中国蓝舌病病毒血清5型毒株的分离与鉴定

论文摘要

为掌握我国云南省蓝舌病病毒（BTV）的流行情况,笔者在云南省师宗县设定哨兵动物,定期从哨兵动物上采集血液进行BTV分离。2012年笔者通过"鸡胚-C6/36细胞-BHK细胞"接种的方式从哨兵牛上分离出1株BTV（毒株号:V084/YN/2012）,电镜观察显示,病毒粒子无囊膜,直径约80 nm,表面分布有纤突。血清中和试验表明,分离的病毒为蓝舌病病毒血清5型（BTV-5）,使用抗BTV-5型的多克隆抗体为一抗进行间接免疫荧光染色,进一步证实分离毒株为BTV-5型。设计特异性引物对V084/YN/2012毒株的Segment 2 （Seg-2）与Segment 3 （Seg-3）的ORF区进行RT-PCR扩增与克隆测序,序列分析结果显示,V084/YN/2012与BTV-5型参考毒株（RSArrrr/05）的Seg-2核酸序列相似度为95.4%,在系统发育树上聚为一簇,属Seg-2基因E型;Seg-3在系统发生树上属Eastern topotype型,与中国BTV-4型YTS4毒株聚为一簇,核酸序列相似度高达97.5%。病毒蚀斑与增殖曲线测定试验表明,V084/YN/2012与实验室保存的BTV-5型参考毒株（RSArrrr/05）在BHK21细胞上可形成形态大小相近的病毒蚀斑,二者在BHK21细胞上的增殖特性也基本一致。本研究确认了BTV-5型V084/YN/2012毒株在我国的分离,掌握了病毒Seg-2与Seg-3基因的遗传特征以及病毒在BHK21细胞上的增殖特性。研究结果为进一步开展中国BTV-5型的基因组测序、流行病学调查与致病性研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂
•   1.2 细胞、鸡胚、抗体
•   1.3 引物设计与合成
•   1.4 血液样本的采集
•   1.5 病毒的分离
•   1.6 分离病毒的鉴定
•   1.7 分离病毒部分基因组测序与序列分析
•   1.8 分离病毒蚀斑特征与增殖曲线分析
• 2 结果
•   2.1 病毒分离与鉴定
•   2.2 分离病毒的电镜观察
•   2.3 分离BTV的血清型鉴定
•   2.4 中国分离BTV-5型毒株的Seg-2与Seg-3序列特征
•   2.5 病毒蚀斑与增殖曲线分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李占鸿,肖雷,孟锦昕,寇美玲,宋建领,廖德芳,高林,杨恒,李华春

关键词: 蓝舌病病毒,血清型,分离,鉴定,序列分析,生物特性

来源: 中国兽医科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 云南省畜牧兽医科学院热带亚热带动物病毒病重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31760744),公益性行业(农业)科研专项(201303035)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0216

页码: 36-43

总页数: 8

文件大小: 2133K

下载量: 131