.2 IPMA的筛选时间、反应条件和PRRSV单克隆抗体染色的鉴别判定及处理依据
•   2.3 PRRSV单克隆抗体稳定性和特异性
•   2.4 PRRSV单克隆抗体的Western Blotting结果
•   2.5 PRRSV单克隆抗体与重组N蛋白的ELISA结果
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨艳艳,乔松林,李睿,郭军庆,李青梅,滕蔓,王丽,赵东,李学伍,邓瑞广,张改平

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,筛选,单克隆抗体

来源: 华北农学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南农业大学牧医工程学院

基金: 国家重点研发计划重点专项(2016YFD0500700),国家自然科学基金青年科学基金项目(31602036)

分类号: S852.651

页码: 217-223

总页数: 7

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