论文摘要
家蝇(Musca domestica)是一种全球广布性常见双翅目昆虫,其生存环境常常滋生大量的病原微生物,长期的进化使家蝇拥有了强大的先天性免疫系统。因此家蝇也逐渐成为人们研究先天性免疫的良好模型。在本研究中我们以家蝇为研究对象,通过家蝇转录组数据筛选出了TRAF6的同源基因MdTRAF6,其表达受细菌刺激后上调,我们推测它可能参与了家蝇的抗菌免疫反应。为了进一步验证MdTRAF6在家蝇先天性免疫中的作用,我们检测了免疫刺激后MdTRAF6的表达量变化,并且检测了干扰MdTRAF6后抗菌肽以及相应转录因子的表达量变化。同时我们意外发现利用RNAi方法敲低成蝇体内MdTRAF6基因表达后,家蝇的产卵量及幼虫存活率均受到明显影响。另外本研究构建了MdTRAF6基因亚细胞定位表达载体并转染到SF9细胞中,分析MdTRAF6在细胞中的分布情况。实验研究结果如下:1.qPCR及Western blot显示MdTRAF6在幼虫不同组织中均有分布,在肠道中表达量最高,脂肪体次之,血细胞中表达量最低。2.细菌攻毒实验表明MdTRAF6在细菌刺后表达量显著上调。3.RNAi干扰家蝇幼虫中MdTRAF6的表达后,抗菌肽Cecropin的表达量显著上调,Muscin、Attacin的表达量与对照组相比显著下调,而Diptericin的表达量虽然呈现下调趋势但是没有显著性。相关通路上转录因子的检测结果发现Relish的表达量上调,Dorsal表达量下调,JNK表达量没有显著性。4.MdTRAF6在家蝇不同发育阶段的表达量不同,在整个幼虫阶段表达量相对较稳定,呈低水平表达,在蛹和成虫期表达量最高。5.在成蝇阶段干扰MdTRAF6基因表达会使得雌蝇累计产卵量与对照组相比明显降低,同时子一代幼虫的存活率也明显降低。6.在SF9细胞中对MdTRAF6进行亚细胞定位,结果显示家蝇中TRAF6基因主要分布在细胞质中。
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摘要abstract第一章 前言 1.1 家蝇简介 1.2 TRAF6的研究进展 1.2.1 TRAF6与免疫和健康的关系 1.2.2 TRAF6与生长发育的关系 1.3 昆虫的免疫调节 1.3.1 酚氧化物酶 1.3.2 果蝇免疫信号转导途径 1.3.3 JAK-STAT信号转导途径 1.4 研究目的及意义第二章 实验材料与方法 2.1 实验材料 2.1.1 实验昆虫和细胞培养 2.1.2 载体和菌种 2.1.3 实验引物 2.2 实验方法 2.2.1 MdTRAF6基因的序列分析 2.2.2 MdTRAF6基因的原核表达,蛋白纯化及抗体制备 2.2.3 MdTRAF6基因在不同条件下的表达分析 2.2.4 家蝇幼虫RNAi及干扰后功能分析实验 2.2.5 成蝇RNA干扰实验 2.2.6 总RNA的提取,Western Blot实验及qPCR 2.2.7 亚细胞定位相关实验 2.2.8 数据统计与分析第三章 实验结果与分析 3.1 MdTRAF6的生物信息学分析 3.1.1 MdTRAF6的结构分析 3.1.2 MdTRAF6的保守性分析 3.1.3 MdTRAF6的系统发育分析 3.2 MdTRAF6基因的原核表达与蛋白纯化 3.3 MdTRAF6基因在不同条件下的表达分析 3.3.1 MdTRAF6基因在家蝇不同发育阶段的表达模式 3.3.2 MdTRAF6基因在家蝇3 龄幼虫不同组织中的表达模式 3.4 MdTRAF6基因在免疫应激条件下的表达分析 3.4.1 细菌刺激后MdTRAF6基因在mRNA水平上表达量的变化 3.4.2 细菌刺激后MdTRAF6在蛋白水平上表达量的变化 3.5 家蝇幼虫中MdTRAF6基因的干扰及干扰后功能分析实验 3.5.1 MdTRAF6基因干扰效果检测 3.5.2 MdTRAF6基因敲低对抗菌肽基因表达的影响 3.5.3 MdTRAF6基因敲低对免疫调控通路的影响 3.5.4 RNAi干扰MdTRAF6表达对家蝇幼虫存活率的影响 3.6 成蝇中MdTRAF6基因的干扰 3.6.1 对成蝇MdTRAF6基因干扰的效果检测 3.6.2 MdTRAF6基因的干扰对成蝇存活率的影响 3.6.3 成蝇中MdTRAF6基因的干扰对家蝇生殖能力的影响 3.6.4 成蝇中MdTRAF6基因的干扰影响家蝇子一代幼虫的存活率 3.7 MdTRAF6基因的亚细胞定位第四章 讨论第五章 结论参考文献致谢硕士期间发表论文情况
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 王晓芬
导师: 柳峰松,唐婷
关键词: 家蝇,先天性免疫,生殖
来源: 河北大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 河北大学
分类号: Q965
总页数: 60
文件大小: 2186K
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标签：家蝇论文; 先天性免疫论文; 生殖论文;
