恰塔努加链霉菌L10中rpoB基因突变激活蒽塔恰霉素生物合成基因簇的研究（英文）

论文摘要

目的:运用核糖体技术激活恰塔努加链霉菌Streptomyces chattanoogensisL10中的隐性基因簇,进一步研究突变菌株的次级代谢产物并初步探索其对应的生物合成基因簇激活机制。创新点:首次分离得到了蒽塔恰霉素,并初步探索了RpoB突变株中蒽塔恰霉素生物合成基因簇的激活机制。方法:采用核糖体工程技术,对S.chattanoogensisL10的RpsL和RpoB的高度保守区域定点突变,使用高效液相色谱法（HPLC）检测突变株的代谢产物。运用一维和二维核磁共振（1DNMR、2D NMR）解析L10/RpoB （H437Y）的次级代谢产物蒽塔恰霉素的化学结构,通过铁离子还原法（FRAP）和ABTS自由基清除等实验研究其抗氧化活性。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）和凝胶电泳迁移率分析（EMSA）探索蒽塔恰霉素生物合成基因簇的激活机制。结论:L10/RpoB （H437Y）中蒽塔恰霉素的生物合成基因簇被激活。q RT-PCR和EMSA结果表明:RNA聚合酶β亚基结构改变,可能影响全局性调控基因的转录水平,并激活蒽塔恰霉素生物合成基因簇。

论文目录

• 1 Introduction
• 2 Materials and methods
•   2.1 Strains and media
•   2.2 Construction of the plasmids and mutant strains
•   2.3 HPLC analysis of anthrachamycin
•   2.4 Fermentation and isolation of anthrachamycin
•   2.5 Structure elucidation
•   2.6 ABTS assay
•   2.7 FRAP assay
•   2.8 RNA isolation and qRT-PCR
•   2.9 Expression and purification of AdpAch
•   2.1 0 Electrophoretic mobility shift assay
• 3 Results
•   3.1 Introduction of mutations into rpsL or rpoB
•   3.2 Elucidation of anthrachamycin
•   3.3 Antioxidant activity of anthrachamycin
•   3.4 A cryptic gene cluster activated in a rpoB mutant strain
•   3.5 chaI,encoding a putative regulator in cha gene cluster
•   3.6 AdpAch binding to upstream of anthrachamy-cin biosynthetic gene chaI
• 4 Discussion
• 5 Conclusions
• Contributors
• Compliance with ethics guidelines
• References

文章来源

类型: 期刊论文

作者: Zi-yue LI,Qing-ting BU,Jue WANG,Yu LIU,Xin-ai CHEN,Xu-ming MAO,Yong-Quan LI

关键词: 链霉菌,隐性基因簇,定点突变,次级代谢产物

来源: Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology） 2019年12期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: Institute of Pharmaceutical Biotechnology & First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University,Zhejiang Provincial Key Laboratory for Microbial Biochemistry and Metabolic Engineering,College of Life Sciences, Zhejiang University

基金: Project supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.31520103901 and 3173002)

分类号: Q933

页码: 983-1005

总页数: 23

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