导读:本文包含了人胎肺论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,干细胞,纤维,肺泡,生长因子,内皮,胚胎。
人胎肺论文文献综述
范存刚,周景儒,张庆俊[1]（2013）在《人胎肺间充质干细胞的分离》一文中研究指出目的探索分离人胎肺间充质干细胞(MSCs)的有效方法。方法在无菌条件下采集人工流产胎儿的肺组织,分别以组织块培养法和酶消化法分离细胞;通过相差显微镜观察细胞形态,流式细胞学方法检测细胞表型、成脂和成骨分化的多向分化潜能并证实其MSCs特征。结果两种分离方法所得细胞,在原代培养初期的形态有所不同,但培养后期和传代后均为长梭形的贴壁细胞。流式细胞学检测显示,两种方法分离的细胞均表达MSCs标志物CD13、CD29、CD44、CD90、CD105、CD166及HLA-ABC,但不表达造血细胞系的标志物CD45、CD34、CD14、CD38、CD133和内皮相关抗原CD31,也不表达CD41a、CD42b、CD49d、CD106、CD61和HLA-DR。成脂诱导3～5 d后,部分细胞转变为肥大、扁平的多角形细胞;1周后可见细胞内有囊泡状脂滴积聚;2周后脂滴增多、变大,并可被红O着色。成骨诱导者细胞内逐渐出现钙盐沉着,经诱导2周后大部分细胞内可见因钙盐沉着被茜素红S着色。结论组织块培养法和胶原酶消化法均为获得人胎肺MSCs的有效方法。(本文来源于《山东医药》期刊2013年40期）
施珏平[2]（2012）在《经典WNT信号通路关键基因在人胎肺中的表达》一文中研究指出已知经典WNT信号通路通过参与细胞的增殖、凋亡和分化过程,对小鼠肺器官发育起着重要的调控作用,但经典WNT信号通路在人胎肺发育时期的表达模式及调控功能目前未见相关报道。为此,本论文选取假腺肺(7W、12W、17W)和微管肺(21W)时期的人胎肺组织,通过Real-time PCR和原位杂交技术,检测经典WNT信号通路关键基因,包括WNT配体(WNT2、WNT7B),WNT受体(FZD4、FZD7、LRP5、LRP6),WNT信号通路调控器(DVL2、DVL3、GSK-3β, β-CATENIN、APC,AXIN2),WNT信号通路下游转录因子(TCF4、LEF1)以及WNT信号通路拮抗物(SOSTDC1)的表达模式,为阐明经典WNT信号通路调控人肺器官发育机制奠定基础。首先Real-time PCR结果显示,经典WNT信号通路关键基因在人胎肺发育4个时期(7W、12W、17W和21W)均有表达,其中WNT2.D VL2、GSK-3β,β-CATENIN,APC、TCF4及LEF1从7W到12W表达量逐渐下调,从12W到17W开始升高,但在21W又显着下调；LRP5、LRP6、DVL3、AXIN2和SOSTDC1从7W、12W到17W表达量逐渐升高,但到21W又显着下调；WNT7B和FZD7从7W到12W表达量升高,但从12W到21W又逐渐下降。其次原位杂交结果显示,除了经典WNT信号通路调控器DVL3、β-CATENIN, AXIN2及下游转录因子TCF4在胎肺近端气管及远端肺泡上皮和间充质中均有表达外,其余经典WNT信号通路调控器仅在胎月市气管分支及远端肺泡上皮表达。此外,我们利用小分子化合物CHIR-99021刺激15周的人胎肺组织以激活经典WNT信号通路,Western Blot、Real-time PCR及组织病理检测证实经典WNT信号通路被激活,并且过度激活的WNT信号致使人胎肺近远端肺部上皮细胞由矮柱状向高柱状的早期细胞状态退化。总之,我们的研究表明,经典WNT信号通路对人胎肺气管的分支形态及上皮细胞的分化均起着重要的调控作用,这将为研究经典WNT信号通路调控人胎肺发育的分子机制及相关肺部疾病的诊疗奠定基础。(本文来源于《福建师范大学》期刊2012-06-01）
李小平,邱丹,黄毅,贺刚,李沁[3]（2011）在《TGF-β_1诱导人胎肺成纤维细胞分泌血管内皮生长因子以及布地奈德的调控作用》一文中研究指出目的应用转化生长因子(TGF-β1)刺激人胎肺成纤维细胞(HFL-1)检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并观察布地奈德(Budesonide)对HFL-1分泌VEGF的干预作用。方法采用体外培养细胞法,实验组加入不同浓度TGF-β1刺激,孵育72 h后收集细胞培养上清液,经EIA法检测VEGF含量;同时在0.5 ng/ml TGF-β1刺激下,观察应用不同浓度布地奈德对VEGF的调控。结果低浓度TGF-β1上调VEGF的表达,但与对照组比较无显着性差异;随着TGF-β1刺激浓度加大,VEGF含量也逐渐增加,当TGF-β1浓度为0.5 ng/ml时,VEGF相对含量与空白对照组相比具有明显差异(P<0.01)。10-7mol/L布地奈德不仅能明显阻断内源性VEGF的表达,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),还可明显下调TGF-β1诱导的VEGF分泌增加效应,与相同浓度单独TGF-β1刺激组比较,VEGF含量明显下降,二者比较具有统计学意义(P<0.01)。结论 TGF-β1能够诱导HFL-1增殖及VEGF分泌增加,具有浓度依赖效应。提示TGF-β1诱导VEGF分泌增加可能是纤维化形成的重要原因之一;抑制VEGF生成及血管新生可能是布地奈德发挥抗纤维化作用的重要分子机制。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2011年14期）
韩晓芳,官黄涛,李红钢,熊承良[4]（2011）在《人胎肺成纤维细胞对小鼠胚胎干细胞生长支持作用的研究》一文中研究指出目的探讨人胎肺成纤维细胞(hELF)作为饲养层支持小鼠胚胎干细胞(ES)的生长及维持ES细胞的未分化状态。方法采用生长状态良好的hELF,经一定浓度的丝裂霉素C处理后,制备hELF饲养层,将ES细胞接种到该饲养层进行传代培养。观察ES细胞的形态学特征,测定ES细胞表面碱性磷酸酶(AKP)活性、干细胞标志物Oct-4的表达。结果 hELF细胞经丝裂霉素C处理后不再增殖,保持较好的细胞功能和形态学特征。ES细胞克隆在饲养层呈现集落状隆起生长,边缘清楚,结构致密,与周围的饲养层细胞界限清楚。ES细胞仍然保持未分化状态,高度表达AKP及胚胎干细胞转录因子Oct-4。结论 hELF作为饲养层可以较好的维持胚胎干细胞的生长及其未分化状态。hELF源自人工流产组织,取材来源较丰富,为hELF饲养层应用于人胚胎干细胞的培养奠定了基础。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2011年03期）
王铭杰,罗自强,吕梅,周京林,曹传顶[5]（2010）在《NMDA受体激活介导人胎肺成纤维细胞胶原分泌与降解》一文中研究指出肺纤维化是急性肺损伤治疗后主要的慢性肺部疾病,严重影响各类急性肺损伤患者的预后。肺成纤维细胞是肺纤维化进程中细胞外基质分泌的主要细胞,但是肺成纤维细胞在肺损伤中的激活机制尚不清楚。NMDA受体是谷氨酸受体的重要亚型,其过度激活可导致神经细胞的损伤。近年来发现在外周肺组织同样存在NMDA受体的表达,并参与急性肺损伤及弥漫性肺泡炎症反应。但是肺成纤维细胞是否存在NMDA受体并发挥重要生理功能尚未见研究。本实验目的即研究NMDA受体在人胎肺成纤维细胞胶原分泌及降解中的作用。方法:(1)实时定量PCR方法(Real Time PCR)检测人胎肺成纤维细胞NR1和NR2A,NR2B、NR2C和NR2D受体亚单位mRNA表达。(2)检测NMDA对人胎肺成纤维细胞培养上清液中羟脯氨酸(HYP)含量的影响。(3)ELISA法检测NMDA对人胎肺成纤维细胞培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原及MMP-1、TMP-1分泌的影响。结果:(1)正常人胎肺成纤维细胞上存在NMDARs mRNA表达,并且五种受体表达程度并不相同,以NMDAR2A及NMDAR2D表达最强,随后依次为NMDAR2C、NMDA2B和NMDAR1。(2)1 mmol/L NMDA可显着增高人胎肺成纤维细胞上清液中羟脯氨酸含量,NMDAR抑制剂MK-801可以抑制NMDA诱导的HYP的升高。(3)NMDA可显着促进人胎肺成纤维细胞Ⅰ/Ⅲ型胶原及TIMP-1分泌,对MMP-1分泌无显着影响。MK-801可以显着抑制NMDA诱导的Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TIMP-1分泌的增加。结论:人胎肺成纤维细胞存在NMDA受体表达,NMDA受体激活可以促进人胎肺成纤维细胞胶原分泌增加和自身降解的减少。(本文来源于《中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集》期刊2010-10-18）
牛惠惠[6]（2010）在《水通道蛋白5在人胎肺发育中的表达及意义》一文中研究指出目的:1.检测水通道蛋白5 ( AQP5 )在不同孕周(孕27周~孕37周)人胎肺组织中的表达及分布;2.比较正常胎肺组织和发育异常胎肺组织中AQP5的表达差异;3.探讨AQP5对胎肺发育的影响及其在肺液代谢中的作用。方法:1.应用逆转录聚合酶链技术( RT– PCR )检测AQP5 mRNA在人胎肺中的表达;2.应用实时荧光半定量PCR技术( semi-quantitative real-time PCR )比较AQP5 mRNA在正常胎肺和发育异常胎肺中的基因表达差异;3.应用免疫组织化学方法检测AQP5蛋白在人胎肺中的分布。结果:1. RT-PCR结果显示AQP5 mRNA在各孕周人胎肺中均有表达,最早在孕27周即有表达;2. real-time PCR结果显示发育异常胎肺组织( n = 4 )较正常胎肺组织( n = 4) AQP5 mRNA (0.627±0.145 VS 1.019±0.069)表达减少,差异有统计学意义( P值< 0.05 );3.正常胎肺组随孕周增加(孕28+2周~孕37+4周) AQP5 mRNA表达量有上升趋势;异常胎肺组中局部肺不张组织(孕31+4周) AQP5 mRNA表达量最高,肺发育不全患儿(孕28+6周) AQP5 mRNA表达量最低,孕31周较孕27+2周的肺水肿胎肺AQP5 mRNA表达量高;4.免疫组织化学显示AQP5蛋白在人胎肺肺泡I型上皮细胞顶膜表达,肺水肿胎肺和发育不良胎肺中未见表达。结论:1.在人外周胎肺中AQP5 mRNA至少从孕27周开始有表达,AQP5蛋白在人胎肺肺泡I型上皮细胞顶膜表达;2.发育异常胎肺较正常胎肺AQP5基因和蛋白表达下降;3. AQP5在胎肺的正常发育和肺液代谢中可能有重要作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2010-06-29）
牛惠惠,曾万江[7]（2010）在《水通道蛋白5在人胎肺发育中的表达及意义》一文中研究指出目的检测水通道蛋白5(AQP5)在胎儿正常肺组织和发育异常肺组织的表达,探讨AQP5对胎肺发育的影响及其在肺液代谢中的作用。方法应用RT-PCR检测AQP5mRNA在各胎肺中的表达以及real-timePCR检测AQP5在正常胎肺和发育异常胎肺中的基因表达差异。结果AQP5mRNA在各孕周胎肺均有表达,发育异常胎肺组织较正常胎肺组织表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05))。结论发育异常胎肺AQP5表达下降,其对胎肺的正常发育和肺液代谢可能有重要影响。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2010年04期）
陈亚娟[8]（2007）在《TGF-β1诱导人胎肺成纤维细胞分泌血管内皮生长因子以及布地奈德的调控作用》一文中研究指出目的气道重构及肺纤维化形成是引起呼吸系统疾病致残率和死亡率上升的主要原因，亦是疾病防治的重点及难点。许多研究证实，炎症损伤及组织修复失衡是导致支气管肺部纤维化的主要成因，其中可能涉及血管新生及相应生长因子。本实验通过应用转化生长因子(transforming growth factor-β1，TGF-β1)刺激人胎肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast-1，HFL-1)，检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在其中的表达，以及观察布地奈德(Budesonide，Bud)对HFL-1分泌VEGF的干预作用。方法本实验采用细胞培养法，分叁个部分：第一部分探讨TGF-β诱导HFL-1分泌VEGF的时间依赖效应，实验组加入0.25ng/ml TGF-β1刺激，分别在12、24、48、72小时收集细胞培养上清液，经酶联免疫分析法(enzyme immunoassay，EIa)检测VEGF含量，同时进行细胞计数；第二部分探讨TGF-β1诱导HFL-1分泌VEGF的浓度依赖效应，实验组加入不同浓度(0、0.025、0.05、0.25、0.5、2.5、5ng/mL)TGF-β1刺激，孵育72小时后收集细胞培养上清液，经EIA检测VEGF含量；第叁部分探讨布地奈德对HFL-1分泌内源性和外源性VEGF的影响，实验组随机分为对照组、不同浓度(10~(-11)M、10~(-9)M、10~(-7)M)布地奈德干预组、0.5ng/mlTGF-β1+不同浓度(10~(-11)M、10~(-9)M、10~(-7)M)布地奈德干预组，孵育72小时后检测上清液VEGF含量。结果在第一部分实验中，随着细胞孵育时间延长，TGF-β1刺激组成纤维细胞生长加快，细胞生长密度增加；VEGF分泌水平也增加，在72小时点达到分泌高峰，并且各时间点VEGF相对含量均高于对照组，两组比较有统计学差异(P＜0.05)。在第二部分实验中，低浓度TGF-β1(≤0.5ng/ml)上调VEGF的表达量与对照组比较差异无显着性(P＞0.05)；随着TGF-β1刺激浓度加大，VGEF含量也逐渐增加，当TGF-β1浓度为5ng/ml时，VEGF相对含量与空白对照组相比增加了近七倍，两组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。在第叁部分实验中，低浓度(10~(-11)M)Bud刺激内源性VEGF分泌轻微增加，但与空白对照组比较无明显差异(P＞0.05)；而高浓度(10~(-7)M)Bud不仅能明显阻断内源性VEGF的表达，与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01)，还可明显下调TGF-β1诱导的VEGF分泌增加的效应，与同时相相同浓度单独TGF-β1刺激组比较，VEGF含量下降明显，二者比较具有统计学意义(P＜0.01)。结论人胎肺成纤维细胞自身可分泌内源性VEGF，TGF-β1能够诱导HFL-1增殖及VEGF分泌增加，并具有时间和浓度依赖效应。提示成纤维细胞是支气管肺部纤维化病中主要的功能细胞，TGF-β1诱导VEGF分泌增加可能是纤维化形成新的重要原因之一。高浓度(10~(-9)M，10~(-7)M)布地奈德不仅能够抑制HFL-1自身分泌VEGF，还能阻断TGF-β1诱导VEGF水平上调的效应，而低浓度(10~(-11)M)布地奈德没有抑制VEGF分泌的作用。提示抑制VEGF生成及血管新生可能是布地奈德发挥抗纤维化作用中新的重要分子机制。(本文来源于《四川大学》期刊2007-04-18）
肖桦[9]（2007）在《盐酸氨溴索和地塞米松联合应用促进人胎肺Ⅱ型上皮细胞成熟的实验研究》一文中研究指出前言早产儿发生新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome，NRDS)将严重威胁新生儿生命，其主要原因是新生儿肺发育不成熟，Ⅱ型肺泡上皮细胞不能合成足够的肺表面活性物质(pulmonary surfactant，PS)。地塞米松(dexamethasone，DEX)被广泛应用于临床，能够有效促进Ⅱ型肺泡上皮细胞合成、分泌肺表面活性物质，诱导胎肺成熟，但其孕周依赖性以及抑制胎儿生长和加重母胎感染等副作用已越来越多地引起关注。盐酸氨溴索(ambroxol，ABX)作为一种快速促排痰药，除了能促进呼吸道粘稠分泌物排出外，近年来大量研究表明还可促进表面活性物质的合成和分泌，增加卵磷脂／鞘磷脂比值，也有明显的促胎肺成熟作用，且与地塞米松相比无明显不良反应。本实验拟联合应用盐酸氨溴索与地塞米松作用体外培养的人胎肺Ⅱ型上皮细胞，并与单一应用盐酸氨溴索或地塞米松组相比较，确定盐酸氨溴索与地塞米松在体外促胎肺成熟方面是否具有协同作用。材料与方法1、材料来源选择2006年4月至2006年12月期间，于中国医科大学附属盛京医院产科病房行腔内引产的死亡胎儿12例。患者及家属同意死亡胎儿尸体由医院处理。孕28～34周，胎儿性别不限，取胎儿双侧肺组织为实验对象。2、主要试剂Percoll、15％FCS-RPMI1640、地塞米松、盐酸氨溴索等。3、实验方法收集的胎肺组织经解剖分离和0.25％胰蛋白酶—EDTA消化后，采用密度梯度离心法对Ⅱ型肺泡上皮细胞进行分离和纯化，在15％FCS-RPMI1640培养液、37℃的条件下，培养至细胞长成单层。倒置显微镜下观察细胞的生长状态，并在透射电子显微镜下鉴定Ⅱ型肺泡上皮细胞。对培养成功的Ⅱ型肺泡上皮细胞分别施加ABX、DEX和ABX+DEX，并继续培养48小时，用Bartlett法和改良Lowry法分别测定用药后的Ⅱ型肺泡上皮细胞中饱和磷脂和总蛋白的含量，以饱和磷脂／总蛋白比值作为数据结果。所得到的数据结果用均数±标准差((?)±S)表示，采用SPSS13.0统计学软件进行处理与分析，t检验比较总体均数的差异，检验水准取α=0.05。实验结果1、Ⅱ型肺泡上皮细胞培养结果倒置显微镜下Ⅱ型肺泡上皮细胞贴壁生长，贴壁时间为16.24±0.37h。呈现上皮细胞的典型形态，多边形或梭形，细胞核明显，胞浆较丰富。在培养35.38±0.41h之后，细胞相互连接成单层。2、Ⅱ型肺泡上皮细胞的电镜鉴定结果透射电镜下Ⅱ型肺泡上皮细胞表面有短小的微绒毛，胞质内含有电子密度较大的分泌颗粒，形状和大小不一，呈板层状结构，即典型的板层小体。培养的细胞中Ⅱ型肺泡上皮细胞百分比为72.365±0.354％。3、ABX、DEX及ABX+DEX对Ⅱ型肺泡上皮细胞中饱和磷脂／总蛋白含量比值的影响(1)未用药组饱和磷脂／总蛋白含量比值为1.99±0.375μmol／mg，ABX、DEX及ABX+DEX叁组饱和磷脂／总蛋白比值分别为2.78±0.34gmol／mg、2.95±0.49μmol／mg和3.46±0.46μmol／mg。(2)ABX、DEX及ABX+DEX叁组分别与未用药组相比，P值分别为0.0079、0.0096及0.014，均有显着性差异；ABX+DEX组与ABX组相比，P值为0.0069，有显着性差异；ABX+DEX组与DEX组相比，P值为0.015，有显着性差异；单一应用ABX组与DEX组相比，P值为0.320，无显着性差异。4、ABX、DEX及ABX+DEX对不同孕周胎儿肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂／总蛋白含量比值的影响(1)未用药组中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周中饱和磷脂／总蛋白含量比值分别为1.78±0.31μmol／mg和2.20±0.32μmol／mg；ABX组中分别为2.74±0.32μmol／mg和2.82±0.39μmol／mg；DEX组中分别为2.69±0.41μmol／mg和3.01±0.48μmol／mg；ABX+DEX组中分别为3.32±0.36μmol／mg和3.6±0.53μmol／mg。(2)将未用药组中孕28~(+0)～30~(+6)周和孕31~(+0)～33~(+6)周标本中饱和磷脂／总蛋白含量比值均数进行比较，P值为0.045，有显着性差异；ABX组中的均数进行比较，P值为0.483，无显着性差异；DEX组中的均数进行比较，P值为0044，有显着性差异；ABX+DEX组中的均数进行比较，P值为0.312，无显着性差异。结论1、ABX和DEX两种药物均能增加未成熟胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量；联合应用的效果要优于单一应用；单一应用ABX或DEX对胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量的影响无显着差异。2、孕周较大的胎肺组织中Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量高于孕周较小者。ABX和ABX+DEX均对促进小孕周的胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量增加的作用更为明显。(本文来源于《中国医科大学》期刊2007-03-01）
贾文文,华进联,于海生,杨玉艾,赵婷[10]（2007）在《人胎肺间充质干细胞分离培养条件及向心肌细胞诱导分化的可能关联》一文中研究指出目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素。方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成。取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞。观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线。将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中。加Dulbecco修正Eagle’s基础培养液培养24h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两叁次。每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle’s基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle’s(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值。用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44。人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中。每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72h后换成Dulbecco修正Eagle’s基础培养液,以后每3d换液1次。观察细胞在各组中变化情况,诱导12d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色。结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性。Dulbecco修正Eagle’s培养液比先进的Dulbecco修正Eagle’s培养液更适合于这类细胞生长。经10μmol/L5-氮胞苷诱导48h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上。结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中能够大量扩增。②并表达CD25,CD105,CD166和CD44等细胞表面标志。③10μmol/L5-氮胞苷诱导48h对该细胞向心肌细胞分化有明显促进作用。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2007年03期）
人胎肺论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
已知经典WNT信号通路通过参与细胞的增殖、凋亡和分化过程,对小鼠肺器官发育起着重要的调控作用,但经典WNT信号通路在人胎肺发育时期的表达模式及调控功能目前未见相关报道。为此,本论文选取假腺肺(7W、12W、17W)和微管肺(21W)时期的人胎肺组织,通过Real-time PCR和原位杂交技术,检测经典WNT信号通路关键基因,包括WNT配体(WNT2、WNT7B),WNT受体(FZD4、FZD7、LRP5、LRP6),WNT信号通路调控器(DVL2、DVL3、GSK-3β, β-CATENIN、APC,AXIN2),WNT信号通路下游转录因子(TCF4、LEF1)以及WNT信号通路拮抗物(SOSTDC1)的表达模式,为阐明经典WNT信号通路调控人肺器官发育机制奠定基础。首先Real-time PCR结果显示,经典WNT信号通路关键基因在人胎肺发育4个时期(7W、12W、17W和21W)均有表达,其中WNT2.D VL2、GSK-3β,β-CATENIN,APC、TCF4及LEF1从7W到12W表达量逐渐下调,从12W到17W开始升高,但在21W又显着下调；LRP5、LRP6、DVL3、AXIN2和SOSTDC1从7W、12W到17W表达量逐渐升高,但到21W又显着下调；WNT7B和FZD7从7W到12W表达量升高,但从12W到21W又逐渐下降。其次原位杂交结果显示,除了经典WNT信号通路调控器DVL3、β-CATENIN, AXIN2及下游转录因子TCF4在胎肺近端气管及远端肺泡上皮和间充质中均有表达外,其余经典WNT信号通路调控器仅在胎月市气管分支及远端肺泡上皮表达。此外,我们利用小分子化合物CHIR-99021刺激15周的人胎肺组织以激活经典WNT信号通路,Western Blot、Real-time PCR及组织病理检测证实经典WNT信号通路被激活,并且过度激活的WNT信号致使人胎肺近远端肺部上皮细胞由矮柱状向高柱状的早期细胞状态退化。总之,我们的研究表明,经典WNT信号通路对人胎肺气管的分支形态及上皮细胞的分化均起着重要的调控作用,这将为研究经典WNT信号通路调控人胎肺发育的分子机制及相关肺部疾病的诊疗奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人胎肺论文参考文献
[1].范存刚,周景儒,张庆俊.人胎肺间充质干细胞的分离[J].山东医药.2013
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[5].王铭杰,罗自强,吕梅,周京林,曹传顶.NMDA受体激活介导人胎肺成纤维细胞胶原分泌与降解[C].中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集.2010
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