鸡源大肠杆菌多位点序列分型分析

论文摘要

鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌引起。临床表现为败血症、气囊炎、腹膜炎、肝周炎、心包炎、眼球炎、关节炎等,发病率为11%-69%,死亡率为3.8%-72.9%,对养禽业带来了巨大的损失。大肠杆菌致病菌株多,其疾病病变复杂。因此,该病及时诊断和菌株的准确分型,对鸡大肠杆菌病的控制具有重要意义。从病鸡内脏器官和鸡舍空气分离菌株,观察菌落、菌体形态,提取分离株DNA,进行16S rDNA扩增,经测序比对对分离株鉴定。同时,观察病鸡剖检病变,并采集病料制作常规石蜡切片,进行组织病理学观察。结果显示分离株在营养琼脂上菌落呈圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色;伊红美蓝琼脂板上菌落呈金属色光泽,圆形棕色菌落;革兰染色阴性两极着色的短杆菌。与GeneBank大肠杆菌同源性为98.2%-99.3%。经序列分析结合菌体菌落形态,共鉴定65株大肠杆菌,其中42株来源临床,23株来源环境。病鸡剖检发现肝脏肿大、有纤维素性渗出、气囊浑浊、腹腔内有卵黄样物质;组织观察发现肝外膜增厚,表面覆盖纤维性伪膜,在血管周围及汇管区,炎性细胞增多;心肌外膜增厚,表面有大量纤维性渗出,炎性细胞浸润,心肌纤维排列紊乱,个别心肌纤维断裂。病理变化结合大肠杆菌的分离鉴定,对鸡大肠杆菌病进行诊断。对65株大肠杆菌进行多位点序列分型,同时对毒力基因、血清型、药敏进行分析,并探讨基因型与致病基因、血清型、耐药间的关系。结果显示65株大肠杆菌分为32个序列型（sequence types,ST）。其中已知ST为13个,新ST为19个。32个ST型在数据库中属于9个同源复合体和2个独特型。通过UPGMA分为5个群,14个单独型。鸡舍空气分离株以ST-21为主,肛拭子分离株以nST-8为主,成年病鸡分离株以ST-88为主,病雏鸡分离株以nST-11为主,不同来源的ST型除个别菌株有交叉外,其余均不相同,说明不同来源的分离株其主要的ST型不同,大肠杆菌ST型的种类、优势型与其寄生的环境和宿主日龄不同有关。22株大肠杆菌血清型共有9种、ST型有14种。其中鸡舍空气分离株有3种血清型7种ST型;成年病鸡分离株有6种血清型8个ST型。成年病鸡分离株血清型包含鸡舍空气分离株血清型,但基因型只有个别有交叉。从结果上可以看出ST型分辨力更高,更精细。23株大肠杆菌（14种ST型）对6类12种抗生素进行耐药分析。其中林可胺类（Lincosamides,LINs）耐药率最高,达100%,β-内酰胺类（Beta-Lactams antibiotics,BLs）为95.65%,四环素类（Tetracycline,TCs）为91.30%,对氨基糖苷类（Aminoglycoside antibitics,AGs）和大环内酯类（Macrolides antibiotics,MALs）为86.96%,喹诺酮类（Quinolione,QLs）最低,为82.61%。形成18种耐药谱。65株大肠杆菌的glgP、menA、fimC、fimH检出率为100%,evgA检出率为95.40%,traB检出率为33.80%。65株分离株形成有3个毒力谱,以glgP-menA-evgA-fimC-fimH毒力谱为主。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 绪论
•   1.1 鸡大肠杆菌病的危害
•   1.2 大肠杆菌的分型方法
•     1.2.1 表型分型
•     1.2.2 基因分型
•   1.3 研究目的及意义
• 第二章 鸡大肠杆病诊断
•   2.1 材料和方法
•     2.1.1 主要的试剂
•     2.1.2 主要仪器设备
•     2.1.3 试剂的配制
•     2.1.4 病料采集
•     2.1.5 病理切片制作及观察
•     2.1.6 细菌分离培养
•     2.1.7 细菌表型鉴定
•     2.1.8 细菌16S rDNA鉴定
•   2.2 结果与分析
•     2.2.1 病理组织学观察
•     2.2.2 细菌形态学观察
•     2.2.3 16S rDNA PCR扩增结果及序列分析
•   2.3 讨论
•   2.4 小结
• 第三章 大肠杆菌多位点序列分型
•   3.1 材料和方法
•     3.1.1 试剂及仪器设备
•     3.1.2 分离株多位点序列分型
•     3.1.3 分离株血清型鉴定
•     3.1.4 分离株耐药分析
•     3.1.5 分离株毒力基因检测
•   3.2 结果
•     3.2.1 分离株MLST
•     3.2.2 分离株ST型与来源的关系
•     3.2.3 分离株ST型与血清型相关性
•     3.2.4 分离株ST型与耐药性相关性
•     3.2.5 分离株ST型与毒力基因相关性
•   3.3 讨论
•     3.3.1 ST型分析
•     3.3.2 分离株ST型与来源分析
•     3.3.3 分离株ST型与血清型分析
•     3.3.4 分离株ST型与耐药性分析
•     3.3.5 分离株ST型与毒力基因分析
•   3.4 小结
• 结论
• 创新点
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 参加科研情况

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张欣

导师: 刘彦威

关键词: 鸡大肠杆菌,多位点序列分型,血清型,耐药性,毒力基因

来源: 河北工程大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河北工程大学

分类号: S852.61

总页数: 78

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