5种致泻大肠埃希氏菌实时荧光定量PCR快速检测技术

论文摘要

将5种致泻大肠埃希氏菌的毒力基因保守序列进行设计并合成了引物和探针,建立的多重实时荧光PCR4种试剂盒可以同时检测5种致泻大肠埃希氏菌。结果表明:4种试剂盒的12对毒力基因通过5种致泻大肠埃希氏菌的标准储备菌株均得到验证;并且12对毒力基因只对对应的致泻大肠埃希氏菌特异性起作用,对常见的食源性致病菌都无扩增曲线;escV、bfpB、stx1、ipaH和invE基因的检出限是10CFU/mL,aggR基因的检出限是102CFU/mL,astA和pic基因的检出限是103CFU/mL,而stx2A、ipaH和stIb基因菌液浓度<10CFU/mL时,均可观察到明显的"S"型扩增曲线,且线形较好;并且对抽查和委托检验的肉类、奶和动物腹泻物以及人工污染样品等40份样品进行检测,共检出11份阳性样本,与GB 4789.6—2016标准检测结果相一致,表明建立的4种试剂盒方法具有良好的实用性。

论文目录

• 1材料和方法
•   1.1材料与仪器设备
•   1.2引物和探针的设计与合成
•   1.3模板制备
•     1.3.1菌种活化和计数
•     1.3.2核酸提取
•   1.4实时荧光PCR扩增体系建立
•   1.5特异性分析
•   1.6灵敏度分析
•   1.7与商品化PCR试剂盒对比分析
•   1.8大量样本验证
•   1.9数据分析
• 2结果与分析
•   2.1检测5种致泻大肠埃希氏菌标准储备菌株的结果
•   2.2检测5种致泻大肠埃希氏标准储备菌株毒力基因的结果
•   2.3检测4种试剂盒的特异性试验
•   2.4检测4种试剂盒的灵敏度试验
•   2.5 4种试剂盒与普通PCR法的试剂盒比对试验
•   2.6对污染较严重和人工污染样品进行检测
• 3结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王芳妹,钟文涛,王淑好,卢琳,韩奉玲

关键词: 致泻大肠埃希氏菌,实时荧光定量,毒力基因

来源: 食品与机械 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学,轻工业手工业

单位: 湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南师范大学生命科学学院,湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室

基金: 湖南省质量技术监督局质监科技计划项目(编号:2018KJJH08)

分类号: O657.3;TS207.4

DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.05.016

页码: 88-95

总页数: 8

文件大小: 2392K

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